PD-L1制造技术

本发明专利技术提供抗

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】PD
‑
L1抗体、融合蛋白及其用途
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求于
2020
年9月
16
日提交
、
申请号为
PCT/CN2020/115572、
于
2020
年
11
月
10
日提交
、
申请号为
PCT/CN2020/127811
和于
2020
年
11
月
30
日提交
、
申请号为
PCT/CN2020/132740
的国际专利的优先权，这些在先申请的全部内容通过引用并入本申请中
。


[0002]本专利技术涉及分子生物学
、
细胞生物学和癌症生物学领域
。

技术介绍

[0003]免疫抑制的程序性死亡受体
‑
1/
程序性死亡受体配体
1(PD
‑
1/PD
‑
L1)
信号通路和转化生长因子
‑
β
(TGF
β
)
信号传导通路是癌症治疗中的已知标靶
。
然而，目前针对其中一种或两种通路的疗法取得的成功有限
。
因此，额外的
PD
‑
1/PD
‑
L1
和
/
或
TGF/>β
靶向治疗方案代表了未满足的需求
。
本专利技术中提供的组合物和方法满足这些需求并且提供相对的优势
。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供融合蛋白，其包含
(1)
第一结构域，所述第一结构域包含结合程序性死亡受体配体
1(PD
‑
L1)
的抗体或其抗原结合片段，
(2)
转铁蛋白连接子，和
(3)
第二结构域，所述第二结构域包含结合转化生长因子
β
(TGF
β
)
的转化生长因子
β2型受体
(TGF
β
RII)
的片段或其变体
。
[0005]在本文提供的融合蛋白的某些实施方式中，转铁蛋白连接子连接第一结构域的
C
末端与第二结构域的
N
末端
。
在某些实施方式中，转铁蛋白连接子为
(PEAPTD)m
，
m
＝
1、2、3、4
或
5(SEQ ID NO:18)
，或
(PEAPTDE)n
，
n
＝
1、2、3、4
或
5(SEQ ID NO:19)。
在某些实施方式中，转铁蛋白连接子具有选自由
SEQ ID NOs:220
‑
230
所示序列组成的群组中的氨基酸序列
。
在某些实施方式中，转铁蛋白连接子为
(PEAPTD)3(SEQ ID NO:147)。
[0006]在本文提供的融合蛋白的某些实施方式中，第二结构域包含
TGF
β
RII
异型体1的
ECD(SEQ ID NO:8)
或
TGF
β
RII
异型体2的
ECD(SEQ ID NO:14)
或与
SEQ ID NO:8
或
14
具有至少
85
％
、
至少
90
％
、
至少
95
％或至少
98
％序列同一性的变体
。
在某些实施方式中，第二结构域具有
SEQ ID NO:8
的氨基酸序列
。
在某些实施方式中，第二结构域具有
SEQ ID NO:9
的氨基酸序列
。
在某些实施方式中，第二结构域包含
TGF
β
RII
异型体1的
ECD(SEQ ID NO:8)
的变体，其中所述变体在
SEQ ID NO:8
的
Q6、K7、N19
或
G20
处包含氨基酸突变
。
在某些实施方式中，第二结构域具有选自由
SEQ ID NOs:201
‑
203
所示序列组成的群组中的氨基酸序列
。
[0007]在某些实施方式中，第二结构域包含
TGF
β
RII
异型体1的
ECD(SEQ ID NO:8)
的截短形式或其变体，所述截短形式缺少
SEQ ID NO:8
的1至
n
氨基酸残基，其中
n
在2至
30
的范围内
。
在某些实施方式中，
n
为
19。
在某些实施方式中，第二结构域包含
TGF
β
RII
异型体1的
ECD(SEQ ID NO:8)
的截短形式或其变体，所述截短形式缺少
SEQ ID NO:8
的
m
至
136
氨基酸残基，其中
m
在
80
至
135
的范围内
。
在某些实施方式中，
m
为
131。
在某些实施方式中，
m
为
128。
在
某些实施方式中，第二结构域具有选自由
SEQ ID NOs:204、205
和
232
所示序列组成的群组中的氨基酸序列
。
[0008]在本文提供的融合蛋白的某些实施方式中，第一结构域为
PD
‑
L1
抗体，所述
PD
‑
L1
抗体选自由度伐利尤单抗
(durvalumab)、
阿维鲁单抗
(avelumab)、
阿替利珠单抗
(atezolizumab)、
恩沃利单抗
(envafolimab)、BMS
‑
936559、CK
‑
301、CS
‑
1001、SHR
‑
1316
和
BGB
‑
A333
组成的群组
。
[0009]本文还提供结合
PD
‑
L1
的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种融合蛋白，其包含
(1)
第一结构域，所述第一结构域包含结合程序性死亡配体
1(PD
‑
L1)
的抗体或其抗原结合片段，
(2)
转铁蛋白连接子，和
(3)
第二结构域，所述第二结构域包含结合转化生长因子
β
(TGF
β
)
的转化生长因子
β2型受体
(TGF
β
RII)
的片段或其变体
。2.
根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述转铁蛋白连接子连接所述第一结构域的
C
末端与所述第二结构域的
N
末端
。3.
根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述转铁蛋白连接子为
(PEAPTD)m
，
m
＝
1、2、3、4
或
5(SEQ ID NO:18)
或
(PEAPTDE)n
，
n
＝
1、2、3、4
或
5(SEQ ID NO:19)
，或具有选自由
SEQ ID NOs:220
‑
230
所示序列组成的群组中的氨基酸序列
。4.
根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述转铁蛋白连接子为
(PEAPTD)3(SEQ ID NO:147)。5.
根据权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二结构域包含
TGF
β
RII
异型体1的
ECD(SEQ ID NO:8)
或
TGF
β
RII
异型体2的
ECD(SEQ ID NO:14)
，或其与
SEQ ID NO:8
或
14
具有至少
85
％
、
至少
90
％
、
至少
95
％或至少
98
％序列同一性的变体
。6.
根据权利要求5所述的融合蛋白，其中所述第二结构域具有
SEQ ID NO:8
所示的氨基酸序列
。7.
根据权利要求5所述的融合蛋白，其中所述第二结构域具有
SEQ ID NO:9
所示的氨基酸序列
。8.
根据权利要求5所述的融合蛋白，其中所述第二结构域包含
TGF
β
RII
异型体1的
ECD(SEQ ID NO:8)
的变体，其中所述变体在
SEQ ID NO:8
的
Q6、K7、N19
或
G20
处包含氨基酸突变
。9.
根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述第二结构域具有选自由
SEQ ID NOs:201
‑
203
所示序列组成的群组中的氨基酸序列
。10.
根据权利要求5所述的融合蛋白，其中所述第二结构域包含
TGF
β
RII
异型体1的
ECD(SEQ ID NO:8)
的截短形式或其变体，所述截短形式缺少
SEQ ID NO:8
的1至
n
位氨基酸残基，其中
n
在2至
30
的范围内
。11.
根据权利要求
10
所述的融合蛋白，其中
n
为
19。12.
根据权利要求5所述的融合蛋白，其中所述第二结构域包含
TGF
β
RII
异型体1的
ECD(SEQ ID NO:8)
的截短形式或其变体，所述截短形式缺少
SEQ ID NO:8
的
m
至
136
位氨基酸残基，其中
m
在
80
至
135
的范围内
。13.
根据权利要求
12
所述的融合蛋白，其中
m
为
131。14.
根据权利要求
12
所述的融合蛋白，其中
m
为
128。15.
根据权利要求
14
所述的融合蛋白，其中所述第二结构域具有选自由
SEQ ID NOs:204、205
和
232
所示序列组成的群组中的氨基酸序列
。16.
根据权利要求1至
15
中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一结构域为选自由度伐利尤单抗
、
阿维鲁单抗
、
阿替利珠单抗
、
恩沃利单抗
、BMS
‑
936559、CK
‑
301、CS
‑
1001、SHR
‑
1316
和
BGB
‑
A333
组成的群组的
PD
‑
L1
抗体
。17.
一种结合
PD
‑
L1
的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)
重链可变区
(VH)
，所述重链可变区包含
(1)
具有选自由
SEQ ID NOs:20、26、32、38、44、50、56、62、68、74、80、86
和
92
所示序列组
成的群组中的氨基酸序列的重链
CDR1(VH CDR1)
；
(2)
具有选自由
SEQ ID NOs:21、27、33、39、45、51、57、63、69、75、81、87
和
93
所示序列组成的群组中的氨基酸序列的重链
CDR2(VH CDR2)
；和
(3)
具有选自由
SEQ ID NOs:22、28、34、40、46、52、58、64、70、76、82、89
和
94
所示序列组成的群组中的氨基酸序列的重链
CDR3(VH CDR3)
；或其在所述
VH CDRs
中具有最多约5个氨基酸取代
、
添加和
/
或缺失的变体；和
/
或
(b)
轻链可变区
(VL)
，所述轻链可变区包含
(1)
具有选自由
SEQ ID NOs:23、29、35、41、47、53、59、65、71、77、83、89
和
95
所示序列组成的群组中的氨基酸序列的轻链
CDR1(VL CDR1)
；
(2)
具有选自由
SEQ ID NOs:24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90
和
96
所示序列组成的群组中的氨基酸序列的轻链
CDR2(VL CDR2)
；和
(3)
具有选自由
SEQ ID NOs:25、31、37、43、49、55、61、67、63、79、85、91
和
97
所示序列组成的群组中的氨基酸序列的轻链
CDR3(VL CDR3)
；或其在所述
VL CDRs
中具有最多约5个氨基酸取代
、
添加和
/
或缺失的变体
。18.
根据权利要求
17
所述的抗体或抗原结合片段，其中
(a)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有：
(1)SEQ ID NOs:20、21
和
22
所示的氨基酸序列；
(2)SEQ ID NOs:26、27
和
28
所示的氨基酸序列；
(3)SEQ ID NOs:32、33
和
34
所示的氨基酸序列；
(4)SEQ ID NOs:38、39
和
40
所示的氨基酸序列；
(5)SEQ ID NOs:44、45
和
46
所示的氨基酸序列；
(6)SEQ ID NOs:50、51
和
52
所示的氨基酸序列；
(7)SEQ ID NOs:56、57
和
58
所示的氨基酸序列；
(8)SEQ ID NOs:62、63
和
64
所示的氨基酸序列；
(9)SEQ ID NOs:68、69
和
70
所示的氨基酸序列；
(10)SEQ ID NOs:74、75
和
76
所示的氨基酸序列；
(11)SEQ ID NOs:80、81
和
82
所示的氨基酸序列；
(12)SEQ ID NOs:86、87
和
88
所示的氨基酸序列；或
(13)SEQ ID NOs:92、93
和
94
所示的氨基酸序列；或其在所述
VH CDRs
中具有最多约5个氨基酸取代
、
添加和
/
或缺失的变体；和
/
或
(b)
所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有：
(1)SEQ ID NOs:23、24
和
25
所示的氨基酸序列；
(2)SEQ ID NOs:29、30
和
31
所示的氨基酸序列；
(3)SEQ ID NOs:35、36
和
37
所示的氨基酸序列；
(4)SEQ ID NOs:41、42
和
43
所示的氨基酸序列；
(5)SEQ ID NOs:47、48
和
49
所示的氨基酸序列；
(6)SEQ ID NOs:53、54
和
55
所示的氨基酸序列；
(7)SEQ ID NOs:59、60
和
61
所示的氨基酸序列；
(8)SEQ ID NOs:65、66
和
67
所示的氨基酸序列；
(9)SEQ ID NOs:71、72
和
73
所示的氨基酸序列；
(10)SEQ ID NOs:77、78
和
79
所示的氨基酸序列；
(11)SEQ ID NOs:83、84
和
85
所示的氨基酸序列；
(12)SEQ ID NOs:89、90
和
91
所示的氨基酸序列；或
(13)SEQ ID NOs:95、96
和
97
所示的氨基酸序列；或其在所述
VL CDRs
中具有最多约5个氨基酸取代
、
添加和
/
或缺失的变体
。19.
根据权利要求
17
所述的抗体或抗原结合片段，其中
(1)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:20、21
和
22
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:23、24
和
25
所示的氨基酸序列；
(2)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:26、27
和
28
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:29、30
和
31
所示的氨基酸序列；
(3)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:32、33
和
34
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:35、36
和
37
所示的氨基酸序列；
(4)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:38、39
和
40
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:41、42
和
43
所示的氨基酸序列；
(5)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:44、45
和
46
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:47、48
和
49
所示的氨基酸序列；
(6)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:50、51
和
52
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:53、54
和
55
所示的氨基酸序列；
(7)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:56、57
和
58
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:59、60
和
61
所示的氨基酸序列；
(8)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:62、63
和
64
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:65、66
和
67
所示的氨基酸序列；
(9)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:68、69
和
70
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:71、72
和
73
所示的氨基酸序列；
(10)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:74、75
和
76
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:77、78
和
79
所示的氨基酸序列；
(11)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:80、81
和
82
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:83、84
和
85
所示的氨基酸序列；
(12)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:86、87
和
88
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:89、90
和
91
所示的氨基酸序列；或
(13)
所述
VH CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:92、93
和
94
所示的氨基酸序列；和
/
或所述
VL CDR1、CDR2
和
CDR3
分别具有
SEQ ID NOs:95、96
和
97
所示的氨基酸序列
。20.
根据权利要求
17
所述的抗体或抗原结合片段，其包含
(a)
具有
SEQ ID NO:26
所示的氨基酸序列的
VH CDR1
；具有
SEQ ID NO:27
所示的氨基酸序列的
VH CDR2
；和具有
SEQ ID NO:28
所示的氨基酸序列的
VH CDR3
；和
(b)
具有
SEQ ID NO:29
所示的氨基酸序列的
VL CDR1
；具有
SEQ ID NO:30
所示的氨基酸序列的
VL CDR2
；和具有
SEQ ID NO:31
所示的氨基酸序列的
VL CDR3。21.
根据权利要求
17
所述的抗体或抗原结合片段，其包含
(a)
具有
SEQ ID NO:38
所示的氨基酸序列的
VH CDR1
；具有
SEQ ID NO:39
所示的氨基酸序列的
VH CDR2
；和具有
SEQ ID NO:40
所示的氨基酸序列的
VH CDR3
；和
(b)
具有
SEQ ID NO:41
所示的氨基酸序列的
VL CDR1
；具有
SEQ ID NO:42
所示的氨基酸序列的
VL CDR2
；和具有
SEQ ID NO:43
所示的氨基酸序列的
VL CDR3。22.
根据权利要求
17
所述的抗体或抗原结合片段，其包含
(a)
具有
SEQ ID NO:32
所示的氨基酸序列的
VH CDR1
；具有
SEQ ID NO:33
所示的氨基酸序列的
VH CDR2
；和具有
SEQ ID NO:34
所示的氨基酸序列的
VH CDR3
；和
(b)
具有
SEQ ID NO:35
所示的氨基酸序列的
VL CDR1
；具有
SEQ ID NO:36
所示的氨基酸序列的
VL CDR2
；和具有
SEQ ID NO:37
所示的氨基酸序列的
VL CDR3。23.
一种结合
PD
‑
L1
的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)
与选自由
SEQ ID NOs:98
‑
110、124、126
‑
128、131
‑
136
和
174
‑
178
所示序列组成的群组中的氨基酸序列具有至少
85
％
、
至少
90
％
、
至少
95
％
、
至少
98
％或
100
％序列同一性的
VH
；和
/
或
(b)
与选自由
SEQ ID NOs:111
‑
123、125、129
‑
130、137
‑
144
和
179
‑
181
所示序列组成的群组中的氨基酸序列具有至少
85
％
、
至少
90
％
、
至少
95
％
、
至少
98
％或
100
％序列同一性的
VL。24.
根据权利要求
23
所述的抗体或抗原结合片段，其包含
VH
和
VL
，其中所述
VH
和
VL
分别具有：
(1)SEQ ID NOs:98
和
111
所示的氨基酸序列；
(2)SEQ ID NOs:99
和
112
所示的氨基酸序列；
(3)SEQ ID NOs:100
和
113
所示的氨基酸序列；
(4)SEQ ID NOs:101
和
114
所示的氨基酸序列；
(5)SEQ ID NOs:102
和
115
所示的氨基酸序列；
(6)SEQ ID NOs:103
和
116
所示的氨基酸序列；
(7)SEQ ID NOs:104
和
117
所示的氨基酸序列；
(8)SEQ ID NOs:105
和
118
所示的氨基酸序列；
(9)SEQ ID NOs:106
和
119
所示的氨基酸序列；
(10)SEQ ID NOs:107
和
120
所示的氨基酸序列；
(11)SEQ ID NOs:108
和
121
所示的氨基酸序列；
(12)SEQ ID NOs:109
和
122
所示的氨基酸序列；
(13)SEQ ID NOs:110
和
123
所示的氨基酸序列；或
(14)SEQ ID NOs:124
和
125
所示的氨基酸序列
。25.
根据权利要求
23
所述的抗体或抗原结合片段，其中所述
VH
具有选自由
SEQ ID NOs:126
‑
128
所示序列组成的群组中的氨基酸序列，和
/
或其中所述
VL
具有
SEQ ID NO:129
或
130
所示的氨基酸序列
。26.
根据权利要求
23
所述的抗体或抗原结合片段，其中所述
VH
具有选自由
SEQ ID NOs:131
‑
136
所示序列组成的群组中的氨基酸序列，和
/
或其中所述
VL
具有选自由
SEQ ID NOs:137
‑
144
所示序列组成的群组中的氨基酸序列
。27.
根据权利要求
23
所述的抗体或抗原结合片段，其中所述
VH
具有选自由
SEQ ID NOs:
174
‑
178
所示序列组成的群组中的氨基酸序列，和
/
或其中所述
VL
具有选自由
SEQ ID NOs:179
‑
181
所示序列组成的群组中的氨基酸序列
。28.
一种结合
PD
‑
L1
的抗体或其抗原结合片段，其包含
(a)VH
，所述
VH
包含
VH...

【专利技术属性】
技术研发人员：王彬彬，王东，董金瑜，张煜，周舟，邵烈刚，赵连颀，董欣，王白杨，
申请(专利权)人：苏州逻晟生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：