一种哈维氏弧菌检测试剂盒制造技术

本发明专利技术的目的是针对现有技术中设备集成度不高的问题，提供一种哈维氏弧菌检测试剂盒，包括试剂盒和检测结构，检测结构包括底座

【技术实现步骤摘要】
一种哈维氏弧菌检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及快速检测哈维氏弧菌
，具体为一种哈维氏弧菌检测试剂盒
。

技术介绍

[0002]哈维氏弧菌
(V.harveyi)
是一种广布于世界各地的靠海河道
、
海湾和海岸线区域以及海产品中的发光弧菌
。
此菌是一种条件致病菌，在一定条件下可暴发流行
。
近年来，我国沿海地区因哈维氏弧菌引起海产品发病或大面积死亡的报道日益增多
。
目前已知哈维氏弧菌可感染鲈鱼
、
大黄鱼
、
斑节对虾
、
墨吉对虾
、
石斑鱼等多类水产品，给水产养殖业带来较大的危害
。
哈维氏弧菌引起的细菌性疾病具有暴发快
、
流行广
、
死亡率高等特点，由于细菌极易对抗生素产生抗药性，因此对哈维氏弧菌病应以预防为主，而这主要依赖于早期的快速检测
。
目前对弧菌的检测技术主要包括传统的
TCBS
培养及进一步的形态及生理生化鉴定法
、
免疫学方法
(
主要有单克隆抗体技术
、
酶联免疫检测法
(ELISA))、
免疫电镜技术
、
分子生物学方法
(
主要有分子杂交技术
、
限制性内切酶长度多态
(RELP))
等
。
这些检测方法有些对技术条件要求高，检测时间长
。
有些所需的材料制备麻烦，费用高，有些方法灵敏度不高，特异性不强，因此广大医务人员和水产养殖业主掌握的技术难度很大，很难推广，限制了这些技术的应用和发展
。
[0003]早期快速检测哈维氏弧菌，是目前预防此类弧菌病暴发流行的主要措施和水产经济动物养殖业减少损失的有效途径，因此，简便快速
、
特异性好又灵敏度高的检测试剂盒及其检测方法是广大医务工作者和水产养殖者急切盼望的
。
[0004]多聚酶链式反应
(polymerasechainreaction
，简称
PCR
技术
)
，是上世纪
80
年代发展起来的一种体外扩增特异
DNA
片段的技术，由于具有快速
、
敏感
、
特异性强等特点，所以这种方法建立后，很快就被应用于实践中；申请号为
200610124271.3
的中国专利公开了一种快速检测哈维氏弧菌
(Vibrioharveyi)
的试剂盒及检测方法
。
该试剂盒及检测方法是以哈维氏弧菌耐热直接溶血毒素
(gyrB)
基因保守区序列设计的一对引物为主体而设计的
。
本专利技术采用聚合酶链式反应
(PCR)
技术，对海洋水产病原菌
—
哈维氏弧菌的特异性
DNA
片段进行定性检测，简便快速，特异性好，灵敏度高；可用于水产动物各时期养殖过程中的哈维氏弧菌跟踪检测，还可以用于环境监测，避免病菌传播流行，具有很高的实用价值；但此装置在实际使用过程中仍存在一些不足之处：该试剂盒设备集成度不高，使用过程中会涉及热水浴
、
特异片增长等步骤，需要使用到酒精灯，热循环仪等多种设备，检测时，工作人员需要拿着试剂在这些设备之间来回走动，十分耗费体力，并且移动试剂时容易出现撒漏，影响检测结果
。
[0005]因此迫切地需要重新设计以解决上述问题
。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是针对现有技术中设备集成度不高的问题，提供一种哈维氏弧菌检
测试剂盒
。
[0007]本专利技术提供了一种哈维氏弧菌检测试剂盒，包括试剂盒和检测结构，检测结构包括底座
、
沸水浴池
、
热循环位
、
观察位
、
紫外线灯和灯架；底座上设置开有三个盲槽，三个盲槽中分别设置沸水浴池
、
观察位和热循环位，沸水浴池中设置有加热机构和纯净水，加热机构可以保持沸水浴池中的纯净水处于沸腾状态，观察位中设置可以固定试剂瓶的固定装置，热循环位中设置有加热机构且可在
60
‑
100℃
之间的任意温度保持恒温，灯架固定安装在底座上，紫外线灯通过连接于灯架上进而设置在观察位正上方，紫外线灯的光线朝向观察位
。
[0008]可选地，灯架上开有滑槽，紫外线灯通过所述滑槽滑动连接于灯架
。
[0009]可选地，检测结构还包括滑动保护盖，滑动保护盖滑动连接于底座
。
[0010]可选地，试剂盒由如下试剂组成：
(a)DNA
提取试剂：含缓冲试剂
A
和细胞裂解试剂
B
，试剂
A
：含有
NaCl0.1
‑
0.3M、pH8.0
的三羟基甲基氨基甲烷1‑
100mM、pH8.0
的乙二胺四乙酸
0.1
‑
10mM
和
V/V
浓度为0‑
20
％的曲拉通
X
‑
100
；试剂
B
：含有浓度为1‑
10mg/ml
的溶菌酶和
pH8.0、
浓度为1‑
100mM
的三羟基甲基氨基甲烷；
(b)
聚合酶链式反应试剂：含有反应预混试剂
C
和反应引物试剂
D
，试剂
C
：含有
10
倍聚合酶链式反应缓冲液
、
热聚合酶和灭菌双蒸水，含量分别为
2.5
‑
5.0
μ
l、0.5
‑
2.5
个单位和
18
‑
35.5
μ
l
；试剂
D
：含有特异引物对
VhF
和
VhR、
脱氧核苷酸及
MgCl2
，含量分别为
0.2
‑1μ
M
和
0.2
‑1μ
M、20
‑
200
μ
M
及
0.5
‑
10mM
；
(c)
电泳和显色试剂，含有试剂
E
和试剂
F
，试剂
E
：为
50
倍电泳缓冲液，含三羟基甲基氨基甲烷
‑
乙酸和乙二胺四乙酸，浓度分别为
0.04M
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种哈维氏弧菌检测试剂盒，其特征在于，包括：试剂盒和检测结构，检测结构包括底座
、
沸水浴池（1）
、
热循环位（2）
、
观察位（3）
、
紫外线灯（4）和灯架（5）；底座上设置开有三个盲槽，三个盲槽中分别设置沸水浴池（1）
、
观察位（3）和热循环位（2），沸水浴池（1）中设置有加热机构和纯净水，加热机构可以保持沸水浴池（1）中的纯净水处于沸腾状态，观察位（3）中设置可以固定试剂瓶的固定装置，热循环位（2）中设置有加热机构，灯架（5）固定安装在底座上，紫外线灯（4）通过连接于灯架（5）上进而设置在观察位（3）正上方，紫外线灯（4）的光线朝向观察位
。2.
根据权利要求1所述的一种哈维氏弧菌检测试剂盒，其特征在于，灯架上开有滑槽（
501
），紫外线灯（4）通过所述滑槽（
501
）滑动连接于灯架（5）
。3.
根据权利要求1所述的一种哈维氏弧菌检测试剂盒，其特征在于，检测结构还包括滑动保护盖（6），滑动保护盖（6）滑动连接于底座
。4.
根据权利要求1所述的一种哈维氏弧菌检测试剂盒，其特征在于，试剂盒由如下试剂组成：
(a)DNA
提取试剂：含缓冲试剂
A
和细胞裂解试剂
B
，试剂
A
：含有
NaCl0.1
‑
0.3M、pH8.0
的三羟基甲基氨基甲烷1‑
100mM、pH8.0
的乙二胺四乙酸
0.1
‑
10mM
和
V/V
浓度为0‑
20
％的曲拉通
X
‑
100
；试剂
B
：含有浓度为1‑
10mg/ml
的溶菌酶和
pH8.0、
浓度为1‑
100mM
的三羟基甲基氨基甲烷；
(b)
聚合酶链式反应试剂：含有反应预混试剂
C
和反应引物试剂
D
，试剂
C
：含有
10
倍聚合酶链式反应缓冲液
、
热聚合酶和灭菌双蒸水，含量分别为
...

【专利技术属性】
技术研发人员：何忆晗，
申请(专利权)人：中璞软件海南有限公司，
类型：发明
国别省市：