一种抗虫蛋白杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗虫蛋白

【技术实现步骤摘要】
一种抗虫蛋白杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用


[0001]本专利技术涉及生物工程领域，具体涉及到一种抗虫蛋白
Cry 1Ah
杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用
。

技术介绍

[0002]苏云金杆菌 (Bacillus thuringiensis
，
Bt) 是一种广泛存在的革兰氏阳性菌，该菌分泌的抗虫晶体蛋白是目前主要的生物农药
。
该抗虫晶体蛋白按照氨基酸序列相似性被分为两类：
Cry
蛋白和
Cyt
，其中
Cry
蛋白对多种有害昆虫（如鳞翅目
、
双翅目
、
鞘翅目昆虫）
、
线虫类和原生生物等的幼虫具有毒性
。Cry
蛋白已经被转入农作物使其具有抗虫性，目前转
Cry 蛋白基因的农作物主要有玉米
、
土豆
、
水稻
、
棉花等
。Cry 1Ah 蛋白是 Cry
蛋白中的一种
。
[0003]转基因技术的发展与进步推动了生物学的发展
。
转基因食品虽然能够满足人们对产量
、
抗虫性等方面的要求，但同时也对人类的生活带来了一些潜在的威胁，如某些基因导入宿主之后会使食品产生毒性；转基因食物产生过敏原，使人产生抗药性；食品的营养价值发生改变等
。
在进行转基因食品研究开发和商业化的同时，为了对转基因食品的安全性给予综合评估，使消费者能够快速区分转基因食品与天然食品，建立合适的方法对转基因食品中转基因成分进行鉴定与检测，能够促进农业转基因生物安全管理，保障人和动物以及微生物的安全，同时能够保护生态环境，促进农业转基因生物技术的进一步研究
。
因此，为了对转基因作物及其衍生物中 Cry 1Ah 蛋白进行快速分析，研究并得到抗 Cry 1Ah 蛋白的单克隆抗体具有非常大的意义
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种抗虫蛋白
Cry 1Ah
杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用，其分泌的单抗为实现转基因作物中抗虫蛋白
Cry 1Ah
的检测奠定基础
。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株
3C4 2E6
已于
2023
年2月
10
日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为
CGMCC No.45483。
[0006]具体的，该杂交瘤细胞株的制备方法包括以下步骤：
[0007]a) 纯化原核表达得到
Cry 1Ah
重组蛋白；
[0008]b) 免疫动物：将
Cry 1Ah
重组蛋白作为抗原免疫
BALB/c
小鼠；
[0009]c) 细胞融合：收集免疫
BALB/c
小鼠的脾细胞并与
SP2/0
细胞进行融合；
[0010]d) 细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5‑7天进行
ELISA
检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存
。
[0011]其中，小鼠的脾细胞与
SP2/0
细胞的融合比例为
1:5
‑
1:10。
[0012]本专利技术还提供一种前述的杂交瘤细胞株所产生的单克隆抗体，将杂交瘤细胞株接种到小鼠腹腔中制备腹水，然后进行
Protein A
‑
琼脂糖亲和层析柱纯化，得到单克隆抗体
。
[0013]具体的，杂交瘤细胞株
3C4 2E6
所产生的单克隆抗体通过间接 ELISA
检测所得到的效价为
1:3072000
，抗体的类型为
IgG1。
[0014]杂交瘤细胞株
3C4 2E6
所产生的单克隆抗体可变区重链氨基酸序列如序列表中
SEQ ID NO
：1所示序列，可变区轻链氨基酸序列如序列表中
SEQ ID NO
：2所示序列
。
具体序列为：
[0015]细胞株重链可变区氨基酸序列轻链可变区氨基酸序列
3C42E6QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNAAFISRLSIRKDISKSQVFFKINSLRVNDTAIYYCATNHGGYDGAYFSYWGQGTLVTVSADILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQSIGTTIHWYQQRTNGSPRLLIKYAFESVSGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNNWPLTFGAGTKLELKR
[0016]本专利技术还提供了上述单克隆抗体在
Cry 1Ah
抗虫蛋白定性检测中的应用
。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本申请利用原核表达纯化得到的重组抗虫蛋白
Cry 1Ah
作为抗原，通过杂交瘤技术制备了分泌抗
Cry 1Ah
的特异
、
灵敏单抗的杂交瘤细胞株
3C4 2E6
，所述细胞株分泌单抗腹水纯化后得到的抗体间接 ELISA 效价为
1: 3072000
，抗体亚型为
IgG1
，所述单抗可以特异识别转基因玉米中
Cry 1Ah
蛋白，分泌抗
Cry 1Ah
抗虫蛋白的鼠单抗杂交瘤细胞株的构建为转基因作物中该蛋白的检测提供了物质和技术支撑
。
[0018]保藏信息：
[0019]本专利技术提供的杂交瘤细胞株
3C4 2E6
，已于
2023
年2月
10
日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为
Cry1Ah
单抗杂交瘤细胞株，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
。
邮编：
100101
，保藏编号为
CGMCC No.45483。
附图说明
[0020]图1是根据本专利技术的杂交瘤细胞株
3C4 2E6
纯化的单克隆抗体的
SDS
‑
PAGE 电泳结果图；
[0021]图2是根据本专利技术的杂交瘤细胞株
3C4 2E6
所产生的单克隆抗体滴度；
[0022]图3是根据本专利技术的杂交瘤细胞株
3C4 2E6
所产生的单克隆抗体特异性检测转基因玉米中的
Cry 1Ah 的
Western
结果图；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为
CGMCC No.45483。2.
根据权利要求1所述的杂交瘤细胞株，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：
a) 纯化原核表达的
Cry 1Ah
重组蛋白；
b) 免疫动物：将
Cry 1Ah
重组蛋白作为抗原免疫
BALB/c
小鼠；
c) 细胞融合：收集免疫
BALB/c
小鼠的脾细胞并与
SP2/0
细胞进行融合；
d) 细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5‑7天进行
ELISA
检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存
。3.
根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株，其特征在于，步骤
c
）中，小鼠的脾细胞与
SP2/0
细胞的融合比例为
1:5
‑
1:10。4.
权利要求1‑3任一项所述的杂交瘤细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘卫晓，金芜军，王睿哲，孟丽霞，董美，杨秀英，高进，王迪，赵伟玲，文婷婷，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：