本发明专利技术属于农药检测领域，利用免疫化学技术快速检测残留的农药。具体地，本发明专利技术涉及一种保藏编号为ＣＧＭＣＣ?Ｎｏ．３５８０的杂交瘤细胞株，以及所述杂交瘤细胞株产生的抗福美双单克隆抗体。本发明专利技术还涉及一种检测福美双的组合物、一种检测福美双的试纸、所述试纸的制备方法、一种检测福美双的酶联免疫试剂、以及所述抗福美双单克隆抗体在检测福美双中的应用。本发明专利技术的单克隆抗体灵敏度高、特异性强。本发明专利技术的试纸具有灵敏度高、特异性强、操作简便、检测快速准确等显著优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农药检测领域，利用免疫化学技术快速检测残留的农药，具体地，本专利技术涉及一种杂交瘤细胞株，以及所述杂交瘤细胞株产生的抗福美双单克隆抗体。本专利技术还 涉及一种检测福美双的组合物、一种检测福美双的试纸、所述试纸的制备方法、一种检测福 美双的酶联免疫试剂、以及所述抗福美双单克隆抗体在检测福美双中的应用。
技术介绍
福美双(Thiram)，CAS登记号为137_26_8化学名称为四甲基秋兰姆二硫化物，属 硫代氨基甲酸酯类农药，是一种具有保护作用的杀菌剂，其抗菌谱广，可处理种子和土壤， 防治禾谷类黑穗病和多种作物的苗期立枯病，喷洒后可防治一些果树，蔬菜病害。目前对食品中福美双残留常用的检测方法主要为色谱分析方法，如高效液相色谱 法(HPLC)、气相色谱法(GC)、以及色质谱联用法(HPLC-MS-MS和GC-MS)。色谱技术对福美双检测是非常有效、准确和灵敏的，但也存在如下缺点(1)样品 预处理需要衍生化，程序繁琐费时；(2)需要专业的技术人员操作，操作人员要有丰富的相 关经验，必须了解影响色谱分析的各种干扰因素，了解所使用的预处理方法的优缺点，才能 获得可靠的分析结果；(3)需要昂贵的仪器设备辅助，难以在中小城市以及中小企业中普 及；(4)仪器维护和保养的技术要求高。保养是否得当，会直接影响分析结果的准确性；(5) 检测费用高。本专利技术制备了抗福美双单克隆抗体，并应用该抗体制备一种特异性强、灵敏度高、 操作简便、能够快速准确地检测福美双的试纸，以克服现有技术存在的缺陷。
技术实现思路
本专利技术的一个方面涉及一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCCNo. 3580，保藏日 期2010年1月13日，保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC， 地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，该杂交瘤细胞株建 议的分类命名为BALA/C小鼠抗-福美双单克隆抗体骨髓瘤杂交细胞。本专利技术的另一个方面涉及一种抗福美双单克隆抗体，其由保藏编号为CGMCC No. 3580的杂交瘤细胞株产生。该抗福美双单克隆抗体具有很好的特异性。本专利技术的还一个方面涉及一种检测福美双的组合物，其中含有上述的抗福美双单 克隆抗体。本专利技术的还一方面涉及一种检测福美双的试纸，其含有有效量的上述的抗福美双 单克隆抗体。所述抗体可以以多种方式标记，例如荧光标记。优选地，所述抗福美双单克隆 抗体用胶体金标记。在本专利技术的一个实施方案中，所述试纸具有福美双-载体蛋白偶联物构成的检测 线，优选地，所述试纸还具有抗鼠I gG抗体构成的质控线。在本专利技术中，所述检测线为福美双-载体蛋白偶联物形成的条带，所述质控线为抗鼠IgG包被形成的条带，这两个条带的宽度并不特别限定。检测线和质控线的距离并不 特别限定，优选5-8mm。在本专利技术的一个实施方案中，所述试纸包括样品垫(1)、结合垫(2)、蛋白结合膜(3)、吸水垫(4)和背衬(7)，并且所述样品垫 (1)、结合垫(2)、蛋白结合膜(3)、吸水垫(4)沿水平方向依次粘附在背衬(7)上(如图2 所示)；其特征在于，所述结合垫(2)上包被有上述的抗福美双单克隆抗体，所述抗福美双单克隆抗体 用胶体金标记；所述蛋白结合膜(3)上分别包被有福美双-载体蛋白偶联物构成的检测线(5)和 抗鼠IgG抗体构成的质控线(6)。优选地，所述检测线(5)与质控线(6)的间距为5-8mm。在本专利技术中，所述蛋白结合膜的作用为结合包被的蛋白(例如，福美双-载体蛋白 偶联物或者抗体)，然后包被的蛋白与待检测物质反应，因此可以选用具有该作用的任何材 料，包括但不限于硝酸纤维素膜、PVDF膜等。优选地，蛋白结合膜为硝酸纤维素膜。在本专利技术中，所述载体蛋白为能够与福美双偶联的任何蛋白，包括但是不限于人 血清白蛋白、牛血清白蛋白、或卵清蛋白。优选地，载体蛋白为牛血清白蛋白。在本专利技术中，所述背衬可以选用多种起支持作用的材料，例如，其可以是PVC背 衬。本专利技术选用福美双-载体蛋白偶联物作为检测线，抗福美双特异性单克隆抗体 作为胶体金标记的抗体，利用竞争法来检测待测样品中是否含有福美双，通过待测样品中 的福美双与包被于蛋白结合膜上的福美双-载体蛋白偶联物共同竞争抗福美双单克隆抗 体-胶体金标记物，由于胶体金颗粒的不同程度的堆积，在检测线处出现颜色深浅不同的 红色条带或不出现条带，质控线处出现红色条带。若待测样品试纸检测不出现条带，同时质 控线上出现红色条带则判断为阳性样品，即待测样品中福美双的浓度高于500ppb ；若待测 样品试纸检测出现了红色条带，同时质控线上出现红色条带则判断待测样品中福美双的浓 度低于500ppb ；如果质控线上没有出现红色条带，则该试纸无效(如图3所示)。本专利技术的总体技术路线图如图1所示。上述试纸的制备方法，包括如下步骤1)将福美双与载体蛋白偶联，形成福美双-载体蛋白偶联物；2)用福美双-载体蛋白偶联物作为抗原制备上述的抗福美双单克隆抗体；3)制备抗鼠IgG抗体；4)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；5)将步骤2)中制备的抗福美双单克隆抗体加入步骤4)制备的胶体金中，得到抗 福美双单克隆抗体_胶体金标记物；6)将抗福美双单克隆抗体_胶体金标记物包被在结合垫(2)上；7)将福美双-载体蛋白偶联物包被在蛋白结合膜(3)上构成检测线(5)；并将抗 鼠IgG包被在蛋白结合膜(3)上构成质控线(6)；8)在所述的PVC背衬(7)上沿水平方向依次粘附样品垫⑴、结合垫(2)、蛋白结 合膜(3)、吸水垫(4)。在本专利技术中，所述蛋白结合膜的作用为结合包被的蛋白(例如，福美双-载体蛋白 偶联物或者抗体)，然后让包被的蛋白与待检测物质反应，因此可以选用具有该作用的任何 材料，包括但不限于硝酸纤维素膜、PVDF膜等。优选地，蛋白结合膜为硝酸纤维素膜。在本专利技术中，所述载体蛋白为能够与福美双偶联的任何蛋白，包括但是不限于人 血清白蛋白、牛血清白蛋白、或卵清蛋白。优选地，载体蛋白为牛血清白蛋白。在本专利技术中，所述背衬可以选用多种起支持作用的材料，例如，其可以是PVC背 衬。在本专利技术的一个实施方案中，步骤3)中的所述抗鼠IgG抗体为兔抗鼠IgG抗体。本专利技术的还一方面涉及一种检测福美双的酶联免疫试剂，其本专利技术的抗福美双单 克隆抗体作为第一抗体。本专利技术的还一方面涉及抗福美双单克隆抗体在检测福美双中的应用。本专利技术的还一方面涉及抗福美双单克隆抗体在检测蔬菜或水果中的福美双中的 应用。专利技术的有益效果与现有技术相比，本专利技术具有以下突出优点1.本专利技术的抗福美双单克隆抗体具有很好的特异性和灵敏度。2.本专利技术的检测福美双的免疫胶体金试纸，特异性强，灵敏度高，特别是检测时间 短，大约为20分钟，而现有色谱检测至少需要2个小时以上。3.本专利技术的检测试纸不需要任何特殊仪器、设备，检测成本低。4.本专利技术的检测试纸操作简便，不需由专业人员进行操作。5.本专利技术的检测试纸储存方便、稳定，对温度要求不高，在4_8°C下有效保存期可 达一年；在室温下可保存六个月。附图说明图1 本专利技术技术路线图。图2 本专利技术的检测试纸的示意图。其中1为样品垫，2为结合垫，3为蛋白结合 膜，4为吸收垫，5为检测线，6为质控线，7为背衬。图3 本专利技术检测试纸结果判定的示意图。A为阴性结本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为ＣＧＭＣＣＮｏ．３５８０，保藏日期２０１０年０１月１３日，保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王金花，罗海峰，
申请(专利权)人：中华人民共和国北京出入境检验检疫局，北京万泰生物药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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