一种灌流培养制造技术

本发明专利技术公开一种灌流培养

【技术实现步骤摘要】
一种灌流培养CHO细胞制备抗PCSK9抗体的方法


[0001]本专利技术属于生物制药
，涉及一种灌流培养
CHO
细胞制备抗
PCSK9
抗体的方法
。

技术介绍

[0002]灌流培养常用培养方式是将搅拌式生物反应器与细胞截留系统通过管道相连接，在高压空气与真空泵抽负压的作用下带动截留系统中硅胶隔膜往复运动，进而带动细胞培养液在中空纤维柱和反应器之间往复运动，在连续补入新鲜的培养基的同时将代谢产生的代谢废物如乳酸和氨等不断排出，而细胞由于直径大于中空纤维膜孔径，故被截留在反应器内
。
与传统批次培养相比，灌流培养方式能够为细胞提供较为温和的生长环境，具备高细胞密度
、
高细胞活率
、
高产量的特点，能够凭借小型生物反应器规模达到补料批次培养大规模生产所得的蛋白量，实现了培养规模小型化，增加了操作的灵活度
。
[0003]灌流培养法是目前用于哺乳动物细胞培养生产分泌型重组治疗性药物如单克隆抗体
、
嵌合抗体及人源化抗体等基因工程抗体的主要方式之一，但由于哺乳动物细胞体外培养的复杂性，常会出现细胞维持时间短
、
密度及活动低的问题
。
[0004]重组全人源抗
PCSK9
单克隆抗体是天士力生物医药有限公司天津分公司研究开发的治疗用生物制品1类新药，能特异性结合前蛋白转化酶枯草溶菌素
9(proprotein convertasesubtilisin/kexin type 9
，
PCSK9)
，有效抑制
PCSK9
的功能
、
降低血浆中低密度脂蛋白胆固醇
(LDL
‑
C)
水平，用于治疗高胆固醇血症，解决他汀类药物副作用和已接受最大耐受量他汀类药物治疗但
LDL
‑
C
仍未达标的患者，从而显著降低动脉粥样硬化性心血管疾病
(ASCVD)
的发病及死亡风险，但针对
PCSK9
的抗体的灌流培养生产过程中同样面临上述问题
。
[0005]综上所述，如何提供一种能够实现高细胞密度的灌流培养
CHO
细胞制备抗体的方法，并显著提高抗体产量，对于制备抗
PCSK9
抗体领域具有重要意义
。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种灌流培养
CHO
细胞制备抗
PCSK9
抗体的方法，所述方法能够实现高细胞密度培养，显著提高抗
PCSK9
抗体的产量
。
[0007]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]本专利技术提供一种灌流培养
CHO
细胞制备抗
PCSK9
抗体的方法，所述方法包括：
[0009]使用灌流培养基灌流培养
CHO
细胞，收获抗
PCSK9
抗体；
[0010]所述灌流培养基含有基础培养基和补料培养基；
[0011]所述基础培养基包括
Driving M Eden B600s
；
[0012]所述补料培养基包括
Driving M Eden F600aS
和
Driving M EdenF600bS
；
[0013]所述
CHO
细胞表达抗
PCSK9
抗体
。
[0014]本专利技术中，创造性地采用商业化的
Driving M Eden B600s
为基础培养基，并搭配
Driving M Eden F600aS
和
Driving M Eden F600bS
作为灌流培养基，能够高效培养表达抗
PCSK9
抗体的
CHO
细胞，活细胞密度高
、
维持时间长，显著提高了抗
PCSK9
抗体的产量
。
[0015]本专利技术中，
Driving M Eden B600s
，生产厂家：上海倍谙基生物科技有限公司，主要成分：葡萄糖
、
氨基酸
、
氯化钠等，货号：
FG0109902
；
Driving M EdenF600aS
，生产厂家：上海倍谙基生物科技有限公司，主要成分：葡萄糖
、
氨基酸
、
维生素
、
氯化钠等，货号：
FG0108901
；
Driving M Eden F600bS
，生产厂家：上海倍谙基生物科技有限公司，主要成分：化学成分明确
、
无动物源，货号：
FG0108802。
[0016]优选地，所述灌流培养基按质量百分比记含有
92.3
％～
96.7
％
Driving M EdenB600s(
例如可以是
92.5
％
、92.6
％
、93
％
、94
％
、95
％
、95.5
％
、95.8
％
、96
％
、96.2
％
、96.3
％
、96.4
％
、96.5
％或
96.6
％
)
，3％～7％
Driving M Eden F600aS(
例如可以是
3.2
％
、3.4
％
、3.5
％
、3.6
％
、4
％
、4.2
％
、4.5
％
、5
％
、5.5
％
、6
％
、6.2
％
、6.5
％
、6.6
％
、6.8
％或
6.9
％
)
，
0.3
％
‑
0.7
％
Driving M Eden F600bS(
例如可以是
0.32
％
、0.34
％
、0.35
％
、0.36
％
、0.4
％
、0.4.2
％
、0.4.5
％
、0.5
％
、0.5.5
％
、0.6
％
、0.62
％
、0.65<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种灌流培养
CHO
细胞制备抗
PCSK9
抗体的方法，其特征在于，所述方法包括：使用灌流培养基灌流培养
CHO
细胞，收获抗
PCSK9
抗体；所述灌流培养基含有基础培养基和补料培养基；所述基础培养基包括
Driving M Eden B600s
；所述补料培养基包括
Driving M Eden F600aS
和
Driving M EdenF600bS
；所述
CHO
细胞表达抗
PCSK9
抗体
。2.
根据权利要求1所述的灌流培养
CHO
细胞制备抗
PCSK9
抗体的方法，其特征在于，所述灌流培养基按质量百分比计含有
92.3
％～
96.7
％
Driving M Eden B600s
，3％～7％
Driving M Eden F600aS
，
0.3
％～
0.7
％
Driving M Eden F600bS
；其中各组分质量百分比之和为
100
％
。3.
根据权利要求1所述的灌流培养
CHO
细胞制备抗
PCSK9
抗体的方法，其特征在于，所述
CHO
细胞包括表达抗
PCSK9
抗体的
CHO
‑
K1
细胞
。4.
根据权利要求1所述的灌流培养
CHO
细胞制备抗
PCSK9
抗体的方法，其特征在于，所述灌流培养的温度为
36
～
37℃
，
pH
为
6.8
～
7.2
，溶氧浓度为
20
％～
80
％
。5.
根据权利要求1所述的灌流培养
CHO
细胞制备抗
PCSK9
抗体的方法，其特征在于，所述灌流培养的生物反应器的搅拌速度为
190
～
290rpm。6.
根据权利要求1所述的灌流培养
CHO
细胞制备抗
PCSK9
抗体的方法，其特征在于，所述灌流培养的灌流速率为1～
1.5VVD。7.
根据权利要求1所述的灌流培养
CHO<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王鹏银，于妍，穆怀斌，杨金龙，张玮，李昭杰，李文蕾，曹小丹，杨海旭，陈妍，孙维婧，黄瑞晶，李剑，
申请(专利权)人：天士力生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：