一种丁酸梭菌和屎肠球菌的联合液态发酵工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种丁酸梭菌和屎肠球菌的联合液态发酵工艺，具体包括以下步骤：

【技术实现步骤摘要】
一种丁酸梭菌和屎肠球菌的联合液态发酵工艺


[0001]本专利技术属于微生物菌剂生产工艺
，尤其涉及一种丁酸梭菌和屎肠球菌的联合液态发酵工艺
。

技术介绍

[0002]随着我国严令禁止在饲料中添加抗生素政策的执行，微生态制剂日益受到养殖业研究人员的重视，并得到广泛使用
。
微生态制剂是一类在微生态学研究与应用理论的指导下，利用益生菌等微生物经过加工制成的生物制品
。
微生态制剂通过平衡肠道微生态环境
、
提升动物机体免疫力
、
促进营养物质吸收等多种作用机制来提升动物生产性能，已经在畜禽
、
水产养殖等领域成为替代抗生素的新一代绿色环保饲料添加剂，具有广阔的应用前景
。
同时，微生态制剂也在临床中被应用于多种感染性疾病的防控
。
[0003]丁酸梭菌作为益生菌在体内可以维持或恢复宿主肠道优势菌群，通过分泌短链脂肪酸
、
抗菌肽和丁酸梭菌素等物质，抑制大肠杆菌
、
金黄色葡萄球菌
、
沙门氏菌
、
产气荚膜梭菌
、
嗜水气单孢菌
、
副溶血性弧菌和幽门螺杆菌等常见致病菌的的生长，因此得到了广泛的应用
。
屎肠球菌属于肠球菌，是人和动物肠道中常见的有益菌种，能分泌脂肪酶
、
蛋白酶等多种有助于消化的酶，还能将多种碳水化合物转化为乳酸，可以软化饲料纤维，提高饲料利用率
>。
还可用于改善食品质量
。
[0004]丁酸梭菌的生长繁殖需要严格的无氧环境，一般需要提供氮气
、
二氧化碳等惰性气体来维持其适宜的生长环境
。
而本专利技术采用的联合液态培养方法则无需考虑此问题
。
屎肠球菌为兼性厌氧菌，其生长繁殖能消耗培养空间中的氧气，为丁酸梭菌营造适宜的生长繁殖环境
。
[0005]益生菌发酵过程中会产生大量的离心废液，这些废液中含有丰富的蛋白质
、
氨基酸
、
维生素以及多种糖类和微量元素等营养物质，是理想的饲料原料
。
此外离心废液中含有未被彻底离心的菌体，若能探索出一种益生菌离心废液重复利用方法，将极大地节约资源，减轻环保压力，并为生产企业带来经济效益
。
[0006]我国每年都在畜牧业中投入大量的抗生素类饲料添加剂
。
抗生素作为饲料添加剂可以提高动物生长及免疫机能，但长期大量使用则会造成致病菌耐药性增强，这为食品安全埋下了隐患，因此，研究和开发新型的绿色
、
无公害饲料添加剂来替代抗生素势在必行
。
中药发酵饲料添加剂具有毒副作用小
、
无抗药性
、
功能多样等优点，近年来受到越来越多研究人员的关注
。
中药是最受养殖户欢迎的“替抗产品”之一
。
通过益生菌发酵可以降解中药中纤维素等成分，提高有效成分的吸收利用效率
。
发酵中药是新兴的替抗产品
。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供一种丁酸梭菌和屎肠球菌的联合液态发酵工艺，解决了现有发酵技术中丁酸梭菌产量低
、
转孢率低等问题，弥补了现有联合发酵技术中所缺乏的丁酸梭菌和屎肠球菌混合发酵工艺的欠缺
。
同时，为了资源的重复利用，减轻发酵废液的后续处理负担，
本专利技术也提供了一种离心废液的回收利用方法
。
[0008]为达上述目的，本专利技术采用如下的技术方案：
[0009]一种丁酸梭菌和屎肠球菌的联合液态发酵工艺，包括以下步骤：
[0010](1)
制备丁酸梭菌和屎肠球菌种子液；
[0011](2)
制备发酵培养基，调整联合发酵培养基的初始
pH
至
6.0
～
7.5
，灭菌，将发酵培养基装入发酵罐中；
[0012](3)
将2％～6％的屎肠球菌接种于发酵罐中培养5～
8h
后再接种1％～5％的丁酸梭菌，
33
～
37℃
静置发酵
36
～
44h
；
[0013](4)
将发酵液高速离心，收集菌泥，喷雾干燥获得菌粉
。
[0014]所述发酵工艺还包括步骤
(5)
：离心获得的上清液用于中药固态发酵；将离心上清液接种到中药培养基内，于
30
～
37℃
培养7‑
10
天
。
[0015]优选的，所述步骤
(1)
中丁酸梭菌种子液培养使用的培养基为
RCM
液体培养基，包括蛋白胨
10g/L、
牛肉膏
10g/L、
酵母粉
3g/L、
葡萄糖
5g/L、
可溶性淀粉
1g/L、
氯化钠
5g/L、
醋酸钠
3g/L、L
‑
半胱氨酸盐酸盐
0.5g/L
，
pH 6.8
；
[0016]屎肠球菌种子液培养使用的培养基为
MRS
液体培养基，包括酪白蛋白胨
10g/L、
牛肉浸取物
10g/L、
酵母提取液
5g/L、
葡萄糖
20g/L、
乙酸钠
5g/L、
柠檬酸二胺
2g/L、
吐温
‑
80 1g/L、
磷酸氢二钾
2g/L、
七水硫酸镁
0.2g/L、
七水硫酸锰
0.05g/L、
碳酸钙
20g/L
，
pH 6.8。
[0017]优选的，所述丁酸梭菌种子液为
37℃
绝对厌氧培养
14
～
20h
所得，所述屎肠球菌种子液为
37℃
液体深层静置培养
18
～
22h
所得
。
[0018]优选的，所述步骤
(2)
中发酵培养基成分包括糖蜜5～
25g/L、
葡萄糖8～
10g/L、
酵母浸粉5～
15g/L、
蛋白胨5～
20g/L、
硫酸镁
0.5
～
5g/L、
磷酸氢二钾
‑
磷酸二氢钠
0.1
～
5g/L、
柠檬酸
‑
柠檬酸钠
0.1
～
5g/L。
[0019]优选的，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种丁酸梭菌和屎肠球菌的联合液态发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：
(1)
制备丁酸梭菌和屎肠球菌种子液；
(2)
制备发酵培养基，调整联合发酵培养基的初始
pH
至
6.0
～
7.5
，灭菌，将发酵培养基装入发酵罐中；
(3)
将2％～6％的屎肠球菌接种于发酵罐中培养5～
8h
后再接种1％～5％的丁酸梭菌，
33
‑
37℃
静置发酵
36
～
44h
；
(4)
将发酵液高速离心，收集菌泥，喷雾干燥获得菌粉
。2.
如权利要求1所述的联合液态发酵工艺，其特征在于，所述发酵工艺还包括步骤
(5)
：离心获得的上清液用于中药固态发酵；将离心上清液接种到中药培养基内，于
30
～
37℃
培养7‑
10
天
。3.
如权利要求1所述的联合液态发酵工艺，其特征在于，所述步骤
(1)
中丁酸梭菌种子液培养使用的培养基为
RCM
液体培养基，包括蛋白胨
10g/L、
牛肉膏
10g/L、
酵母粉
3g/L、
葡萄糖
5g/L、
可溶性淀粉
1g/L、
氯化钠
5g/L、
醋酸钠
3g/L、L
‑
半胱氨酸盐酸盐
0.5g/L
，
pH6.8
；屎肠球菌种子液培养使用的培养基为
MRS
液体培养基，包括酪白蛋白胨
10g/L、
牛肉浸取物
10g/L、
酵母提取液
5g/L、
葡萄糖
20g/L、
乙酸钠
5g/L、
柠檬酸二胺
2g/L、
吐温
‑
80 1g/L、
磷酸氢二钾
2g/L、
七水硫酸镁
0.2g/L、
七水硫酸锰
0.05g/L、
碳酸钙
20g/L
，
pH 6.8。4.
如权利要求3所述的联合液态发酵工艺，其特征在于，所述丁酸梭菌种子液为
37℃
绝对厌氧培养
14
～
20h
所得，所述屎肠球菌种子液为
37℃
液体深层静置培养<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李光华，李永红，冯利菲，李克克，
申请(专利权)人：河南金百合生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：