杂交瘤细胞株制造技术

本发明专利技术提供了一株杂交瘤细胞株

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞株769H4及其分泌的单克隆抗体与应用


[0001]本专利技术属于细胞工程及免疫学
，具体而言，涉及一种杆状病毒表达的重组猪流行性腹泻病毒
S1
401
‑
769
蛋白制备的杂交瘤细胞株
769H4
，以及该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体与应用
。

技术介绍

[0002]猪流行性腹泻
(porcine epidemic diarrhea
，
PED)
是由猪流行性腹泻病毒
(porcine epidemic diarrhea virus
，
PEDV)
引起的，可感染各年龄段的猪，伴有水样腹泻
、
呕吐和脱水等症状的一种传染性极强的急性肠道疾病，以新生仔猪的感染最为严重
(Wang Q,Vlasova AN,Kenney SP,Saif LJ.Emerging and re
‑
emerging coronaviruses in pigs.Current Opinion In Virology,2019,34:39
‑
49
；
92)。
伴随着变异毒株的广泛出现，猪流行性腹泻持续不断地给养猪业造成损失，同时防控难度也越来越大
。PEDV
属冠状病毒科冠状病毒属
。S1
刺突蛋白是冠状病毒表面以三聚体形式存在的
I
型膜融合蛋白，参与病毒附着和诱导中和抗体
(Yu J,Qiao S,Guo R,Wang X.Cryo
‑
EM structures of HKU2 and SADS
‑
CoV spike glycoproteins provide insights into coronavirus evolution.Nature Communications,2020,11(1):3070)。
其中
401
‑
769aa
是一个主要的抗原表位和受体结合域，可作为猪流行性腹泻病毒检测的一个重要靶标
。
[0003]自
1983
年发现杆状病毒表达载体系统可以产生具有生物活性的重组人
INF
‑
β
以来，大量报道表明可以通过修饰杆状病毒载体优化重组蛋白的表达方式提高重组蛋白质量
。
此外，杆状病毒表达载体系统优势在于其不仅可以在昆虫细胞中表达蛋白，还可用于哺乳动物细胞中，且安全可靠
。
在表达产生大量外源蛋白的同时，不会改变蛋白结构，保留其天然构象，有利于在宿主细胞中的广泛应用
。
[0004]截止目前，猪流行性腹泻病毒的诊断主要有病毒学诊断和血清学诊断
。
在病毒学诊断中，病毒分离是诊断
PEDV
的金标准
。
但由于
PEDV
分离培养依赖于外源性胰蛋白酶，且后续检测操作过于繁琐，因此该方法很少用于临床检测
。
血清学诊断包括酶联免疫吸附试验
(ELISA)、
免疫荧光
(IF)、
胶体金免疫层析技术
(GICA)
等
。
市面上的
ELISA
检测试剂盒多以全病毒和原核表达的重组蛋白为主；而免疫荧光技术对操作要求高，操作难度大，不利于临床诊断；相较于前两者，胶体金试纸条最为快捷迅速
。
[0005]本专利技术通过杆状病毒表达系统制备重组
S1
401
‑
769
蛋白，以重组
S1
401
‑
769
蛋白免疫小鼠，获得一株能分泌
S1
401
‑
769
的单克隆抗体细胞株，可特异性识别
PEDV
的
S1
401
‑
769
蛋白，可用于研发
IFA、ELISA、
胶体金试纸条等，为我国
PEDV
血清学检测开发提供物质基础和技术支持
。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一株分泌猪流行性腹泻病毒
S1
401
‑
769
单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用
。
由该细胞株制备的单克隆抗体对猪流行性腹泻病毒具有良好的特异性，可用于建
立猪流行性腹泻阻断
ELISA
检测方法或制备胶体金免疫层析试纸条快速检测方法等
。
[0007]本专利技术的第一个目的在于提供一种可分泌抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞，其分类命名为杂交瘤细胞株
(Hybridoma cell line)769H4
，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国湖北省武汉市武汉大学，保藏编号为
CCTCC NO
：
C2023243
，保藏日期为
2023
年9月
15
日
。
[0008]本专利技术杂交瘤细胞株
769H4
的制备方法，其步骤如下：
(1)
采用重组
S1
401
‑
769
蛋白免疫小鼠，取免疫脾细胞与
SP2/0
杂交瘤细胞进行细胞融合，利用间接
ELISA
方法筛选阳性杂交瘤细胞株；
(2)
经过亚克隆，筛选得到仅稳定分泌重组
S1
401
‑
769
蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株
。
[0009]本专利技术的第二个目的在于提供一种猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体，由保藏编号为
CCTCC NO
：
C2023243
的杂交瘤细胞株
769H4
分泌产生
。
进一步优选地，所述单克隆抗体和猪流行性腹泻病毒的
S1
401
‑
769
蛋白产生特异性免疫反应
。
进一步优选地，所述单克隆抗体的重链为
IgM
亚型，轻链为
Kappa
亚型
。
[0010]本专利技术的第三个目的在于提供一种猪流行性腹泻病毒的抗原表位肽，所述抗原表位肽可以和上述的单克隆抗体特异性结合
。
进一步优选地，所述抗原表位肽为重组猪流行性腹泻病毒
S1
401
‑
769
蛋白，可以由杆状病毒表达系统表达获得，其氨基酸序列如
SEQ ID NO
：1所示
。
进一步地，所述猪流行性腹泻病毒
S1
401
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种可分泌抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为杂交瘤细胞株
769H4
，保藏编号为
CCTCC NO
：
C2023243。2.
一种猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体，其特征在于，由保藏编号为
CCTCC NO
：
C2023243
的杂交瘤细胞株
769H4
分泌产生
。3.
根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体和猪流行性腹泻病毒的
S1
401
‑
769
蛋白产生特异性免疫反应
。4.
一种猪流行性腹泻病毒的抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽可以和权利要求2或3所述的单克隆抗体特异性结合
。5.
根据权利要求4所述猪流行性腹泻病毒的抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：1所示
。6.
一种核酸，其特征在于，所述核酸用于编码权利要求2或3所述的单克隆抗体
。7.
一种生物材料，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨克礼，李萍，李佳晋，田永祥，周丹娜，刘威，高婷，刘泽文，李畅，郭锐，袁芳艳，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：