一种杀灭猪链球菌的噬菌体嵌合裂解酶及制备方法技术

本发明专利技术适用于基因工程技术领域，提供了一种杀灭猪链球菌的噬菌体嵌合裂解酶，其核苷酸序列如

【技术实现步骤摘要】
一种杀灭猪链球菌的噬菌体嵌合裂解酶及制备方法、应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，尤其涉及一种杀灭猪链球菌的噬菌体嵌合裂解酶及制备方法
、
应用
。

技术介绍

[0002]猪链球菌是一种人畜共患病原菌，根据细菌表面荚膜多糖
(CPS)
的抗原性，可将猪链球菌划分为
33
个血清型，其中2型
、9
型
、3
型
、1/2
型和7型为猪链球菌最主要的血清型，并且2型猪链球菌在世界范围内分布最广泛
、
危害最严重，猪链球菌感染可引起败血症
、
脑膜炎
、
心内膜炎
、
肺炎和关节炎等疾病，致死率非常高
。
由于抗生素的滥用使得猪链球菌的耐药形势愈发严峻，耐药及多重耐药菌株的不断涌现使抗生素的预防和控制变得更加困难，因此迫切需要寻找一种针对猪链球菌且不易产生耐药性的新型抗菌制剂
。
[0003]噬菌体裂解酶是噬菌体基因组编码的作用于细菌细胞壁肽聚糖的一类水解酶，对革兰氏阳性菌具有高效的杀菌作用，其具有典型的模块化结构，即噬菌体裂解酶至少由两个不同的功能域
(
模块
)
组成
。
革兰氏阳性菌噬菌体裂解酶的结构通常包括位于
N
端的催化结构域
(EAD)
和位于
C
端的细胞壁结合结构域
(CBD)
，由于裂解酶的
EAD
和
CBD
是相互独立的，可以通过将不同来源的
EAD
和
CBD
进行组合，构建比亲代裂解酶性能更优良的嵌合裂解酶，以提高其杀菌活性
、
拓宽杀菌谱等
。
因此，噬菌体嵌合裂解酶具有应用于临床耐药及多重耐药猪链球菌感染治疗的巨大潜力
。
[0004]目前已报道的猪链球菌噬菌体裂解酶数量较少，特异性过强，仅能杀灭个别血清型的猪链球菌，并且裂解活性也需要进一步提高，因此通过开发和改造以获得性能更为优良的噬菌体嵌合裂解酶具有非常重要的意义
。

技术实现思路

[0005]本专利技术实施例的目的在于提供一种杀灭猪链球菌的噬菌体嵌合裂解酶，旨在解决上述
技术介绍
中存在的问题
。
[0006]本专利技术实施例是这样实现的，一种杀灭猪链球菌的噬菌体嵌合裂解酶，其核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示，其氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示
。
[0007]本专利技术实施例的另一目的在于提供一种上述噬菌体嵌合裂解酶的制备方法，包括以下步骤：
[0008](1)
噬菌体嵌合裂解酶
ClyU
的重组表达
、
载体的构建：将噬菌体裂解酶
Ply1228
的催化域和噬菌体裂解酶
Ply30
的细胞壁结合域无缝克隆至
pET
‑
15b
载体，构建表达载体
pET
‑
15b
‑
ClyU
；
[0009](2)
表达载体
pET
‑
15b
‑
ClyU
的转化：将表达载体
pET
‑
15b
‑
ClyU
转化至工程大肠杆菌
BL21(DE3)
，出现转化子后筛选出高表达菌株；
[0010](3)
噬菌体嵌合裂解酶
ClyU
的表达纯化：挑取高表达菌株中的单菌落接种于培养基诱导培养，收集诱导后的菌体进行超声破碎
、
亲和层析纯化
、SDS
‑
PAGE
鉴定，得到所述杀
灭猪链球菌的噬菌体嵌合裂解酶
。
[0011]优选地，将噬菌体裂解酶
Ply1228
的催化域和噬菌体裂解酶
Ply30
的细胞壁结合域无缝克隆至
pET
‑
15b
载体的步骤，包括：使用引物
1228EAD
’‑
F(GGCAGCCATATGCCCATGATAATCAATCTTGA)
和引物
1228EAD
’‑
R
[0012](TCCTCCGCTTCCTCCTCCTCCGCTTCCTCCTCCTCCTGATTTGCCGGACG GTA)
扩增亲本噬菌体裂解酶
Ply1228
的催化域
1228EAD
基因；使用引物
30CBD
‑
F(AGCGGAGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGAGGAAGCCAGGCAAGC AGTGGCAA)
和引物
30CBD
‑
R(TCGGGCTTTGTTAGCAGCCGCTATTTAAACGTACCATAAG)
扩增亲本噬菌体裂解酶
Ply30
的结合域
30CBD
基因
。
[0013]本专利技术实施例的又一目的在于提供一种上述的噬菌体嵌合裂解酶在抑制和杀灭猪链球菌上的应用
。
[0014]本专利技术实施例的又一目的在于提供一种上述噬菌体嵌合裂解酶在制备杀灭猪链球菌的药物组合物上的应用
。
[0015]优选地，所述药物组合物是液体制剂
、
冻干制剂或口服固体制剂
。
[0016]本专利技术实施例通过基因拼接技术构建了一个可高效杀灭猪链球菌的噬菌体嵌合裂解酶，可单独或与其他物质复配使用，或制备成酶制剂，对猪链球菌具有强裂解活性和较宽的裂解谱，能够有效杀灭猪链球菌，为制备预防和治疗猪链球菌感染引起的疾病的药物提供一种思路
。
附图说明
[0017]图1为本专利技术实施例1提供的
SDS
‑
PAGE
电泳分析图；
[0018]图2为本专利技术实施例2提供的噬菌体嵌合裂解酶
ClyU
平板裂解活性测定结果；
[0019]图3为本专利技术实施例3提供的不同浓度的噬菌体嵌合裂解酶
ClyU
的体外液体环境杀菌活性测定结果；
[0020]图4为本专利技术实施例4提供的噬菌体嵌合裂解酶
ClyU
裂解谱测定结果
。
具体实施方式
[0021]为了使本专利技术的目的
、
技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明
。
应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术
。
[0022]以下结合具体实施例对本专利技术的具本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种杀灭猪链球菌的噬菌体嵌合裂解酶，其特征在于，其核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示，其氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示
。2.
一种如权利要求1所述的噬菌体嵌合裂解酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)
噬菌体嵌合裂解酶
ClyU
的重组表达
、
载体的构建：将噬菌体裂解酶
Ply1228
的催化域和噬菌体裂解酶
Ply30
的细胞壁结合域无缝克隆至
pET
‑
15b
载体，构建表达载体
pET
‑
15b
‑
ClyU
；
(2)
表达载体
pET
‑
15b
‑
ClyU
的转化：将表达载体
pET
‑
15b
‑
ClyU
转化至工程大肠杆菌
BL21(DE3)
，出现转化子后筛选出高表达菌株；
(3)
噬菌体嵌合裂解酶
ClyU
的表达纯化：挑取高表达菌株中的单菌落接种于培养基诱导培养，收集诱导后的菌体进行超声破碎
、
亲和层析纯化
、SDS
‑
PAGE
鉴定，得到所述杀灭猪链球菌的噬菌体嵌合裂解酶
。3.
根据权利要求2所述的噬菌体嵌合裂...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾敬敏，王子晶，韩文瑜，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：