用于调节制造技术

本发明专利技术涉及用于通过使

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调节B细胞介导的免疫应答的方法和手段


[0001]本专利技术涉及用于通过使
B
细胞与特定比率的可溶性单一单价抗原和复合多价抗原接触来进行
B
细胞介导的免疫应答的靶向调节的方法和手段
。B
细胞免疫的靶向调节可用于哺乳动物中与抗体介导的免疫相关的各种病症的诊断和治疗
。
此类病症包括增殖性病患诸如癌症
、
自身免疫病患
、
病原性感染
、
炎性疾病
、
过敏和食物不耐受
。
本专利技术基于这样的观察：复合多价抗原结构诱导强
IgG
型抗体
B
细胞应答，而令人惊奇的是单价抗原结构具有抑制此类
IgG
应答的能力，或者甚至在自身抗原的情况下诱导保护性
IgM
应答
。
本专利技术在这方面提供了方法
、
组合物
、
治疗剂
、
诊断剂和食品添加剂
。
[0002]说明
[0003]自我耐受对于通过避免自身免疫反应来维持生理完整性至关重要
。
目前，绝对中枢和外周耐受据信在
B
细胞发育期间控制
B
细胞受体
(BCR)
库，从而阻止自身反应性
B
细胞的阳性选择
[1,2,4]。
据推测，在骨髓中的早期
B
细胞发育期间，中枢耐受会迫使自身反应性
B
细胞缺失
[2,5
‑
7]。
此外，逃避克隆缺失的自身反应性
B
细胞会受到受体编辑，从而产生非自身反应性
BCR
特异性
[8
‑
10]。
绕过中枢耐受并迁移到外周的自身反应性
B
细胞被克隆无能
(
外周耐受
)
抵消，主要通过
IgM BCR
表达下调而导致无应答
[1,11
‑
13]。
然而，绝大多数血清
IgM
具有自身反应性的发现似乎与普遍消除自身反应性的概念形成鲜明对比
[14]。
事实上，所谓的天然多反应性
IgM
在体内平衡中发挥着重要作用
[15]，反对绝对消除自身反应性抗体
。
[0004]有趣的是，研究表明，疾病特异性自身反应性
B
细胞存在于免疫前库中，并且在野生型小鼠中可以形成对胰岛素
(
一种常见自身抗原
)
具有特异性的生发中心
(GC)
，这与中央
B
细胞耐受的概念相矛盾
[16,17]。
[0005]在过去的几十年里，
B
细胞自身免疫研究主要集中在转基因小鼠模型上
[1,2,5,18,19]。
由于多种原因，这些模型在研究自身免疫方面的有用性引起了激烈的争论
[20]。
用高亲和力突变的自身反应性
BCR
替换种系构型不仅会导致
B
细胞发育期间的非典型情况，还会产生单特异性库
[1,5,19]。
此外，这些抗原的可用性
、
效价和形式
(
可溶性与膜结合性
)
等特征尚未得到充分解决
[5,18]。
此外，抗原本身与已知的自身免疫疾病没有任何相关性
[21,22]。
[0006]流行病学研究表明，工业化国家高达5％的人口患有自身免疫疾病，诸如类风湿性关节炎
(RA)、
系统性红斑狼疮
(SLE)
或1型糖尿病
(T1D)[21]。
值得注意的是，自身抗体存在于绝大多数自身免疫疾病中，并且往往是发病机制的驱动力
[22]。
[0007]因此，持续需要开发用于免疫应答的可控调节的方法，以便检测或治疗或避免由受试者中免疫应答的存在或活性诱导或表征的病症
。
[0008]上述技术问题通过本文公开的和如权利要求中定义的实施例来解决
。
[0009]因此，本专利技术尤其涉及以下实施例：
[0010]1.
一种组合物，其包含：
[0011](i)
单价抗原颗粒，其包含抗原部分，该抗原部分包含能够诱导针对靶抗原的抗体
介导的免疫应答的不多于一种抗原结构，和
[0012](ii)
多价抗原颗粒，其包含抗原部分，该抗原部分包含能够诱导针对靶抗原的抗体介导的免疫应答的多于一种抗原结构，并且其中该多于一种抗原结构是交联的
。
[0013]2.
根据实施例1所述的组合物，其中多价抗原颗粒包含多种相同的抗原结构
。
[0014]3.
根据实施例1或2所述的组合物，其中该单价抗原颗粒进一步包含与该抗原部分偶联的载体部分，并且其中该载体不包含该抗原结构的另一拷贝
。
[0015]4.
根据实施例1至3中任一项所述的组合物，其中该多价抗原颗粒进一步包含与该抗原部分偶联的载体部分
。
[0016]5.
根据实施例4所述的组合物，其中该载体部分包含选自下组的结构：多肽
、
免疫
CpG
岛
、
戚血蓝素
(KLH)、
破伤风类毒素
(TT)、
霍乱毒素
B
亚单位
(CTB)、
细菌或细菌菌影
、
脂质体
、
壳质体
、
病毒体
、
微球
、
树突状细胞
、
颗粒
、
微颗粒
、
纳米颗粒或珠子
。
[0017]6.
根据实施例1至5中任一项所述的组合物，其中该多价抗原颗粒包含该抗原结构的与彼此空间邻近的至少两个拷贝
。
[0018]7.
根据实施例6所述的组合物，其中该抗原结构的至少两个拷贝与彼此在
3nm
至
20nm
的范围内
。
[0019]8.
根据实施例1至7中任一项所述的组合物，其中该靶抗原包含选自下组的至少一种试剂：核酸
、
碳水化合物
、
肽和半抗原
。
[0020]9.
根据实施例1至8中任一项所述的组合物，其中该多价抗原颗粒包含具有用于蛋白质缀合的交联反应性基团的接头，优选具有用于稳定蛋白质缀合的交联反应性基团的接头
。
[0021]10.
根据实施例9所述的组合物，其中该交联反应性基团是选自羧本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种组合物，其包含：
(i)
单价抗原颗粒，其包含抗原部分，所述抗原部分包含能够诱导针对靶抗原的抗体介导的免疫应答的不多于一种抗原结构，和
(ii)
多价抗原颗粒，其包含抗原部分，所述抗原部分包含能够诱导针对靶抗原的抗体介导的免疫应答的多于一种抗原结构，并且其中所述多于一种抗原结构是交联的
。2.
根据权利要求1所述的组合物，其中多价抗原颗粒包含多种相同的抗原结构
。3.
根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述单价抗原颗粒进一步包含与所述抗原部分偶联的载体部分，并且其中所述载体不包含所述抗原结构的另一拷贝
。4.
根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述多价抗原颗粒进一步包含与所述抗原部分偶联的载体部分
。5.
根据权利要求4所述的组合物，其中所述载体部分包含选自下组的结构：多肽
、
免疫
CpG
岛
、
戚血蓝素
(KLH)、
破伤风类毒素
(TT)、
霍乱毒素
B
亚单位
(CTB)、
细菌或细菌菌影
、
脂质体
、
壳质体
、
病毒体
、
微球
、
树突状细胞
、
颗粒
、
微颗粒
、
纳米颗粒或珠子
。6.
根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述多价抗原颗粒包含所述抗原结构的与彼此空间邻近的至少两个拷贝
。7.
根据权利要求6所述的组合物，其中所述抗原结构的至少两个拷贝与彼此在
3nm
至
20nm
的范围内
。8.
根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述靶抗原包含选自下组的至少一种试剂：核酸
、
碳水化合物
、
肽和半抗原
。9.
根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述多价抗原颗粒包含具有用于蛋白质缀合的交联反应性基团的接头，优选具有用于稳定蛋白质缀合的交联反应性基团的接头
。10.
根据权利要求9所述的组合物，其中所述交联反应性基团是选自羧基至胺反应性基团
、
胺反应性基团
、
巯基反应性基团
、
醛反应性基团和光反应性基团的基团
。11.
根据权利要求
10
所述的组合物，其中所述交联反应性基团是选自碳二亚胺
、NHS
酯
、
亚氨酸酯
、
五氟苯酯
、
羟甲基膦
、
马来酰亚胺
、
卤代乙酰基
、
酰肼
、
烷氧基胺
、
二氮丙啶和芳基叠氮化物的基团
。12.
根据权利要求1至
11
中任一项所述的组合物，其中所述多价抗原颗粒与佐剂连接，优选其中所述多价颗粒与佐剂共价连接，优选其中所述佐剂是
IgG。13.
根据权利要求1至
12
中任一项所述的组合物，其中单价抗原颗粒：多价抗原颗粒的比率大于1，优选大于
101，更优选大于
102，更优选大于
103，更优选大于
104。14.
根据权利要求1至
13
中任一项所述的组合物，其进一步包含药学上可接受的载体和
/
或赋形剂
。15.
一种引发和
/
或调节体液和
/
或
B
细胞介导的靶抗原特异性免疫应答的方法，所述方法包括以下步骤：
a)
使一种或多种
B
细胞与根据权利要求1至
14
中任一项所述的组合物接触；和
b)
引发和
/
或调节体液和
/
或
B
细胞介导的靶抗原特异性免疫应答
。16.
根据权利要求
15
所述的方法，其中所述
B
细胞介导的靶抗原特异性免疫应答包括对所述靶抗原具有特异性的一种或多种抗体和
/
或
B
细胞受体和
/
或其变体
。
17.
根据权利要求
16
所述的方法，其中所述
B
细胞介导的靶抗原特异性免疫应答涉及表达免疫球蛋白
(Ig)M、IgD、IgA
或
IgG
型抗体的
B
细胞和
/
或
B
细胞受体
。18.
根据权利要求
17
所述的方法，其中所述
B
细胞介导的靶抗原特异性免疫应答涉及表达免疫球蛋白
(Ig)M、IgA
和
/
或
IgG
型抗体的
B
细胞
。19.
根据权利要求
15
至
18
中任一项所述的方法，其中引发的
B
细胞介导的靶抗原特异性免疫应答包括引发至少一种
IgG
型抗体和至少一种寡聚抗体
。20.
一种用于获得保护性
‑
调节性抗体的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)
根据权利要求
19
所述的方法引发至少一种
IgG
型抗体和至少一种寡聚抗体；和
(b)
分离成熟的寡聚抗体，其中
(i)
相比于所述
IgG
型抗体，所述寡聚抗体的结合对于所述靶抗原更具特异性，优选地其中所述寡聚抗体对于所述靶抗原是单特异性的；和
/
或
(ii)
所述寡聚抗体对于所述靶抗原的结合亲和力等于或高于
IgG
型抗体，优选地其中所述保护性
‑
调节性抗体以小于
10
‑7，优选小于
10
‑8，更优选小于
10
‑9，并且最优选在约
10
‑
10
至约
10
‑
12
的范围内的
K
d
与所述靶抗原结合，以获得对所述靶抗原的功能为保护性
‑
调节性的所述保护性
‑
调节性抗体
。21.
一种根据权利要求
20
所述的方法可获得的保护性
‑
调节性抗体或其变体或片段，其对所述靶抗原的功能为保护性
‑
调节性
。22.
根据权利要求
21
所述的保护性
‑
调节性抗体
、
变体或片段，其中所述保护性
‑
调节性抗体
、
变体或片段包含
a)
如
SEQ ID NO:4
中定义的
CDR3
和包含如
SEQ ID NO:7
中定义的
CDR3
的可变轻
(VL)
链；
b)
包含如
SEQ ID NO:11
中定义的
CDR3
的可变重
(VH)
链和包含如
SEQ ID NO:14
中定义的
CDR3
的可变轻
(VL)
链；或
c)
包含如
SEQ ID NO:18
中定义的
CDR3
的可变重
(VH)
链和包含如
SEQ ID NO:21
中定义的
CDR3
的可变轻
(VL)
链
。23.
根据权利要求
22
所述的保护性
‑
调节性抗体
、
变体或片段，其中所述保护性
‑
调节性抗体
、
变体或片段包含：
a)
可变重
(VH)
链，其包含如
SEQ ID NO:2
中定义的
CDR1、
如
SEQ ID NO:3
中定义的
CDR2
和如
SEQ ID NO:4
中定义的
CDR3
；和可变轻
(VL)
链，其包含如
SEQ ID NO:6
中定义的
CDR1、
如通过序列
DAS
定义的
CDR2
和如
SEQ ID NO:7
中定义的
CDR3
；
b)
可变重
(VH)
链，其包含如
SEQ ID NO:9
中定义的
CDR1、
如
SEQ ID NO:10
中定义的
CDR2
和如
SEQ ID NO:11
中定义的
CDR3
；和可变轻
(VL)
链，其包含如
SEQ ID NO:13
中定义的
CDR1、
如通过序列
GAS
定义的
CDR2
和如
SEQ ID NO:14
中定义的
CDR3
；或者
c)
可变重
(VH)
链，其包含如
SEQ ID NO:16
中定义的
CDR1、
如
SEQ ID NO:17
中定义的
CDR2
和如
SEQ ID NO:18
中定义的
CDR3
；和可变轻
(VL)
链，其包含如
SEQ ID NO:20
中定义的
CDR1、
如通过序列
DAS
定义的
CDR2
和如
SEQ ID NO:21
中定义的
CDR3。24.
根据权利要求
21
至
23
中任一项所述的保护性
‑
调节性抗体
、
变体或片段，其中所述保护性
‑
调节性抗体
、
变体或片段
a)
包含：可变重
(VH)
链序列，其包含
SEQ ID NO:1
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:1
具有至少
90
％
、
优选至少
95
％序列同一性的序列；和可变轻
(VL)
链序列，其包含
SEQ ID NO:4
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:4
具有至少
90
％
、
优选至少
95
％序列同一性的序列；
b)
包含：可变重
(VH)
链序列，其包含
SEQ ID NO:8
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:8
具有
至少
90
％
、
优选至少
95
％序列同一性的序列；和可变轻
(VL)
链序列，其包含
SEQ ID NO:12
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:12
具有至少
90
％
、
优选至少
95
％序列同一性的序列；或者
c)
包含：可变重
(VH)
链序列，其包含
SEQ ID NO:15
的氨基酸序列或与
SEQ ID NO:15
具有至少
90
％
、
...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：乌尔姆大学，
类型：发明
国别省市：