一种基于制造技术

本发明专利技术公开了一种基于

【技术实现步骤摘要】
一种基于SADS
‑
CoV全病毒抗原检测SADS
‑
CoV抗体的间接ELISA试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及病毒抗体检测
，具体涉及一种基于
SADS
‑
CoV
全病毒抗原检测
SADS
‑
CoV
抗体的间接
ELISA
试剂盒及方法
。

技术介绍

[0002]猪急性腹泻综合征冠状病毒
(Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus
，
SADS
‑
CoV)
作为一种新发现的冠状病毒，属于冠状病毒科
α
冠状病毒属，是有囊膜包被的单股正链
RNA
病毒，基因组全长
27Kb
，完整基因组结构由两端的
5'
‑
UTR、3'
‑
UTR
，五个非结构蛋白：
ORF1a、ORF1b、NS3a、NS7a、NS7b
和四个结构蛋白：
S
蛋白
、E
蛋白
、M
蛋白
、N
蛋白组成
。
猪急性腹泻综合征的临床症状与其他已知的猪肠道冠状病毒引起的临床症状非常相似，可引起急性呕吐
、
腹泻和新生仔猪体重迅速减轻导致急性死亡，该病毒可感染各个年龄段的猪，被感染成年母猪只出现轻度腹泻症状，2天内即可恢复
。
然而，对新生仔猪的影响较为严重，尤其在5日龄或者更小日龄的仔猪中病死率最高，发病后3～6天引起死亡
。
[0003]目前我国尚无针对
SADS
‑
CoV
感染的有效治疗药物及疫苗，提前研发疫苗药物可以为
SADS
‑
CoV
疫情的防控做准备，以避免该病毒给养殖业带来不可估量的经济损失
。
在疫苗的制备中，涉及到动物实验时需要对阴性对照及接受免疫后的动物进行抗体检测，以评估疫苗的免疫保护效果，其中以血清中和抗体效价的高低来评估疫苗免疫保护效果是最简单的方法
。
然而，目前用于检测
SADS
‑
CoV
疫苗免疫后血清中和抗体效价的血清学方法还均处于实验室阶段，例如
Peng Peng
等人公开一种用于评估
SADV
‑
CoV
的感染和疫苗的有效性的基于重组
S
蛋白的抗
SADS
‑
CoV IgG
间接
ELISA
检测方法
(Peng Peng
等人，
Development of an indirect ELISA for detecting swine acute diarrhoea syndrome coronavirus IgG antibodies based on a recombinant spike protein
，
Transboundary and Emerging Diseases
，
2020
年
10
月
30
日，
https://doi.org/10.1111/tbed.14196
；以下称文献
1)。
然而，该文献1以重组
S
蛋白作为包被抗原，其可能仅能识别和结合血清中和抗体上的部分表位，导致检测准确性和全面性可能有所不足，这不利于疫苗免疫效果的评价，也不利于疫苗制备过程中阴性猪的筛选工作以及猪场的净化工作
。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本专利技术一个方面提供一种检测
SADS
‑
CoV
抗体的间接
ELISA
试剂盒，其包括用
SADS
‑
CoV
全病毒抗原包被的酶标板
。
[0005]在一些实施方式中，在用
SADS
‑
CoV
全病毒抗原包被酶标板时，所述
SADS
‑
CoV
全病毒抗原的浓度为8‑
12
μ
g/mL。
[0006]本专利技术另一方面提供一种检测
SADS
‑
CoV
抗体的非疾病诊断目的的间接
ELISA
方法，其包括使用
SADS
‑
CoV
全病毒抗原作为包被抗原来包被酶标板
。
[0007]在一些实施方式中，所述间接
ELISA
方法包括以下步骤：
[0008](1)
抗原包被：将灭活且纯化的
SADS
‑
CoV
全病毒抗原作为包被液，包被酶标板的孔，之后洗板；
[0009](2)
封闭：向步骤
(1)
已包被的酶标板的孔中加入封闭液，进行封闭，之后洗板；
[0010](3)
加样：使用样品稀释液将阳性血清
、
阴性血清和待测血清样品进行稀释后，分别加入步骤
(2)
已封闭的酶标板的孔中，进行孵育，之后洗板；
[0011](4)
加酶标二抗：向步骤
(3)
的酶标板的孔中加入酶标二抗，进行孵育，之后洗板；
[0012](5)
显色和终止：向步骤
(4)
的酶标板的孔中加入底物显色液，静置一段时间后，向孔中加入终止液终止反应；和
[0013](6)
检测：使用酶标仪检测阳性血清
、
阴性血清和待测血清样品对应孔的
450nm
处
OD
值，若阳性血清对应的
OD
值
≥3
倍的阴性血清对应的
OD
值，则实验成立，若待测血清样品对应的
OD
值
≥3
倍的阴性血清对应的
OD
值，则判定为阳性，反之则为阴性
。
[0014]在一些实施方式中，步骤
(1)
中所述包被液的浓度为8‑
12
μ
g/mL
，所述包被的条件为：2～
8℃
过夜包被
。
[0015]在一些实施方式中，步骤
(1)
‑
(5)
中所述洗板的操作为：将酶标板放至室温，甩掉孔中的液体，用洗涤液反复洗涤3～5次，在吸水纸上拍干，其中所述洗涤液为
PBST。
[0016]在一些实施方式中，步骤
(2)
中所述封闭液为1％鸡蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测
SADS
‑
CoV
抗体的间接
ELISA
试剂盒，其包括用
SADS
‑
CoV
全病毒抗原包被的酶标板
。2.
根据权利要求1所述的间接
ELISA
试剂盒，其中在用
SADS
‑
CoV
全病毒抗原包被酶标板时，所述
SADS
‑
CoV
全病毒抗原的浓度为8‑
12
μ
g/mL。3.
一种检测
SADS
‑
CoV
抗体的非疾病诊断目的的间接
ELISA
方法，其包括使用
SADS
‑
CoV
全病毒抗原作为包被抗原来包被酶标板
。4.
根据权利要求3所述的间接
ELISA
方法，其包括以下步骤：
(1)
抗原包被：将灭活且纯化的
SADS
‑
CoV
全病毒抗原作为包被液，包被酶标板的孔，之后洗板；
(2)
封闭：向步骤
(1)
已包被的酶标板的孔中加入封闭液，进行封闭，之后洗板；
(3)
加样：使用样品稀释液将阳性血清
、
阴性血清和待测血清样品进行稀释后，分别加入步骤
(2)
已封闭的酶标板的孔中，进行孵育，之后洗板；
(4)
加酶标二抗：向步骤
(3)
的酶标板的孔中加入酶标二抗，进行孵育，之后洗板；
(5)
显色和终止：向步骤
(4)
的酶标板的孔中加入底物显色液，静置一段时间后，向孔中加入终止液终止反应；和
(6)
检测：使用酶标仪检测阳性血清
、
阴性血清和待测血清样品对应孔的
450nm
处
OD
值，若阳性血清对应的
OD
值
≥3
倍的阴性血清对应的
OD
值，则实验成立，若待测血清样品对应的
OD
值
≥3
倍的阴性血清对应的
OD
值，则判定为阳性，反之则为阴性
。...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉格木德，齐志涛，侯丽娜，陈坚，李超，杜宇，辛俊利，刘瑞明，李晓艳，扬青春，俎红丽，王岩，贺瑶，王秉昆，张静，胡莉红，白伟琴，王华，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：