诊断试剂盒及LMWK-Fc在制备肝纤维化诊断试剂中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种诊断试剂盒及LMWK

【技术实现步骤摘要】
诊断试剂盒及LMWK
‑
Fc在制备肝纤维化诊断试剂中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种诊断试剂盒及LMWK
‑
Fc在制备肝纤维化诊断试剂中的应用。

技术介绍

[0002]根据《肝纤维化诊断及治疗共识(2019年)》，目前临床常用的肝纤维化的诊断方法分为四类：肝活检组织病理学、肝静脉压力梯度、血液生物化学指标、影像学评估。肝活组织病理学仍然是肝纤维化诊断的“金标准”，由于肝活检属于创伤性检查，限制了其普遍应用。肝静脉压力梯度和影像学评估容易受到仪器设备、操作者的技术和经验等因素的影响，特异性和灵敏度差异大。常用的血清学指标特异性差，易受到其他内科疾病的影响，影响肝纤维化判断的准确性。
[0003]糖基化是细胞内普遍存在的一种翻译后修饰，它能够参与多种生理病理过程的调控，核心岩藻糖基化是岩藻糖以α1，6键的形式与N
‑
聚糖最里面的N
‑
乙酰葡萄糖胺连接的一种修饰。核心岩藻糖基化修饰普遍存在于糖蛋白中，蛋白质核心岩藻糖基化水平的异常改变与肝脏疾病密切相关。低分子量激肽原是肝脏分泌的一种与炎症和应激相关的急性期蛋白，具有抑制巯基蛋白酶的功能。体内的低分子量激肽原主要有三种糖基化形式：核心岩藻糖基化低分子量激肽原、非岩藻糖化低分子量激肽原和天线结构岩藻糖基化低分子量激肽原。本专利技术研究发现，核心岩藻糖基化低分子量激肽原(Core
‑
fucosylated
‑
Low
‑
>Molecular
‑
Weight Kininogen，LMWK
‑
Fc)水平在健康人中较低，在肝纤维化和肝硬化人群体中显著升高。通过检测血样中的核心岩藻糖基化低分子量激肽原的水平来诊断肝纤维化，可以改善目前肝纤维化诊断过程诊断准确率较低的问题。
[0004]基于此，本专利技术的首要目的是提供一种LMWK
‑
Fc作为肝纤维化的标志物在制备肝纤维化的诊断产品中的应用。
[0005]目前，测定LMWK
‑
Fc的方法主要是质谱和酶联免疫法(ELISA)。质谱价格昂贵，不利于大规模市场推广；ELISA法通常需要用手工对样本进行前处理，比较耗费人力和时间，同时其检测的灵敏度和线性范围也较低，主要用于实验室研究分析，在临床的检测应用上具有一定的局限性，远不能满足临床需求。目前市场上仍缺乏速度快、稳定性好、灵敏度高、特异性强的LMWK
‑
Fc测定试剂，尤其是自动化检测试剂。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种诊断试剂盒及LMWK
‑
Fc在制备肝纤维化诊断试剂中的应用。
[0007]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0008]本专利技术的技术方案之一为提供一种诊断试剂盒，用于肝纤维化的诊断，所述诊断试剂盒包括包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒混悬液、酶结合物试剂、去除非特异反应的稀释液、化学发光底物液、以及核心岩藻糖基化低分子量激肽原校准品，所述包被有抗
低分子量激肽原抗体的磁微粒混悬液包括有包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒，所述包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒由抗低分子量激肽原抗体和磁微粒组成，所述去除非特异反应的稀释液包括有第一表面活性剂，所述酶结合物试剂包括有酶标记物，所述酶标记物由酶和标记物组成。
[0009]进一步地，所述包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒混悬液、所述酶结合物试剂、所述去除非特异反应的稀释液与化学发光底物液的体积比1:2:4:4，所述包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒混悬液的浓度含量为0.05mg/mL～10mg/mL。
[0010]进一步地，所述抗低分子量激肽原抗体与所述磁微粒的质量比为1:1000
‑
1:10；所述抗低分子量激肽原抗体的类型选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD中的任意一种。
[0011]进一步地，所述磁微粒选自羧基化磁微粒、链霉亲和素磁微粒或甲苯磺酰基磁微粒中的任意一种；所述磁微粒的粒径为0.5μm
‑
5.0μM。
[0012]进一步地，所述酶选自碱性磷酸酶或辣根过氧物酶，所述标记物为凝集素，所述凝集素为特异性识别核心岩藻糖基化低分子量激肽原上的核心岩藻糖的凝集素；所述标记物与酶之间的质量比为2:1
‑
1:4；所述化学发光底物液选自AMPPD、AMPPD衍生物、APS
‑
5、鲁米诺、或鲁米诺衍生物中的任意一种。
[0013]进一步地，所述抗低分子量激肽原抗体包被的磁微粒混悬液、所述去除非特异反应的稀释液、所述酶结合物试剂还包括缓冲液、稳定剂。
[0014]更进一步地，所述缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷、磷酸氢二盐
‑
磷酸二氢盐液、吗啉乙磺酸、3
‑
吗啉丙磺酸或3
‑
(N
‑
吗啡啉)
‑2‑
羟基丙磺酸中的任意一种，所述缓冲液的pH值为6.5
‑
7.5，所述缓冲液的浓度为0.1mmol/L
‑
100mmol/L；
[0015]所述第一表面活性剂选自吐温
‑
20、吐温
‑
80、CE510或CE210中的任意一种或多种；所述第一表面活性剂的浓度为0.1V/V％～2.0V/V％。
[0016]更进一步地，所述稳定剂选自离子螯合剂、糖类、无机盐、防腐剂、第二表面活性剂、或血清白蛋白中的任意一种或多种，其中，
[0017]所述离子螯合剂的浓度为0.2
‑
50mmol/L，所述离子螯合剂选自EDTA、EDTA
‑
2Na或EDTA
‑
4Na中的任意一种或多种；
[0018]所述糖类的浓度为2W/V％～10W/V％，所述糖类选自海藻糖、蔗糖、果糖或乳糖中的任意一种或多种；
[0019]所述无机盐的浓度为0.9W/V％～50W/V％，所述无机盐选自氯化钠、氯化镁、氯化锌或硫酸铵中的任意一种或多种；
[0020]所述防腐剂的浓度为0.05W/V％～1.0W/V％，所述防腐剂选自叠氮化钠、N
‑
甲基
‑
异噻唑酮、N'
‑
亚甲基
‑
双[N'
‑
(3
‑
羟甲基
‑
2,5
‑
二酮
‑4‑
咪唑烷基)]脲或ProClin 300中的任意一种或多种；
[0021]所述第二表面活性剂的浓度为0.1V/V％～2.0V/V％，所述第二表面活性剂选自CA
‑
630、TERGITOL
TM
15
‑
S
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诊断试剂盒，用于肝纤维化的诊断，其特征在于，所述诊断试剂盒包括包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒混悬液、酶结合物试剂、去除非特异反应的稀释液、化学发光底物液、以及核心岩藻糖基化低分子量激肽原校准品，所述包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒混悬液包括有包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒，所述包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒由抗低分子量激肽原抗体和磁微粒组成，所述去除非特异反应的稀释液包括有第一表面活性剂，所述酶结合物试剂包括有酶标记物，所述酶标记物由酶和标记物组成。2.根据权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒混悬液、所述酶结合物试剂、所述去除非特异反应的稀释液与化学发光底物液的体积比1:2:4:4，所述包被有抗低分子量激肽原抗体的磁微粒混悬液的浓度含量为0.05mg/mL～10mg/mL。3.根据权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述抗低分子量激肽原抗体与所述磁微粒的质量比为1:1000
‑
1:10；所述抗低分子量激肽原抗体的类型选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD中的任意一种。4.根据权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述磁微粒选自羧基化磁微粒、链霉亲和素磁微粒或甲苯磺酰基磁微粒中的任意一种；所述磁微粒的粒径为0.5μm
‑
5.0μM。5.根据权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述酶选自碱性磷酸酶或辣根过氧物酶，所述标记物为凝集素，所述凝集素为特异性识别核心岩藻糖基化低分子量激肽原上的核心岩藻糖的凝集素；所述标记物与酶之间的质量比为2:1
‑
1:4；所述化学发光底物液选自AMPPD、AMPPD衍生物、APS
‑
5、鲁米诺、或鲁米诺衍生物中的任意一种。6.根据权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述抗低分子量激肽原抗体包被的磁微粒混悬液、所述去除非特异反应的稀释液、所述酶结合物试剂还包括缓冲液、稳定剂。7.根据权利要求6所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷、磷酸氢二盐
‑
磷酸二氢盐液、吗啉乙磺酸、3
‑
吗啉丙磺酸或3
‑
(N
‑
吗啡啉)
‑2‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈福坤，麻玉雯，姜佩，张跃建，
申请(专利权)人：复星诊断科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：