一种鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株及其应用

【技术实现步骤摘要】
一种鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株及其应用


[0001]本专利技术涉及一种疫苗株及其应用，属于生物医药
，具体涉及一种鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株及其应用
。

技术介绍

[0002]淡水鱼细菌性败血症，是危害淡水鱼的种类最多
、
流行地域最广
、
流行季节最长
、
造成损失较大的一种急性传染病，其主要危害草鱼
、
鲢鱼
、
鳙鱼
、
鲤鱼
、
鲫鱼
、
鳊鱼
、
团头鲂
、
鳜鱼
、
罗非鱼
、
斑点叉尾鮰
、
鳖和蛙等淡水养殖水生动物，发病高峰期通常为每年的6～9月，常常出现急性暴发，死亡率高
。
病鱼大多有出血性败血症症状，如鳍条基部出血
、
肛门红肿
、
体表有出血点以及腹部肿胀，部分病鱼腹腔有血样腹水等
。
[0003]引起淡水鱼细菌性败血症的主要病原为气单胞菌
(Aeromonas spp.)。
气单胞菌隶属于气单胞菌科
(Aeromonadaceae)
气单胞菌属
(Aeromonas)
，其广泛分布于自然界的水体
、
土壤中，通常可以在淡水
、
海水
、
污水
、
健康或患病鱼类
、
食品以及动物粪便中分离到气单胞菌
。
气单胞菌被认为是一种机会致病菌，在外界条件如水温
、
水质
、
运输等条件影响下，会引起鱼类细菌性败血症的暴发
。
[0004]2015
年张德锋等对
2009
‑
2014
年间我国南方地区
70
口池塘患病的草鱼
、
鲢鱼
、
鳙鱼
、
鲫鱼
、
鳜鱼
、
斑点叉尾和乌鳢等
15
种鱼类体内分离的
143
株气单胞菌为研究对象，通过细菌生理生化特征分析以及保守基因
gyrB
和
rpoD
序列测序分析，
143
株气单胞菌中有维氏气单胞菌
80
株，嗜水气单胞菌
40
株，简氏气单胞菌9株，舒氏气单胞菌
10
株和水生气单胞菌4株
。
表明近年来我国南方地区养殖鱼类气单胞菌病的病原具有较高的种类多样性，其中维氏气单胞菌
(80/143,56
％
)
的出现比例最高，该菌主要感染草鱼
、
鲢鱼和鳜鱼等；嗜水气单胞菌次之
(40/143,28
％
)
，其主要感染鳙鱼
、
团头鲂和斑点叉尾等
。
[0005]2021
年刘小芳等通过
PCR
扩增管家基因
gyrB
，测序后构建系统发育进化树，把从患病草鱼
、
鲫鱼等淡水鱼分离的
173
株气单胞菌分类为维氏气单胞菌
、
嗜水气单胞菌和简氏气单胞菌3种
。119
株
(68.8
％，
119/173)
病原菌与维氏气单胞菌
CECT 4486、CECT5761
和
ATCC 35624
等聚为一枝，这表明
119
株病原菌属于维氏气单胞菌类群
。
另外还发现，同一条患病鱼内脏中同时分离到维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌，这说明维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌能引起养殖鱼类复合感染，可能造成更大养殖损失
。
[0006]目前国内已有针对嗜水气单胞菌的商品化灭活疫苗，也开展了维氏气单胞菌灭活疫苗和基因工程疫苗的相关研究，但还未有维氏气单胞菌天然弱毒活疫苗的
。

技术实现思路

[0007]本专利技术目的在于拓展现有制备疫苗技术，提供维氏气单胞菌弱毒疫苗株及其应用
。
本专利技术提出了一种鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株，
2023
年3月7日保藏于湖北省武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为
CCTCC NO
：
M 2023260。
[0008]经测序分析，该维氏气单胞菌菌株
FS12001
基因组的大小为
4,711,745bp
，
GC
含量
为
58.45
％
。
具有
4,128
个编码蛋白质基因
(
占基因组大小的
86.65
％
)
，
128
个转运
RNA
基因，
31
个核糖体
RNA
基因
。
基因组有4个
CRISPR
序列
、4
个基因岛
、4
个前噬菌体
、4
个基因簇
、4
个启动子和4个旁系同源基因
。
基因组中重复序列总长度
30,834bp
，重复序列含量占
0.65
％
。
与已报道的不同来源的维氏气单胞菌有明显区别
。
[0009]进一步而言，所述维氏气单胞菌菌株
FS12001
为弱毒株，对斑马鱼半数致死量为
2.8
×
108CFU。
[0010]进一步而言，所述维氏气单胞菌弱毒株
FS12001
具有良好的凝集抗原性，其兔抗血清对不同来源的强毒的维氏气单胞菌菌株均能产生良好的特异性凝集反应
。
[0011]本专利技术提供所述维氏气单胞菌弱毒株
FS12001
在制备疫苗中的应用，所述疫苗为活疫苗或灭活疫苗，对淡水鱼有良好的免疫效力，以安全剂量对鲫鱼进行高渗浸泡和注射免疫，可有效预防维氏气单胞菌引起的细菌性败血症
。
[0012]进一步而言，所述疫苗可用于腹腔注射免疫或高渗浸泡免疫；
[0013]所述腹腔注射免疫中，使用所述维氏气单胞菌的活疫苗，菌株
FS12001
含量为
3.0
×
107CFU/ml
～
3.0
×
108CFU/ml
；使用所述维氏气单胞菌的灭活疫苗，菌株
FS12001
含量为
3.0
×
109CFU/ml
；
[0014]所述高渗浸泡免疫中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株，其特征在于：所述鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株，其命名为维氏气单胞菌菌株
FS12001
，于
2023
年3月7日保藏于湖北省武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为
CCTCC NO
：
M 2023260。2.
如权利要求1所述的鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株，其特征在于：经测序分析，该维氏气单胞菌
FS12001
基因组的大小为
4,711,745bp
，
GC
含量为
58.45
％；具有
4,128
个编码蛋白质基因，占基因组大小的
86.65
％；具有
128
个转运
RNA
基因，
31
个核糖体
RNA
基因；基因组有4个
CRISPR
序列
、4
个基因岛
、4
个前噬菌体
、4
个基因簇
、4
个启动子和4个旁系同源基因；基因组中重复序列总长度
30,834bp
，重复序列含量占
0.65
％
。3.
如权利要求2所述的鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株，其特征在于：所述维氏气单胞菌菌株
FS12001
为弱毒株，对斑马鱼半数致死量为
2.8
×
108CFU。4.
权利要求1‑3中任一项所述的鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株在制备疫苗中的应用，其特征在于：所述鱼类维氏气单胞菌弱毒疫苗株为维氏气单胞菌菌株
FS12001
；所述疫苗用于预防维氏气单胞菌引起的细菌性败血症
...

【专利技术属性】
技术研发人员：任燕，王艳娇，张德锋，王庆，王英英，李莹莹，莫绪兵，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：