一种融合纳米囊泡及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种融合纳米囊泡及其制备方法与应用，该融合纳米囊泡为茶叶外泌体纳米囊泡与茶枝柑果皮中的外泌体纳米囊泡融合而成，所述融合纳米囊泡为具有磷脂双分子层结构的球形纳米囊泡

【技术实现步骤摘要】
一种融合纳米囊泡及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种融合纳米囊泡及其制备方法与应用
。

技术介绍

[0002]炎症性肠病
(IBD)
是一种累及回肠
、
直肠
、
结肠的特发性肠道炎症性疾病，主要包括溃疡性结肠炎
(UC)
和克罗恩病
(CD)
两种类型
。
近年来，随着人们生活方式的改变，
IBD
的发病率呈逐年上升趋势，其临床表现主要为腹泻
、
腹痛，甚至血便
。IBD
的致病因素及发病机制复杂，至今尚未完全明确，其常规的治疗药物主要包括免疫抑制剂
、
全身性皮质类固醇和5‑
氨基水杨酸，但由于毒副作用和耐药性等问题，这些传统治疗手段仅仅旨在减少炎症和延缓病程，却无法根治
IBD。
临床实践中发现，即便是缓解了
IBD
患者的症状，其肠道依然持续存在炎症反应，进而导致肠道结构不可逆改变，最终诱发癌症等多种并发症，严重影响了患者的生活质量
。
因此，寻找一种安全的
、
可根除
IBD
的治疗手段迫在眉睫
。
[0003]内含生物活性脂质
、
蛋白质
、RNA
和其他药理活性分子的细胞外囊泡是一类极具潜力的天然纳米药物，且具有作为天然纳米载体的独特形态和组成特征
。/>相比于动物细胞外囊泡，可食用植物来源外泌体样纳米囊泡
(ELNVs)
作为植物细胞的天然产物，来源更多，更容易大批量制备，且免疫原性低，毒性小，相对安全，在
IBD
靶向治疗方面也具有良好的应用前景
。
[0004]茶叶是世界上最受欢迎
、
消费最广泛的饮料之一，它具有独特的风味品质和潜在的健康功效
。
茶叶中富含的茶多酚
、
黄酮
、
脂质和多糖等有益化合物赋予了其抗炎
、
抗氧化
、
抗肿瘤和降血脂等多种生物活性
。
[0005]茶叶来源
ELNVs
已被报道能够减少
RAW 264.7
小鼠巨噬细胞内活性氧的产生，抑制巨噬细胞分泌的促炎细胞因子的表达，而增加抗炎细胞因子
IL
‑
10
的含量；同时口服茶叶来源
ELNVs
可以有效抑制肠道炎症反应，预防或减轻
IBD
和
IBD
相关的结肠癌
。
另外，茶枝柑果皮富含橙皮甙
、
川陈皮素等多甲氧基黄酮，能抑制肿瘤细胞增殖，制干即为中药陈皮，是陈皮正品，药用价值高
。
因此，茶枝柑果皮来源的
ELNVs
在治疗
IBD
及
IBD
相关癌症方面也具有广阔应用前景
。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种融合纳米囊泡及其制备方法与应用，具有形貌均一
、
结构稳定的特点，且使融合纳米囊泡能够集多种有益成分为一体，能够协同作用，起到增强抗炎
、
抗氧化
、
抗肿瘤活性的效果
。
[0007]本专利技术通过以下技术手段解决上述技术问题：
[0008]第一方面，本申请提供了一种融合纳米囊泡，所述融合纳米囊泡为茶叶外泌体纳米囊泡与茶枝柑果皮中的外泌体纳米囊泡融合而成，所述融合纳米囊泡为具有磷脂双分子层结构的球形纳米囊泡
。
[0009]根据上述技术手段，将茶叶中的纳米囊泡与茶枝柑果皮中的纳米囊泡融合形成具有磷脂双分子层结构的球形纳米囊泡，能够集茶多酚
(
儿茶素
)、
陈皮甙
、
橘皮素
、
川陈皮素
、
槲皮素等多重功效成分于一体，并协同增强抗炎
、
抗氧化
、
抗肿瘤活性的作用，使融合纳米囊泡为改善
IBD
奠定理论基础
。
[0010]结合第一方面，作为优选的，所述融合纳米囊泡的水合粒径为
122.4
±
0.8nm
，
zeta
电位为
‑
17.2
±
0.8mV。
[0011]第二方面，本申请提供了一种融合纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0012]S1.
采集茶叶与茶枝柑果皮，分别洗涤干净，再分别置于预冷的磷酸盐缓冲液中，通过均质破碎，分别得到茶叶以及茶枝柑果皮的破碎物；
[0013]S2.
将
S1
步骤中的茶叶以及茶枝柑果皮的破碎物分别通过离心分离，分别得到初步分离的茶叶上清液和茶枝柑果皮上清液，再分别将初步分离的茶叶上清液和茶枝柑果皮上清液超高速离心分离，分别收集初步分离的茶叶上清液和茶枝柑果皮上清液中的沉淀物；
[0014]S3.
将
S2
步骤中的茶叶上清液中的沉淀物和茶枝柑果皮上清液中的沉淀物分别重悬在磷酸盐缓冲液中，再分别加入不同浓度梯度的蔗糖溶液，并超高速离心分离，分别得到茶叶外泌体纳米囊泡与茶枝柑果皮中的外泌体纳米囊泡；
[0015]S4.
将
S3
步骤中的茶叶外泌体纳米囊泡与茶枝柑果皮中的外泌体纳米囊泡混合后，再通过溶剂进行脂质和水溶性功能成分分离，再将脂质和水溶性功能成分通过薄膜水化法制备重组脂质体，将重组脂质体通过脂质体挤出器挤出，得到融合纳米囊泡
。
[0016]根据上述技术手段，通过先分别提取茶叶中的纳米囊泡和茶枝柑果皮中的纳米囊泡，再对上述两种纳米囊泡进行纯化，得到纯净的两种纳米囊泡，再将纯化后的纳米囊泡进行有机相和水相分离，使纳米囊泡和茶多酚
(
儿茶素
)、
陈皮甙
、
橘皮素
、
川陈皮素
、
槲皮素等有益成分分离，再通过薄膜水化法重组制备纳米囊泡，使纳米囊泡重新承载茶多酚
(
儿茶素
)、
陈皮甙
、
橘皮素
、
川陈皮素
、
槲皮素等有益成分，从而改善了纳米囊泡担载的有效活性成分的细胞摄取，并协同增强抗炎
、
抗氧化和抗肿瘤活性，且重组的纳米囊泡形貌均一
、
结构更稳定，进而能够保证纳米囊泡在通过胃肠道过程中的完整性，为纳米囊泡在体内改善
IBD
奠定理论基础
。
[0017]结合第二方面，作为优选的，所述
S1
步骤中，茶叶为鲜叶，茶枝柑果皮为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种融合纳米囊泡，其特征在于，所述融合纳米囊泡为茶叶外泌体纳米囊泡与茶枝柑果皮中的外泌体纳米囊泡融合而成，所述融合纳米囊泡为具有磷脂双分子层结构的球形纳米囊泡
。2.
根据权利要求1所述的融合纳米囊泡，其特征在于，所述融合纳米囊泡的水合粒径为
122.4
±
0.8nm
，
zeta
电位为
‑
17.2
±
0.8mV。3.
一种如权利要求1或2所述的融合纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.
采集茶叶与茶枝柑果皮，分别洗涤干净，再分别置于预冷的磷酸盐缓冲液中，通过均质破碎，分别得到茶叶以及茶枝柑果皮的破碎物；
S2.
将
S1
步骤中的茶叶以及茶枝柑果皮的破碎物分别通过离心分离，分别得到初步分离的茶叶上清液和茶枝柑果皮上清液，再分别将初步分离的茶叶上清液和茶枝柑果皮上清液超高速离心分离，分别收集初步分离的茶叶上清液和茶枝柑果皮上清液中的沉淀物；
S3.
将
S2
步骤中的茶叶上清液中的沉淀物和茶枝柑果皮上清液中的沉淀物分别重悬在磷酸盐缓冲液中，再分别加入不同浓度梯度的蔗糖溶液，并超高速离心分离，分别得到茶叶外泌体纳米囊泡与茶枝柑果皮中的外泌体纳米囊泡；
S4.
将
S3
步骤中的茶叶外泌体纳米囊泡与茶枝柑果皮中的外泌体纳米囊泡混合后，再通过溶剂进行脂质和水溶性功能成分分离，再将脂质和水溶性功能成分通过薄膜水化法制备重组脂质体，将重组脂质体通过脂质体挤出器挤出，得到融合纳米囊泡
。4.
根据权利要求3所述的融合纳米囊泡的制备方法，其特征在于，所述
S1
步骤中，茶叶为鲜叶，茶枝柑果皮为鲜果皮，先将茶叶与茶枝柑果皮洗涤干净后，再剪碎，剪碎后再置于预冷的磷酸盐缓冲液中，所述磷酸盐缓冲液与茶叶以及茶枝柑果皮的重量比为
(1
‑
10)
：
1。5.
...

【专利技术属性】
技术研发人员：林智，周梦雪，王颖，施江，彭群华，吕海鹏，戴伟东，张悦，
申请(专利权)人：中国农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：