一种新型聚多巴胺限域氧化沉积方法与应用技术

本发明专利技术属于有机复合材料技术领域，具体涉及一种新型聚多巴胺限域氧化沉积方法与应用

【技术实现步骤摘要】
一种新型聚多巴胺限域氧化沉积方法与应用


[0001]本专利技术属于有机复合材料
，具体涉及一种新型聚多巴胺限域氧化沉积方法与应用
。

技术介绍

[0002]利用抗原抗体之间的特异性识别结合，以及酶联二抗催化显色底物沉积的免疫组织化学
(IHC)
技术已被广泛用于蛋白质原位染色分析
。IHC
技术依靠一抗对靶标蛋白的识别，引入过氧化物酶
(HRP)
偶联二抗，催化
3,3
’‑
二氨基联苯胺
(DAB)
的氧化，使其沉积在细胞膜表面，从而对目标蛋白进行显色
。
然而，免疫组化只能评估蛋白质的表达水平，不能反应蛋白之间的相互作用和聚集状态，不利于个性化治疗的实施
。
[0003]核酸适配体是通过体外富集筛选得到的蛋白质高特异性亲和核酸序列，因其与靶标物质的结合能力可与抗体媲美，被称作“化学抗体”。
基于
DNA
碱基之间的互补配对原则，可以设计组装复杂的二维
、
三维
DNA
结构，进而开发出具有特定功能的
DNA
逻辑门纳米器件
。
通过
DNA
逻辑门纳米器件整合两个或多个核酸适配体，可以将核酸适配体对不同蛋白质靶标的识别信息转换为串联或并联输出信号，从而对细胞膜表面的蛋白质相互作用进行识别
(J.Am.Chem.Soc.2018,140(31),9793
‑
>9796
；
Chem.Rev.2021,121(22),13797
‑
13868)。
此外，在
DNA
逻辑门器件中引入
G
‑
四链体
/Hemin
，利用其
HRP
仿酶活性对显色底物的催化，可以将识别信号转换为显色信息
(Angew.Chem.,Int.Ed.2021,60(40),21673
‑
21678.)。
然而，显色产物在溶液中的随机扩散使其输出信号只能代表靶标蛋白的表达水平，而无法对靶标进行原位分析
。
[0004]G
‑
四链体是由
G
‑
四分体平面通过
π
‑
π
堆积形成的四股螺旋核酸结构，每一层的
G
‑
四分体是由4个鸟嘌呤核苷酸通过
Hoogteen
氢键连接而成
。
申请号为
CN2021106103891
，专利技术名称为“一种新型半醌自由基纳米材料及其制备方法与应用”的专利公开了一种将含有连续
G
序列的核酸退火复性，得到含
G
‑
四链体的水溶液，然后再在该水溶液中加入血红素得到
G
‑
四链体
/Hemin
复合物的方法
。
该专利发现部分聚多巴胺可以通过
π
‑
π
堆积插入
G
‑
四分体的
π
平面之间，剩余的聚多巴胺则可以将
G
‑
四链体粘附在一起
。
由于
G
‑
四链体之间存在静电斥力，因此
G
‑
四链体无法纵向堆叠，最终横向排列形成纳米片形貌的聚合物
。
如果只是将
G
‑
四链体
/Hemin
复合物引入
DNA
逻辑门器件中，利用聚多巴胺在
G
‑
四链体上的附着作为显色剂，则会存在催化位点少，显色程度低的问题，不利于染色结果的观察
。
[0005]综上所述，有必要提出一种新的方法和策略，以弥补现有技术方案的不足
。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种新型聚多巴胺限域氧化沉积方法与应用，具体技术方案如下
。
[0007]一种控制聚多巴胺限域氧化沉积来制备聚多巴胺纤维的方法，包括以下步骤：
[0008]步骤1：将含有非连续
G
序列的第1触发序列与发夹序列在自组装缓冲液中混合，并
于室温下孵育使所述第1触发序列与发夹序列发生杂交链式反应得到
G4
纳米线，脱去盐离子
(
具体来说，使用
DNA
纯化试剂盒处理以脱去自组装缓冲液中的盐离子
)
得到
G4
纳米线水溶液
(
在该反应步骤是必要的，因为盐离子会和聚多巴胺配位组装，从而影响最终合成产物的形貌
)
，所述
G4
纳米线上包括多个交错排列的
G
‑
四链体
(
简称
G4)
；
[0009]步骤2：将步骤1得到的
G4
纳米线与血红素于室温下孵育得到
G4
纳米线
/Hemin
复合物，所述
G4
纳米线中单个
G
‑
四链体与血红素的摩尔比为
1:1
～
1:50
；
[0010]步骤3：将步骤2得到的
G4
纳米线
/Hemin
复合物与多巴胺水溶液混合，并加入
H2O2，所述
G4
纳米线
/Hemin
复合物在
H2O2作用下将多巴胺催化氧化为聚多巴胺；
[0011]步骤4：将步骤3得到的混合物搅拌
0.5
‑
10h
，使所述聚多巴胺在所述
G4
纳米线的每个
G
‑
四链体上氧化沉积得到聚多巴胺纳米纤维，然后以
10000
‑
15000rpm
的转速离心
10
‑
30min
，收集得到所述聚多巴胺纳米纤维
。
[0012]本专利技术提供的制备方法中最终混合物的搅拌时间为
0.5
‑
10
小时，本专利技术的研究团队经过实验发现，在所述搅拌时间段内均可制备得到本专利技术中的复合聚多巴胺纳米纤维材料，其区别在于制得的材料大小和尺寸
。
本制备方法提供的搅拌时间以实现本专利技术制得的复合纳米纤维的最终形貌特征
(
即，纤维状，长度
0.2
～
50
μ
m
，宽度
10
～
200nm)
为准
。
[0013]进一步，所述第1触发序列的核苷酸序列如
SEQ I本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种控制聚多巴胺限域氧化沉积来制备聚多巴胺纤维的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将含有非连续
G
序列的第1触发序列与发夹序列在自组装缓冲液中混合，并于室温下孵育使所述第1触发序列与发夹序列发生杂交链式反应得到
G4
纳米线，脱去盐离子得到
G4
纳米线水溶液，所述
G4
纳米线上包括多个交错排列的
G
‑
四链体；步骤2：将步骤1得到的
G4
纳米线与血红素于室温下孵育得到
G4
纳米线
/Hemin
复合物，所述
G4
纳米线中单个
G
‑
四链体与血红素的摩尔比为
1:1
～
1:50
；步骤3：将步骤2得到的
G4
纳米线
/Hemin
复合物与多巴胺水溶液混合，并加入
H2O2，所述
G4
纳米线
/Hemin
复合物在
H2O2作用下将多巴胺催化氧化为聚多巴胺；步骤4：将步骤3得到的混合物搅拌
0.5
‑
10h
，使所述聚多巴胺在所述
G4
纳米线的每个
G
‑
四链体上氧化沉积得到所述聚多巴胺纳米纤维，然后以
10000
‑
15000rpm
的转速离心
10
‑
30min
，收集得到所述聚多巴胺纳米纤维
。2.
如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第1触发序列的核苷酸序列如
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蓉，王振强，李国兵，黄景彬，许汝福，赖文静，秦铭，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：