一种用于人乳头瘤病毒检测的制造技术

本发明专利技术公开了一种用于人乳头瘤病毒检测的

【技术实现步骤摘要】
一种用于人乳头瘤病毒检测的DNA提取液、试剂盒及制备方法


[0001]本专利技术是涉及基因片段检测
，具体地，涉及一种用于检测人类宫颈分泌物中
15
个亚型的人乳头瘤病毒的核酸分型检测的
DNA
提取液
、
试剂盒及制备方法
。

技术介绍

[0002]人乳头瘤病毒
(HPV)
是一种常见的性传播
DNA
病毒，其传播方式主要通过皮肤
‑
皮肤传播及性传播，介由皮肤，阴道，肛，口等途径
。
然而感染
HPV
并不意味着致病，在超过
200
种
HPV
亚型中，绝大多数亚型是低风险类
HPV
，感染后一般不会产生症状，仅有少数低风险
HPV
会在阴道，肛，口，喉咙处产生疣或瘊
。
高风险类
HPV
共有
14
种，即
16
，
18
，
31
，
33
，
35
，
39
，
45
，
51
，
52
，
56
，
58
，
59
，
66
，
68
亚型，可造成宫颈，肛，头，脖子等多处细胞癌变，其中最为危险的为
16
和
18
亚型，是
70
％的
HPV
相关宫颈癌的诱因
。
[0003]与其他性病不同，
HPV
的感染者并不需要产生症状即可传播病毒，且即使不致病，
HPV
也可在携带者体内存活1年以上，这给人们从肉眼上分辨
HPV
携带者和感染者造成很大困难
。HPV
病毒易感染，易携带，难分辨，给社会和民众带来严重的隐患，且一旦发现症状再去检测，往往感染病毒已久，产生器质性病变和癌变的概率很高，给感染者带来长期的生理上和精神上的痛苦
。
鉴于
HPV
的严重危害，早筛查，早发现，早确诊对其控制和治疗都是很有必要的
。
[0004]目前，对于
HPV
的检测方法主要有，显微镜病理检查法，子宫颈细胞检查，液相芯片法，分子杂交法，和荧光
PCR
法
。
[0005]显微镜病理检查法：病理组织制片，之后放到显微镜下由医师观察，结果大多由医师主观判断，缺少客观标准
。
且制片和观察过程繁琐，时间较长，不适宜用于初步诊断
。
[0006]子宫颈细胞学检查法：分为传统制片
/
自动制片
+
自动阅片
/
人工阅片，缺点仍然是缺少客观标准以及时间较长，考验病人耐心，对于初诊当天即想得到结果的病人来说很不友好
。
[0007]液相芯片法：采用液相芯片对
HPV
进行定性，定量，和分型，结果相对准确，但操作过程繁琐，易污染，以及价格昂贵
。
[0008]分子杂交法：利用分子杂交原理对
HPV
进行定性和分型的方法，由于灵敏度较低，可以较好的规避
PCR
的假阳性问题，但也要求检测样本量相对较大，且操作过程中易污染，价格昂贵
。
[0009]荧光
PCR
法：利用
PCR
法扩增病毒的核酸并检测荧光，价格低廉，过程封闭不易污染，灵敏度高对样本量要求小，最重要的是可快速得到结果，对于急于得到结果的初诊病人来说是最友好的方法
。
但是目前现有的提取液和试剂盒检测的种类少，灵敏度较差
。

技术实现思路

[0010]针对现有技术存在的不足，本专利技术第一目的是提供一种用于人乳头瘤病毒检测的
DNA
提取液，无需长时间加热和高速离心即可裂解出样本中的
DNA
，大大提高操作便捷度，采
用冷冻干燥工艺处理扩增体系，使其在常温下保持稳定，避免低温保存和冷链运输
。
[0011]为了实现上述第一目的，本专利技术通过如下技术方案实现
。
[0012]一种用于人乳头瘤病毒检测的
DNA
提取液，所述的
DNA
提取液包括以下组分：扩增冻干微球1，扩增冻干微球2，扩增冻干微球3，扩增冻干微球4，阳性对照冻干微球，阴性对照冻干微球；
[0013]所述扩增冻干微球1中包括：
HPV16
，
35
，
58
和人类内标基因的正反引物和探针；
[0014]所述扩增冻干微球2中包括：
HPV18
，
33
，
51
，
66
的正反引物和探针；
[0015]所述扩增冻干微球3中包括：
HPV39
，
45
，
56
，
59
的正反引物和探针；
[0016]所述扩增冻干微球4中包括：
HPV31
，
52
，
53
，
68
的正反引物和探针；
[0017]所述阳性对照冻干微球中包括：含
HPV16
，
18
，
31
，
33
，
35
，
39
，
45
，
51
，
52
，
53
，
56
，
58
，
59
，
66
，
68
和人类来源内标基因目的基因片段的阳性质粒；
[0018]所述阴性对照冻干微球为冻干保护剂和赋形剂
。
[0019]在所述扩增冻干微球1中：
[0020]所述
HPV16
的引物探针在序列表中的序列为
SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3
；
[0021]所述
HPV35
的引物探针在序列表中的序列为
SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6
；
[0022]所述
HPV58
的引物探针在序列表中的序列为
SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9
；
[0023]所述人类内标基因的引物探针在序列表中的序列为
SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ I本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
NO.42
；所述
HPV53
的引物探针在序列表中的序列为
SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45
；所述
HPV68
的引物探针在序列表中的序列为
SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48。3.
根据权利要求2所述的用于人乳头瘤病毒检测的
DNA
提取液，其特征在于：所述扩增冻干微球1还包括：
10
×
PCR buffer、MgCl2、dNTPs、HPV16
的引物和探针
、HPV35
的引物和探针
、HPV58
的引物和探针
、
人类内标基因的引物和探针；所述扩增冻干微球2还包括：
10
×
PCR buffer、MgCl2、dNTPs、HPV18
的引物和探针
、HPV33
的引物和探针
、HPV51
的引物和探针
、HPV66
的引物和探针；所述扩增冻干微球3还包括：
10
×
PCR buffer、MgCl2、dNTPs、HPV39
的引物和探针
、HPV45
的引物和探针
、HPV56
的引物和探针
、HPV59
的引物和探针；所述扩增冻干微球4还包括：
10
×
PCR buffer、MgCl2、dNTPs、HPV31
的引物和探针
、HPV52
的引物和探针
、HPV53
的引物和探针
、HPV68
的引物和探针
。4.
根据权利要求3所述的用于人乳头瘤病毒检测的
DNA
提取液，其特征在于：所述扩增冻干微球
1、
扩增冻干微球
2、
扩增冻干微球
3、
扩增冻干微...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙泽涛，迟翔宇，吴冰，于绍斌，
申请(专利权)人：天津威高分子诊断科技有限公司，
类型：发明
国别省市：