甘胆酸抗原制造技术

本发明专利技术涉及医学检验技术领域，具体涉及一种甘胆酸抗原

【技术实现步骤摘要】
甘胆酸抗原、抗体、检测试剂制备方法及检测方法


[0001]本专利技术涉及医学检验
，尤其涉及一种甘胆酸抗原
、
抗体
、
检测试剂制备方法及检测方法
。

技术介绍

[0002]正常情况下，人体外周血中的甘胆酸浓度都稳定在低水平，而当人体干细胞受损或胆汁淤积时，会引起甘胆酸代谢和循环紊乱，使肝细胞摄取甘胆酸的能力下降，导致血液中甘胆酸含量升高，甘胆酸值高低还与肝细胞损害及胆汁酸代谢障碍的严重程度相关，血液中甘胆酸值可以评价人体健康
。
目前临床上应用的甘胆酸检测方法主要为均相酶免疫法
、
化学发光法
、
免疫比浊法
。
其中均相酶免疫法简单快速，但稳定性差
。
化学发光法灵敏度高，但同样存在稳定性差，且标记工序繁琐，制作成本高
。
免疫比浊法检测速度快
、
成本低，但由于抗体与小分子直接结合无法形成浊度，灵敏度偏低，需采用竞争法
。
[0003]现有公开号为
CN113721012A、CN105481977A、CN112285345A、CN109444399A
公开的甘胆酸检测试剂
(
胶乳免疫比浊法
)
，竞争物为甘胆酸
‑
蛋白或甘胆酸
‑
蛋白
‑
微球
。
[0004]但是，上述甘胆酸检测试剂
(
胶乳免疫比浊法<br/>)
制备过程较为繁琐，且试剂测定结果可能会受到甘胆酸类似物的干扰，甘胆酸类似物有胆酸钠
、
甘氨熊脱氧胆酸
、
甘氨鹅脱氧胆酸
、
甘氨脱氧胆酸等
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种甘胆酸抗原
、
抗体
、
检测试剂制备方法及检测方法，解决了上述甘胆酸检测试剂
(
胶乳免疫比浊法
)
制备过程较为繁琐，且试剂测定结果可能会受到甘胆酸类似物的干扰的问题
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了一种甘胆酸检测试剂制备方法，包括以下步骤：
[0007]制备试剂
R1
，其中，所述试剂
R1
包括磷酸氢二钠
6g/L
，磷酸二氢钠
1g/L
，氯化钠5～
9g/L
，
2.5
～
5g/L
吐温
‑
20
，叠氮化钠
1g/L
，
EDTA
·
2Na1
～
2g/L
，抗甘胆酸抗体
0.65g/L
，葡聚糖
1g/L
和
PEG600030g/L
；
[0008]制备试剂
R2
；
[0009]制备标准品；
[0010]将所述试剂
R1、
所述试剂
R2
和所述标准品组合，获得甘胆酸检测试剂
。
[0011]其中，制备试剂
R2
，所述方法还包括：
[0012]按
1mL10
％固含量胶乳加纯化水稀释至5％固含量，在磁力搅拌器上搅拌均匀；
[0013]按每毫升胶乳加入
0.015g
的1‑
(3
‑
二甲氨基丙基
)
‑3‑
乙基碳二亚胺和
N
‑
羟基琥珀酰亚胺，磁力搅拌反应
30
分钟；
[0014]按每毫升胶乳加入
10
～
12mg
甘胆酸抗原，并磁力搅拌反应
2.5
小时；
[0015]反应完成后，按每毫升胶乳加入适量封闭液，并磁力搅拌反应2小时，反应完毕后，即完成包被；
[0016]取包被完成的致敏胶乳，用
1.5mL
离心管分装，进行
12000rpm
，
4℃
离心
30
分钟；
[0017]超声稀释后获得所述试剂
R2。
[0018]其中，制备标准品，所述方法还包括：
[0019]称取适量甘氨胆酸水合物溶于
PBS
缓冲液中，配成浓度为
80mg/L
高浓度校准品，并对倍稀释，获得各点校准品
。
[0020]一种甘胆酸抗原制备方法，包括以下步骤：
[0021]将
51mg
固体甘胆酸完全溶解于
1.5mL
二甲基甲酰胺溶液中；
[0022]向溶液中分别加入1‑
(3
‑
二甲氨基丙基
)
‑3‑
乙基碳二亚胺
28.76mg
和
N
‑
羟基琥珀酰亚胺
17.25mg
，并在室温下避光搅拌过夜；
[0023]在
4℃
，
1000rpm
，离心
10min
分离得到的上清液；
[0024]将
5.5
μ
mol
牛血清白蛋白或鸡卵清白蛋白用纯化水溶解至
10mg/mL
左右并逐滴加入，室温下搅拌反应
4h
，偶联反应后，将溶液完全装入透析袋中，置于
PBS
缓冲液中进行透析；
[0025]在
4℃
透析3天，以每天两次更换未结合的甘胆酸，所得的复合物甘胆酸
‑
牛血清白蛋白用作抗原，甘胆酸
‑
鸡卵清白蛋白作为包被抗原
。
[0026]一种抗体制备方法，包括以下步骤：
[0027]用
PBS
缓冲液将合成的甘胆酸
‑
牛血清白蛋白抗原稀释至
1mg/mL
，得到抗原溶液；
[0028]用
1.0mL
抗原溶液与弗式完全佐剂进行混合，对实验动物兔进行初次免疫；
[0029]初次免疫后，再用
1.0mL
相同的抗原溶液与弗式不完全佐剂进行加强免疫，间隔
10
～
14
天，再经2～3次以上的加强免疫；
[0030]对动物进行血清采集，并进行抗血清滴度测定，达到理想滴度后，分离纯化获得抗甘胆酸抗体
。
[0031]一种甘胆酸检测方法，包括以下步骤：
[0032]向6μ
L
甘胆酸检测样品中加入
160
μ
L
的甘胆酸试剂
R1
，混匀，在
37℃...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种甘胆酸检测试剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：制备试剂
R1
，其中，所述试剂
R1
包括磷酸氢二钠
6g/L
，磷酸二氢钠
1g/L
，氯化钠5～
9g/L
，
2.5
～
5g/L
吐温
‑
20
，叠氮化钠
1g/L
，
EDTA
·
2Na1
～
2g/L
，抗甘胆酸抗体
0.65g/L
，葡聚糖
1g/L
和
PEG600030g/L
；制备试剂
R2
；制备标准品；将所述试剂
R1、
所述试剂
R2
和所述标准品组合，获得甘胆酸检测试剂
。2.
如权利要求1所述的甘胆酸检测试剂制备方法，其特征在于，制备试剂
R2
，所述方法还包括：按
1mL10
％固含量胶乳加纯化水稀释至5％固含量，在磁力搅拌器上搅拌均匀；按每毫升胶乳加入
0.015g
的1‑
(3
‑
二甲氨基丙基
)
‑3‑
乙基碳二亚胺和
N
‑
羟基琥珀酰亚胺，磁力搅拌反应
30
分钟；按每毫升胶乳加入
10
～
12mg
甘胆酸抗原，并磁力搅拌反应
2.5
小时；反应完成后，按每毫升胶乳加入适量封闭液，并磁力搅拌反应2小时，反应完毕后，即完成包被；取包被完成的致敏胶乳，用
1.5mL
离心管分装，进行
12000rpm
，
4℃
离心
30
分钟；超声稀释后获得所述试剂
R2。3.
如权利要求1所述的甘胆酸检测试剂制备方法，其特征在于，制备标准品，所述方法还包括：称取适量甘氨胆酸水合物溶于
PBS
缓冲液中，配成浓度为
80mg/L
高浓度校准品，并对倍稀释，获得各点校准品
。4.
一种甘胆酸抗原制备方法，适用于如权利要求1所述的甘胆酸检测试剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将
51mg
固体甘胆酸完全溶解于
1....

【专利技术属性】
技术研发人员：苏钰清，苟文来，
申请(专利权)人：桂林优利特医疗电子有限公司，
类型：发明
国别省市：