一种胰腺神经内分泌肿瘤细胞系及其构建方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种胰腺神经内分泌肿瘤细胞系及其构建方法与应用

【技术实现步骤摘要】
一种胰腺神经内分泌肿瘤细胞系及其构建方法与应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，尤其是涉及一种胰腺神经内分泌肿瘤细胞系及其构建方法与应用
。

技术介绍

[0002]胰腺神经内分泌肿瘤
(NET)
起源于胰腺的胰岛细胞，其分泌多种激素，包括生长抑素
、
胰岛素
、
胰高血糖素
、
血清素和胰多肽
。
在胰腺
NETs
中，手术切除通常可以治愈早期疾病，但
40
％的患者在初始诊断时患有晚期疾病，通常预后不良，复发和转移率高
。
先进和忠实的临床前模型已成为了解肿瘤分子发病机制的关键媒介
。
长期以来，缺乏稳定且具有代表性的人胰腺
NET
细胞系一直是转化研究的主要障碍，例如筛选合适的药物
。
这部分是由于胰腺
NETs
的低增殖率
。
尽管存在这些挑战，一些胰腺
NET
细胞系已经从胰腺
NET
中建立
。
已经开发了
BON1
和
QGP1
人类细胞系
。BON1
细胞系由
Townsend
及其同事于
1986
年从一名患有胰腺
NET2
的
28
岁男性的胰腺周围淋巴结转移中建立
。
卡库等人从一名
61r/>岁男性获得的原发性胰腺
NET
肿瘤组织中建立了
QGP
‑1细胞系
。
它们在植入裸鼠体内时具有致瘤性，并且已广泛用于皮下
、
原位或转移性肿瘤生长的环境中
。
鉴于这两种非功能性细胞系已经使用了
30
多年，这些细胞似乎在培养中获得了更恶性的表型
。
[0003]尽管近年来已经构建了新的细胞系，但这些细胞几乎是有功能的，分泌胰岛素等
。
例如，
NET
细胞系库中的一个有希望的新成员是
NT
‑3细胞，它是从淋巴结转移中建立的从一名
33
岁的患者身上获得的功能性胰岛素瘤
。
临床针对功能性神经内分泌肿瘤和非功能性神经内分泌肿瘤患者往往涉及不同的治疗方法和策略，因此近年来构建的功能性细胞是否适用于非功能性肿瘤患者的治疗仍有待观察
。
此外，胰腺细胞
BON1
和
QGP1
是最广泛使用的，尽管它们不表达一些
NET
标记
。
例如，
SSTR
表达非常低，奥曲肽放射性核素摄取量很小，导致难以研究放射性核素成像和治疗
。
此外，由于增殖速度太快，
BON1
不到两天的倍增时间并不代表胰腺
NET
模型
。
在异种移植模型中，这些细胞系显示出非常快速的生长，而由于血管化不良，这些细胞系在早期发生肿瘤坏死，这也与
NET
的临床特征不同
。
[0004]新型非功能性胰腺
NET
细胞株的建立迫切需要补充细胞株库，甚至替代
BON1
和
QGP1
，而增殖率低
、
神经内分泌特性好的新型
NET
细胞更适合探索其机制和新的治疗药物在临床前模型中
。

技术实现思路

[0005]基于现有技术中缺少非功能性胰腺
NET
细胞株的现状，本专利技术提供一种胰腺神经内分泌肿瘤细胞系及其构建方法与应用
。
[0006]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0007]本专利技术首先提供一种胰腺神经内分泌肿瘤细胞系，所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系为非功能性胰腺
NET
细胞株
。
[0008]本专利技术还进一步提供所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系的构建方法，包括以下步
骤：
[0009]取肿瘤组织，用
II
型胶原酶处理；
[0010]监测细胞增殖状态，当细胞达到亚汇合时，用
PBS
洗涤并用胰蛋白酶
‑
EDTA
溶液处理；
[0011]然后将细胞分离并转移到组织培养板中，将细胞维持在补充有
GlutaMAX
的
DMEM/F12
中，补充有
10
％热灭活胎牛血清；
[0012]在低粘附条件下进行连续胰蛋白酶消化和培养以从肿瘤组织的基质中消除成纤维细胞；
[0013]第7代的肿瘤细胞在体外成功适应，并去除所有成纤维细胞，得到所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系
。
[0014]在本专利技术的一个实施方式中，所述
II
型胶原酶的使用浓度为
1mg/mL。
[0015]在本专利技术的一个实施方式中，所述胰蛋白酶
‑
EDTA
溶液的使用浓度为
0.25
％
。
[0016]在本专利技术的一个实施方式中，培养第
15
代的细胞为可用于实验
。
[0017]本专利技术进一步提供所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系的应用，所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系作为生物研究材料
。
[0018]在本专利技术的一个实施方式中，以所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系作为体外和体内神经内分泌肿瘤研究的生物材料
。
[0019]在本专利技术的一个实施方式中，以所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系作为探索神经内分泌肿瘤机制研究用的生物材料
。
[0020]在本专利技术的一个实施方式中，以所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系作为筛选神经内分泌肿瘤治疗药物用的生物材料
。
[0021]本专利技术从一名
44
岁女性患者的原发性胰腺组织的无功能标本中成功建立了一个新的胰腺
NET
细胞系，
Ki67
指数为
30
％
。
这些名为
SPNE1
的细胞现在已经培养了一年多，它们仍然显示出稳定的神经内分泌表型，包括在异种移植后
。
细胞表征和生长分析有望证明
SPNE1
细胞系可以作为体外和体内神经内分泌肿瘤的临床相关模型
。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点及有效果：
[0023]1.
本专利技术提供的胰腺神经内分泌肿瘤细胞系为非功能性胰腺
NET
细胞，对于补充细胞株库有着很重要的作用，甚至可以替代
BON1
和
QGP1。
[0024]2.
本专利技术提供本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种胰腺神经内分泌肿瘤细胞系，其特征在于，所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系为非功能性胰腺
NET
细胞株
。2.
权利要求1所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：取肿瘤组织，用
II
型胶原酶处理；监测细胞增殖状态，当细胞达到亚汇合时，用
PBS
洗涤并用胰蛋白酶
‑
EDTA
溶液处理；然后将细胞分离并转移到组织培养板中，将细胞维持在补充有
GlutaMAX
的
DMEM/F12
培养基中；在低粘附条件下进行连续胰蛋白酶消化和培养以从肿瘤组织的基质中消除成纤维细胞；第7代的肿瘤细胞在体外成功适应，并去除所有成纤维细胞，得到所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系
。3.
根据权利要求2所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系的构建方法，其特征在于，所述
II
型胶原酶的使用浓度为
1mg/mL。4.
根据权利要求2所述胰腺神经内分泌肿瘤细胞系的构建方法，其特征在于，所述胰蛋白酶
‑
EDTA
溶液的使用浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：虞先濬，吉顺荣，娄鑫，徐晓武，叶增，景德生，
申请(专利权)人：复旦大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：