一种二甲戊灵半抗原制造技术

本发明专利技术涉及免疫分析技术领域，提供了一种二甲戊灵半抗原

【技术实现步骤摘要】
一种二甲戊灵半抗原、抗原、抗体及制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及免疫分析
，尤其涉及一种二甲戊灵半抗原
、
抗原
、
抗体及制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]二甲戊灵是由美国氰胺公司开发的一种苯胺类除草剂，用于防除一年生禾本科杂草和一些阔叶杂草，适用于水稻
、
棉花
、
玉米
、
烟草
、
花生
、
蔬菜及果园作物，由于除草效果好，安全性高，被广泛推广应用
。
但是，二甲戊灵是一种低毒化合物，皮肤接触可能引起溃烂，人体吸收后，可能引起发绀恶心，头晕头痛等症状，因此，农产品中残留的二甲戊灵对身体的危害不可忽视，开发一种用于二甲戊灵的快速检测方法十分必要
。
[0003]目前，检测食品和农产品中二甲戊灵的常用方法有液相色谱法
、
液质联用法以及免疫分析法等
。
液相色谱法和液质联用法虽然检测结果准确，但是需要昂贵的仪器设备，并且操作复杂，对操作人员的要求较高，多限于专业实验室内使用
。
免疫分析法主要包括竞争酶联免疫吸附法
(ELISA)
和胶体金法，与以上两种方法相比免疫分析法操作简便
、
快速，无需专业人员操作，仅需配备基础仪器设备即可，同时由于其适合大批量样本筛选，可广泛应用于食品加工企业原料安全把关以及工商执法部门的现场监管，是非常具有推广价值的食品安全快速筛查方法
。
[0004]但是，目前对于二甲戊灵的免疫分析法普遍存在抗体检测灵敏度不足，效价低的问题
。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种二甲戊灵半抗原
、
抗原
、
抗体及制备方法和应用
。
本专利技术提供的二甲戊灵半抗原和载体蛋白偶联后所得抗原经宿主动物免疫后，能够产生效价高
、
灵敏度高的抗体，有利于提高免疫分析法检测二甲戊灵的准确性
。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]一种二甲戊灵半抗原，具有式
I
所示结构：
[0008][0009]本专利技术还提供了上述方案所述二甲戊灵半抗原的制备方法，包括以下步骤：
[0010]将2‑
甲基
‑4‑
氯卞氨
、
硫酸和硝酸混合进行硝化反应，得到二硝基
‑2‑
甲基
‑4‑
氯卞氨；所述二硝基
‑2‑
甲基
‑4‑
氯卞氨的结构如式
B
所示；
[0011]将所述二硝基
‑2‑
甲基
‑4‑
氯卞氨
、3
‑
氨基戊烷
、
碱性试剂和有机溶剂混合进行取代反应，得到半抗原前体；所述半抗原前体的结构如式
C
所示；
[0012]将所述半抗原前体
、
吡啶和丁二酸酐混合进行缩合反应，得到具有式
I
所示结构的二甲戊灵半抗原；
[0013][0014]优选的，所述硝化反应包括依次进行第一阶段和第二阶段，所述第一阶段的温度为
45
～
48℃
，时间为2～
2.5h
，所述第二阶段的温度为
60
～
65℃
，时间为4～
4.5h
；
[0015]所述取代反应的温度为
80
～
85℃
，时间为4～
4.5h
；
[0016]所述缩合反应的温度为
75
～
80℃
，时间为
12
～
24h。
[0017]优选的，所述硝酸和2‑
甲基
‑4‑
氯卞氨的摩尔比为
(2
～
2.2):1
；
[0018]所述3‑
氨基戊烷和二硝基
‑2‑
甲基
‑4‑
氯卞氨的摩尔比为
(1
～
1.2):1
；
[0019]所述丁二酸酐和半抗原前体的摩尔比为
(1
～
1.2):1。
[0020]本专利技术还提供了一种二甲戊灵抗原，由上述方案所述的二甲戊灵半抗原或上述方案所述的制备方法制备得到的二甲戊灵半抗原与载体蛋白偶联得到
。
[0021]优选的，所述载体蛋白为卵清蛋白或牛血清蛋白；所述载体蛋白为卵清蛋白时，所述二甲戊灵抗原的结构式如式
II
所示：
[0022][0023]当所述载体蛋白为牛血清蛋白时，所述二甲戊灵抗原的结构式如式
III
所示：
[0024][0025]本专利技术还提供了上述方案所述二甲戊灵抗原的制备方法，包括以下步骤：
[0026]将上述方案所述的二甲戊灵半抗原
、
偶联剂和极性溶剂混合进行活化，得到半抗原活化液；
[0027]将所述半抗原活化液和载体蛋白的缓冲溶液混合进行偶联反应，得到所述二甲戊灵抗原
。
[0028]本专利技术还提供了一种二甲戊灵抗体，由上述方案所述的二甲戊灵抗原免疫宿主动物得到
。
[0029]本专利技术还提供了一种检测二甲戊灵的试纸或试剂盒，含有上述方案所述的二甲戊灵抗体
。
[0030]本专利技术还提供了上述方案所述二甲戊灵抗体或上述方案所述的试纸或试剂盒在检测二甲戊灵中的应用
。
[0031]本专利技术提供了一种二甲戊灵半抗原，结构式如式
I
所示
。
本专利技术在二甲戊灵的2位甲基上引入活性基团，所得二甲戊灵半抗原和载体蛋白偶联后，所得抗原的免疫原性高，经宿主动物免疫后，能够产生效价高
、
灵敏度高的抗体，从而提高免疫分析法检测二甲戊灵的准确性
。
[0032]本专利技术还提供了上述方案所述二甲戊灵半抗原的制备方法，本专利技术以对5‑
氯
‑2‑
甲基苯甲氨为原料，经硝化反应
、
取代反应和缩合反应三步得到二甲戊灵半抗原，本专利技术提供的制备方法操作简单，条件温和，原料易得，且产物收率高
、
纯度高
。
实施例结果表明，采用本专利技术的方法制备二甲戊灵半抗原，产物的收率达到
95
％，纯度达到
95
％
。
[0033]本专利技术还提供了二甲戊灵抗原，由上述方案所述的二甲戊灵半抗原与载体蛋白偶联得到
。
本专利技术提供的二甲戊灵半抗原与载体蛋白偶联后，所得抗原免疫原性强
。
实施例结果表明，本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种二甲戊灵半抗原，其特征在于，具有式
I
所示结构：
2.
权利要求1所述二甲戊灵半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将2‑
甲基
‑4‑
氯卞氨
、
硫酸和硝酸混合进行硝化反应，得到二硝基
‑2‑
甲基
‑4‑
氯卞氨；所述二硝基
‑2‑
甲基
‑4‑
氯卞氨的结构如式
B
所示；将所述二硝基
‑2‑
甲基
‑4‑
氯卞氨
、3
‑
氨基戊烷
、
碱性试剂和有机溶剂混合进行取代反应，得到半抗原前体；所述半抗原前体的结构如式
C
所示；将所述半抗原前体
、
吡啶和丁二酸酐混合进行缩合反应，得到具有式
I
所示结构的二甲戊灵半抗原；
3.
根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述硝化反应包括依次进行第一阶段和第二阶段，所述第一阶段的温度为
45
～
48℃
，时间为2～
2.5h
，所述第二阶段的温度为
60
～
65℃
，时间为4～
4.5h
；所述取代反应的温度为
80
～
85℃
，时间为4～
4.5h
；所述缩合反应的温度为
75
～
80℃
，时间为
12
～
24h。...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗贵昆，杨梅，蒲小容，陈丽，姚南南，罗维超，令狐克勇，何国书，杨晓梅，徐忠，
申请(专利权)人：贵州国芯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：