用于中国仓鼠卵巢细胞的高通量冻存的细胞冻存液制造技术

本发明专利技术涉及一种高通量深低温冻存细胞样品的无血清冻存液和使用该冻存液进行冻存的方法

【技术实现步骤摘要】
用于中国仓鼠卵巢细胞的高通量冻存的细胞冻存液


[0001]本专利技术涉及细胞保存领域，具体地涉及一种高通量深低温保存中国仓鼠卵巢细胞的冻存液及使用所述冻存液进行冻存的方法
。

技术介绍

[0002]细胞冻存是细胞保存的主要方法之一
。
利用细胞冻存技术将细胞储存于液氮中深低温保存，可以使细胞达到长期储存的目的
。
同时，良好的冻存质量可以使细胞在复苏时具备与冻存前一致的细胞特性，如细胞倍增时间
、
表达产物的数量和品质的高度稳定和一致等，从而为生产和实验等工作长期稳定的开展提供了必要的支撑
。
[0003]生物制药领域中，工程细胞株是生产和实验的重要原材料
。
中国仓鼠卵巢
(Chinese Hamster Ovary,CHO)
细胞是目前蛋白生产的重要的宿主细胞系，与其他表达系统相比，它具有许多优点
。
已有越来越多的药用蛋白在
CHO
细胞中获得了高效表达，并商业化
。CHO
细胞的有效保存和培养，对生产的稳定性
、
连续性
、
重现性及可控性起到举足轻重的作用
。
规模较大的
、
标准化的和具备长期贮存稳定性的
CHO
细胞库，能够为企业持续性地提供稳定表达目标蛋白的
CHO
细胞
。
这样的细胞库的贮存稳定主要依赖细胞冻存的质量，其中细胞冻存液又是影响细胞冻存质量的重要因素
。
[0004]目前细胞冻存常采用包含血清组分的冻存液进行细胞冻存，一般冻存数量在
20
‑
50
支左右
。
而对于生物制药企业，
20
‑
50
支的细胞库规模，不能满足其长期稳定连续的生产需要，同时细胞库制备和检测的成本较高，特别是细胞库外检的时间周期较长
。
因此，本领域对高通量
(
例如超过
200
支
)
且高质量细胞冻存的技术仍有需求
。
[0005]本专利技术的专利技术人针对中国仓鼠卵巢细胞，开展了建立高通量标准化细胞库的研究，其中研究核心是提供一种用于高通量冻存细胞的细胞冻存液，以及提供一种使用这种细胞冻存液进行冻存的方法
。

技术实现思路

[0006]本申请的一个方面提供了一种用于冻存中国仓鼠卵巢细胞的无血清冻存液，其包含无血清培养基
、5
％
‑
10
％
(v/v)DMSO、0.05
‑
0.1M
海藻糖
、5
‑
10g/L
人白蛋白和2‑
5g/L
甲基纤维素，其中所述无血清培养基选自
CD CHO
培养基
、CD OptiCHO
TM
培养基
、Hycell CHO
培养基
、S3 CD CHO
培养基和
S4 CHO
培养基
。
[0007]在某些实施方式中，上述无血清冻存液包含
7.5
％
(v/v)DMSO。
在某些的实施方式中，上述无血清冻存液包含
10
％
(v/v)DMSO。
[0008]在某些实施方式中，上述无血清冻存液包含
0.05M
海藻糖
。
在某些实施方式中，海藻糖的浓度为
0.1M。
[0009]在某些实施方式中，上述无血清冻存液包含
5g/L
人白蛋白
。
在某些实施方式中，上述无血清冻存液包含
10g/L
人白蛋白
。
在某些实施方式中，无血清冻存液包含的人白蛋白系通过重组表达获得的
。
在某些实施方式中，无血清冻存液包含的人白蛋白包含天然人白蛋
白序列或者是突变的人白蛋白序列
。
[0010]在某些实施方式中，上述无血清冻存液包含
2g/L
甲基纤维素
。
在某些实施方式中，上述无血清冻存液包含
5g/L
甲基纤维素
。
[0011]在某些实施方式中，上述无血清冻存包含无血清培养基
、10
％
(v/v)DMSO、0.05M
海藻糖
、10g/L
人白蛋白和
2g/L
甲基纤维素
。
[0012]在某些实施方式中，上述无血清冻存包含无血清培养基
、7.5
％
(v/v)DMSO、0.1M
海藻糖
、5g/L
人白蛋白和
2g/L
甲基纤维素
。
[0013]在某些实施方式中，本申请的中国仓鼠卵巢细胞为重组中国仓鼠卵巢细胞
。
在某些实施方式中，所述重组中国仓鼠卵巢细胞导入了编码目标蛋白的核酸
。
在某些实施方式中，所述重组中国仓鼠卵巢细胞包含带有稳定整合的编码目标蛋白的核酸的载体
。
在某些实施方式中，所述重组中国仓鼠卵巢细胞稳定地表达目标蛋白
。
[0014]在某些实施方式中，所述重组中国仓鼠卵巢细胞包含编码抗
CD147
单克隆抗体的核酸
。
在某些实施方式中，所述重组中国仓鼠卵巢细胞稳定地表达抗
CD147
单克隆抗体
。
在某些实施方式中，所述抗
CD147
单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区包含如
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列和所述轻链可变区包含如
SEQ ID NO:2
所示的氨基酸序列，或者所述重链可变区包含如
SEQ ID NO:11
所示的氨基酸序列和所述轻链可变区包含如
SEQ ID NO:12
所示的氨基酸序列
。
在某些实施方式中，所述抗
CD147
单克隆抗体在所述中国仓鼠卵巢细胞中的表达量达到
2.0g/L。
[0015]本申请的另一方面提供了一种冻存中国仓鼠卵巢细胞的方法，包括使用本申请公开的无血清冻存液对所述中国仓鼠卵巢细胞进行冻存，包括将中国仓鼠卵巢细胞与所述冻存液混合形成细胞悬液，在
90
分钟之内将所述细胞悬液降温至
‑
80℃
以下，随后将所述细胞悬液转移至液氮中储存
。
[0016]在一些实施方式中，所述中国仓鼠卵巢细胞与所述冻存液混合后的细胞悬浮液的的起始浓度为1×
107–5×
108细胞
/mL。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于冻存中国仓鼠卵巢细胞的无血清冻存液，包含无血清培养基
、5
％
‑
10
％
(v/v)DMSO、0.05
‑
0.1M
海藻糖
、5
‑
10g/L
人白蛋白和2‑
5g/L
甲基纤维素，其中所述无血清培养基选自
CD CHO
培养基
、CD OptiCHO
TM
培养基
、Hycell CHO
培养基
、S3 CD CHO
培养基和
S4 CHO
培养基
。2.
根据权利要求1所述的无血清冻存液，包含
7.5
％
(v/v)DMSO。3.
根据权利要求1所述的无血清冻存液，包含
10
％
(v/v)DMSO。4.
根据权利要求1所述的无血清冻存液，包含
0.05M
海藻糖
。5.
根据权利要求1所述的无血清冻存液，包含
0.1M
海藻糖
。6.
根据权利要求1所述的无血清冻存液，包含
5g/L
人白蛋白
。7.
根据权利要求1所述的无血清冻存液，包含
10g/L
人白蛋白
。8.
根据权利要求1所述的无血清冻存液，包含
2g/L
甲基纤维素
。9.
根据权利要求1所述的无血清冻存液，包含
5g/L
甲基纤维素
。10.
根据权利要求1所述的无血清冻存液，包含无血清培养基
、10
％
(v/v)DMSO、0.05M
海藻糖
、10g/L
人白蛋白和
2g/L
甲基纤维素
。...

【专利技术属性】
技术研发人员：屈颖，陈小春，
申请(专利权)人：江苏太平洋美诺克生物药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：