包含多顺反子表达盒的重组载体及其使用方法技术

本文提供包含多顺反子表达盒的载体，所述多顺反子表达盒包含编码

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含多顺反子表达盒的重组载体及其使用方法


[0001]本公开涉及包含至少三个顺反子的多顺反子载体及其使用方法
。

技术介绍

[0002]在每个细胞群体中共表达多个基因对于广泛多种生物医学应用至关重要
。
多基因表达的标准策略是将转基因并入多个载体中并将每个载体引入细胞中
。
然而，多个载体的使用常常产生基本上异质的经工程化细胞群体，其中并非所有细胞都表达每种转基因或不以相似的程度表达每种转基因
。
这种异质性导致了几个问题，特别是对于治疗应用来说更是如此，包括例如所需的经工程化细胞表型在体内的持久性降低
、
制造复杂和纯化要求以及经工程化细胞产品的批次间变异性
。
[0003]鉴于与使用多个载体在单细胞中共表达多个基因相关的问题，对于单一多顺反子载体的需求尚未得到满足，这些单一多顺反子载体不仅能够在单细胞中表达多个转基因，而且能够在整个细胞群体中以相似的程度表达一些或全部转基因，从而产生针对治疗用途进行优化的工程化细胞群体
。

技术实现思路

[0004]本公开提供了包含多顺反子表达盒的重组载体，该多顺反子表达盒包含可操作地连接至多顺反子多核苷酸的转录调控元件
。
[0005]本文提供了一种包含多顺反子表达盒的重组载体，其中该多顺反子表达盒包含可操作地连接至多顺反子多核苷酸的转录调控元件，该多顺反子多核苷酸包含：第一多核苷酸序列，其编码包含
α
链可变
(V
α
)
区和
α
链恒定
(C
α
)
区的
T
细胞受体
(TCR)
α
链；第二多核苷酸序列，其包含第一
2A
元件；第三多核苷酸序列，其编码包含
β
链可变
(V
β
)
区和
β
链恒定
(C
β
)
区的
TCR
β
链；第四多核苷酸序列，其包含第二
2A
元件；以及第五多核苷酸序列，其编码包含
IL
‑
15
或其功能片段或功能变体和
IL
‑
15R
α
或其功能片段或功能变体的融合蛋白
。
[0006]在一些实施例中，该第一
2A
元件和该第二
2A
元件中的任一者或两者独立地是
P2A
元件
、T2A
元件
、F2A
元件或
E2A
元件
。
[0007]在一些实施例中，该第一
2A
元件是
P2A
元件
。
[0008]在一些实施例中，该
P2A
元件包含多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码：
SEQ ID NO:18
或
20
的氨基酸序列或者含有
1、2
或3个氨基酸修饰的
SEQ ID NO:18
或
20
的氨基酸序列
。
[0009]在一些实施例中，该
P2A
元件包含与
SEQ ID NO:19
或
21
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列
。
[0010]在一些实施例中，该第二
2A
元件是
T2A
元件
。
[0011]在一些实施例中，该
T2A
元件包含多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码：
SEQ ID NO:22
或
24
的氨基酸序列或者含有
1、2
或3个氨基酸修饰的
SEQ ID NO:22
或
24
的氨基酸序
列
。
[0012]在一些实施例中，该
T2A
元件包含与
SEQ ID NO:23
或
25
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列
。
[0013]在一些实施例中，该第二多核苷酸序列和该第四多核苷酸序列中的任一者或两者独立地编码弗林蛋白酶识别位点
。
[0014]在一些实施例中，该弗林蛋白酶识别位点包含：
SEQ ID NO:2
或4的氨基酸序列或者含有
1、2
或3个氨基酸修饰的
SEQ ID NO:2
或4的氨基酸序列
。
[0015]在一些实施例中，该弗林蛋白酶识别位点由
SEQ ID NO:3
或5的多核苷酸序列或者含有
1、2
或3个核苷酸修饰的
SEQ ID NO:3
或5的多核苷酸序列编码
。
[0016]在一些实施例中，该第二多核苷酸序列包含多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码：
SEQ ID NO:10
的氨基酸序列或者含有
1、2
或3个氨基酸修饰的
SEQ ID NO:10
的氨基酸序列
。
[0017]在一些实施例中，该第二多核苷酸序列包含与
SEQ ID NO:11
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列
。
[0018]在一些实施例中，该第四多核苷酸序列包含多核苷酸序列，该多核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种包含多顺反子表达盒的重组载体，其中所述多顺反子表达盒包含可操作地连接至多顺反子多核苷酸的转录调控元件，所述多顺反子多核苷酸包含：
a.
第一多核苷酸序列，其编码包含
α
链可变
(V
α
)
区和
α
链恒定
(C
α
)
区的
T
细胞受体
(TCR)
α
链；
b.
第二多核苷酸序列，其包含第一
2A
元件；
c.
第三多核苷酸序列，其编码包含
β
链可变
(V
β
)
区和
β
链恒定
(C
β
)
区的
TCR
β
链；
d.
第四多核苷酸序列，其包含第二
2A
元件；以及
e.
第五多核苷酸序列，其编码包含
IL
‑
15
或其功能片段或功能变体和
IL
‑
15R
α
或其功能片段或功能变体的融合蛋白
。2.
根据权利要求1所述的重组载体，其中所述第一
2A
元件和所述第二
2A
元件中的任一者或两者独立地是
P2A
元件
、T2A
元件
、F2A
元件或
E2A
元件
。3.
根据权利要求1所述的重组载体，其中所述第一
2A
元件是
P2A
元件
。4.
根据权利要求2或3所述的重组载体，其中所述
P2A
元件包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码：
SEQ ID NO:18
或
20
的氨基酸序列或者含有
1、2
或3个氨基酸修饰的
SEQ ID NO:18
或
20
的氨基酸序列
。5.
根据权利要求2或3所述的重组载体，其中所述
P2A
元件包含与
SEQ ID NO:19
或
21
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列
。6.
根据权利要求1或3至5中任一项所述的重组载体，其中所述第二
2A
元件是
T2A
元件
。7.
根据权利要求2或6所述的重组载体，其中所述
T2A
元件包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码：
SEQ ID NO:22
或
24
的氨基酸序列或者含有
1、2
或3个氨基酸修饰的
SEQ ID NO:22
或
24
的氨基酸序列
。8.
根据权利要求2或6所述的重组载体，其中所述
T2A
元件包含与
SEQ ID NO:23
或
25
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列
。9.
根据权利要求1至8中任一项所述的重组载体，其中所述第二多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列中的任一者或两者独立地编码弗林蛋白酶识别位点
。10.
根据权利要求9所述的重组载体，其中所述弗林蛋白酶识别位点包含：
SEQ ID NO:2
或4的氨基酸序列或者含有
1、2
或3个氨基酸修饰的
SEQ ID NO:2
或4的氨基酸序列
。11.
根据权利要求9所述的重组载体，其中所述弗林蛋白酶识别位点由
SEQ ID NO:3
或5的多核苷酸序列或者含有
1、2
或3个核苷酸修饰的
SEQ ID NO:3
或5的多核苷酸序列编码
。12.
根据权利要求1至
11
中任一项所述的重组载体，其中所述第二多核苷酸序列包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码：
SEQ ID NO:10
的氨基酸序列或者含有
1、2
或3个氨基酸修饰的
SEQ ID NO:10
的氨基酸序列
。13.
根据权利要求1至
11
中任一项所述的重组载体，其中所述第二多核苷酸序列包含与
SEQ ID NO:11
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列
。14.
根据权利要求1至
13
中任一项所述的重组载体，其中所述第四多核苷酸序列包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码：
SEQ ID NO:12
的氨基酸序列或者含有
1、2
或3个氨基
酸修饰的
SEQ ID NO:12
的氨基酸序列
。15.
根据权利要求1至
13
中任一项所述的重组载体，其中所述第四多核苷酸序列包含与
SEQ ID NO:13
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列
。16.
根据权利要求1至
15
中任一项所述的重组载体，其中所述
IL
‑
15
或其功能片段或功能变体包含与
SEQ ID NO:76
的氨基酸序列至少
90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的氨基酸序列
。17.
根据权利要求1至
15
中任一项所述的重组载体，其中所述
IL
‑
15
或其功能片段或功能变体由与
SEQ ID NO:77
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列编码
。18.
根据权利要求1至
15
中任一项所述的重组载体，其中所述
IL
‑
15R
α
或其功能片段或功能变体包含与
SEQ ID NO:78
的氨基酸序列至少
90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的氨基酸序列
。19.
根据权利要求1至
15
中任一项所述的重组载体，其中所述
IL
‑
15R
α
或其功能片段或功能变体由与
SEQ ID NO:79
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列编码
。20.
根据权利要求1至
19
中任一项所述的重组载体，其中所述
IL
‑
15
或其功能片段或功能变体经由肽接头可操作地连接至所述
IL
‑
15R
α
或其功能片段或功能变体
。21.
根据权利要求
20
所述的重组载体，其中所述肽接头包含：
SEQ ID NO:81
的氨基酸序列或者含有
1、2
或3个氨基酸修饰的
SEQ ID NO:81
的氨基酸序列
。22.
根据权利要求
20
所述的重组载体，其中所述肽接头由与
SEQ ID NO:82
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列编码
。23.
根据权利要求1至
22
中任一项所述的重组载体，其中所述融合蛋白是膜结合的
。24.
根据权利要求1至
23
中任一项所述的重组载体，其中所述融合蛋白包含与
SEQ ID NO:70
或
73
的氨基酸序列至少
90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的氨基酸序列
。25.
根据权利要求1至
22
中任一项所述的重组载体，其中所述融合蛋白由与
SEQ ID NO:71
或
74
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列编码
。26.
根据权利要求1至
24
中任一项所述的重组载体，其中所述
C
α
区包含与
SEQ ID NO:40
‑
49
的氨基酸序列至少
90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的氨基酸序列
。27.
根据权利要求1至
24
中任一项所述的重组载体，其中所述
C
α
区由与
SEQ ID NO:55、57
或
58
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列编码
。28.
根据权利要求1至
26
中任一项所述的重组载体，其中所述
C
β
区包含与
SEQ ID NO:50
‑
54
或
60
的氨基酸序列至少
90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的氨基酸序列
。29.
根据权利要求1至
26
中任一项所述的重组载体，其中所述
C
β
区由与
SEQ ID NO:56
或
59
的多核苷酸序列至少
75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％或
100
％相同的多核苷酸序列编码
。30.
根据权利要求1至
29
中任一项所述的重组载体，其中所述多顺反子多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第三多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列
。31.
根据权利要求
30
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:160
的氨基酸序列的第一组合多核苷酸序列；所述第三多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:168
的氨基酸序列的第二组合多核苷酸序列；或者所述第三多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:161
的氨基酸序列的第三组合多核苷酸序列
。32.
根据权利要求
31
所述的重组载体，其中所述第一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:230
的多核苷酸序列；所述第二组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:231
的多核苷酸序列；或者所述第三组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:232
的多核苷酸序列
。33.
根据权利要求
30
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:160
的氨基酸序列的第一组合多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:161
的氨基酸序列的第三组合多核苷酸序列
。34.
根据权利要求
30
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:180
或
210
的氨基酸序列的第一组合多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:181
的氨基酸序列的第三组合多核苷酸序列
。35.
根据权利要求
33
所述的重组载体，其中所述第一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:230
的多核苷酸序列；并且所述第三组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:232
的多核苷酸序列
。36.
根据权利要求
35
所述的重组载体，其中所述第一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:250
或
270
的多核苷酸序列；并且所述第三组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:252
的多核苷酸序列
。37.
根据权利要求1至
29
中任一项所述的重组载体，其中所述多顺反子多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第三多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列
。38.
根据权利要求
37
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:162
的氨基酸序列的第四组合多核苷酸序列；所述第三多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:166
的氨基酸序列的第五组合多核苷酸序列；或者所述第三多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:163
的氨基酸序列的第六组合多核苷酸序列
。39.
根据权利要求
38
所述的重组载体，其中所述第四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:233
的多核苷酸序列；所述第五组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:234
的多核苷酸序列；或者所述第六组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:235
的多核苷酸序列
。40.
根据权利要求
37
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第四多核苷
酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:162
的氨基酸序列的第四组合多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:163
的氨基酸序列的第六组合多核苷酸序列
。41.
根据权利要求
37
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:182
或
212
的氨基酸序列的第四组合多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:183
的氨基酸序列的第六组合多核苷酸序列
。42.
根据权利要求
40
所述的重组载体，其中所述第四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:233
的多核苷酸序列；并且所述第六组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:235
的多核苷酸序列
。43.
根据权利要求
41
所述的重组载体，其中所述第四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:253
或
273
的多核苷酸序列；并且所述第六组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:255
的多核苷酸序列
。44.
根据权利要求1至
29
中任一项所述的重组载体，其中所述多顺反子多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第三多核苷酸序列
。45.
根据权利要求
44
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:160
的氨基酸序列的第一组合多核苷酸序列；所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:169
的氨基酸序列的第七组合多核苷酸序列；所述第五多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:173
的氨基酸序列的第八组合多核苷酸序列；或者所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:164
的氨基酸序列的第九组合多核苷酸序列
。46.
根据权利要求
45
所述的重组载体，其中所述第一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:230
的多核苷酸序列；所述第七组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:236
的多核苷酸序列；所述第八组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:237
的多核苷酸序列；或者所述第九组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:238
的多核苷酸序列
。47.
根据权利要求
44
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:164
的氨基酸序列的第九组合多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列编码
SEQ ID NO:50
的氨基酸序列
。48.
根据权利要求
44
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:184
或
214
的氨基酸序列的第九组合多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列编码
SEQ ID NO:51
的氨基酸序列
。49.
根据权利要求
47
所述的重组载体，其中所述第九组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:238
的多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:59
的多核苷酸序列
。50.
根据权利要求
48
所述的重组载体，其中所述第九组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:258
或
278
的多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:56
的多核苷酸
序列
。51.
根据权利要求1至
29
中任一项所述的重组载体，其中所述多顺反子多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第三多核苷酸序列
。52.
根据权利要求
51
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:162
的氨基酸序列的第四组合多核苷酸序列；所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:167
的氨基酸序列的第十组合多核苷酸序列；所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:172
的氨基酸序列的第十一组合多核苷酸序列；或者所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:165
的氨基酸序列的第十二组合多核苷酸序列
。53.
根据权利要求
52
所述的重组载体，其中所述第四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:233
的多核苷酸序列；所述第十组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:239
的多核苷酸序列；所述第十一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:240
的多核苷酸序列；或者所述第十二组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:241
的多核苷酸序列
。54.
根据权利要求
51
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:165
的氨基酸序列的第十二组合多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列编码
SEQ ID NO:50
的氨基酸序列
。55.
根据权利要求
51
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:185
或
215
的氨基酸序列的第十二组合多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列编码
SEQ ID NO:51
的氨基酸序列
。56.
根据权利要求
54
所述的重组载体，其中所述第十二组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:241
的多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:59
的多核苷酸序列
。57.
根据权利要求
55
所述的重组载体，其中所述第十二组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:261
或
281
的多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:56
的多核苷酸序列
。58.
根据权利要求1至
29
中任一项所述的重组载体，其中所述多顺反子多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：所述第三多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列
。59.
根据权利要求
58
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:162
的氨基酸序列的第四组合多核苷酸序列；所述第三多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:166
的氨基酸序列的第五组合多核苷酸序列；或者所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:167
的氨基酸序列的第十组合多核苷酸序列
。60.
根据权利要求
59
所述的重组载体，其中所述第四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:233
的多核苷酸序列；所述第五组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:234
的多核苷酸序列；或者所述第十组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:239
的多核苷酸序列
。
61.
根据权利要求
58
所述的重组载体，其中所述第三多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:166
的氨基酸序列的第五组合多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:167
的氨基酸序列的第十组合多核苷酸序列
。62.
根据权利要求
58
所述的重组载体，其中所述第三多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:186
的氨基酸序列的第五组合多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:187
或
217
的氨基酸序列的第十组合多核苷酸序列
。63.
根据权利要求
61
所述的重组载体，其中所述第五组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:234
的多核苷酸序列；并且所述第十组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:239
的多核苷酸序列
。64.
根据权利要求
62
所述的重组载体，其中所述第五组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:254
的多核苷酸序列；并且所述第十组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:259
或
279
的多核苷酸序列
。65.
根据权利要求1至
29
中任一项所述的重组载体，其中所述多顺反子多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：所述第三多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列
。66.
根据权利要求
65
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:160
的氨基酸序列的第一组合多核苷酸序列；所述第三多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:168
的氨基酸序列的第二组合多核苷酸序列；或者所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:169
的氨基酸序列的第七组合多核苷酸序列
。67.
根据权利要求
66
所述的重组载体，其中所述第一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:230
的多核苷酸序列；所述第二组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:231
的多核苷酸序列；或者所述第七组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:236
的多核苷酸序列
。68.
根据权利要求
65
所述的重组载体，其中所述第三多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:168
的氨基酸序列的第二组合多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:169
的氨基酸序列的第七组合多核苷酸序列
。69.
根据权利要求
65
所述的重组载体，其中所述第三多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:188
的氨基酸序列的第二组合多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:189
或
219
的氨基酸序列的第七组合多核苷酸序列
。70.
根据权利要求
68
所述的重组载体，其中所述第二组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:231
的多核苷酸序列；并且所述第七组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:236
的多核苷酸序列
。71.
根据权利要求
69
所述的重组载体，其中所述第二组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:251
的多核苷酸序列；并且所述第七组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:256
或
276
的多核苷酸序列
。
72.
根据权利要求1至
29
中任一项所述的重组载体，其中所述多顺反子多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：所述第三多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第一多核苷酸序列
。73.
根据权利要求
72
所述的重组载体，其中所述第三多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:166
的氨基酸序列的第五组合多核苷酸序列；所述第三多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:163
的氨基酸序列的第六组合多核苷酸序列；所述第五多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:173
的氨基酸序列的第八组合多核苷酸序列；或者所述第三多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:170
的氨基酸序列的第十三组合多核苷酸序列
。74.
根据权利要求
73
所述的重组载体，其中所述第五组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:234
的多核苷酸序列；所述第六组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:235
的多核苷酸序列；所述第八组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:237
的多核苷酸序列；或者所述第十三组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:242
的多核苷酸序列
。75.
根据权利要求
72
所述的重组载体，其中所述第三多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:170
的氨基酸序列的第十三组合多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列编码
SEQ ID NO:40
的氨基酸序列
。76.
根据权利要求
72
所述的重组载体，其中所述第三多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:190
的氨基酸序列的第十三组合多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列编码
SEQ ID NO:41
或
42
的氨基酸序列
。77.
根据权利要求
75
所述的重组载体，其中所述第十三组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:242
的多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:57
的多核苷酸序列
。78.
根据权利要求
76
所述的重组载体，其中所述第十三组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:262
的多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:55
或
58
的多核苷酸序列
。79.
根据权利要求1至
29
中任一项所述的重组载体，其中所述多顺反子多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：所述第三多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第一多核苷酸序列
。80.
根据权利要求
79
所述的重组载体，其中所述第三多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:168
的氨基酸序列的第二组合多核苷酸序列；所述第三多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第五多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:161
的氨基酸序列的第三组合多核苷酸序列；所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:172
的氨基酸序列的第十一组合多核苷酸序列；或者所述第三多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:171
的氨基酸序列的第十四组合多核苷酸序列
。81.
根据权利要求
80
所述的重组载体，其中所述第二组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:231
的多核苷酸序列；所述第三组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:232
的多核苷酸序列；
所述第十一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:240
的多核苷酸序列；或者所述第十四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:243
的多核苷酸序列
。82.
根据权利要求
79
所述的重组载体，其中所述第三多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:171
的氨基酸序列的第十四组合多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列编码
SEQ ID NO:40
的氨基酸序列
。83.
根据权利要求
79
所述的重组载体，其中所述第三多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:191
的氨基酸序列的第十四组合多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列编码
SEQ ID NO:41
或
42
的氨基酸序列
。84.
根据权利要求
82
所述的重组载体，其中所述第十四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:243
的多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:57
的多核苷酸序列
。85.
根据权利要求
83
所述的重组载体，其中所述第十四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:263
的多核苷酸序列；并且所述第一多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:55
或
58
的多核苷酸序列
。86.
根据权利要求1至
29
中任一项所述的重组载体，其中所述多顺反子多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：所述第五多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列
、
所述第一多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列和所述第三多核苷酸序列
。87.
根据权利要求
86
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:162
的氨基酸序列的第四组合多核苷酸序列；或者所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:172
的氨基酸序列的第十一组合多核苷酸序列
。88.
根据权利要求
87
所述的重组载体，其中所述第四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:233
的多核苷酸序列；或者所述第十一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:240
的多核苷酸序列
。89.
根据权利要求
86
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:162
的氨基酸序列的第四组合多核苷酸序列；所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:172
的氨基酸序列的第十一组合多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列编码
SEQ ID NO:50
的氨基酸序列
。90.
根据权利要求
86
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:182
或
212
的氨基酸序列的第四组合多核苷酸序列；所述第五多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:172
的氨基酸序列的第十一组合多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列编码
SEQ ID NO:51
的氨基酸序列
。91.
根据权利要求
89
所述的重组载体，其中所述第四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:233
的多核苷酸序列；并且所述第十一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:240
的多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:59
的多核苷酸序列
。92.
根据权利要求
90
所述的重组载体，其中所述第四组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:253
或
273
的多核苷酸序列；所述第十一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:240
的多核苷酸序列；并且所述第三多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:56
的多核苷酸序列
。
93.
根据权利要求1至
29
中任一项所述的重组载体，其中所述多顺反子多核苷酸按从
5'
至
3'
的顺序包含：所述第五多核苷酸序列
、
所述第四多核苷酸序列
、
所述第一多核苷酸序列
、
所述第二多核苷酸序列和所述第三多核苷酸序列
。94.
根据权利要求
93
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:160
的氨基酸序列的第一组合多核苷酸序列；或者所述第五多核苷酸序列和所述第四多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:173
的氨基酸序列的第八组合多核苷酸序列
。95.
根据权利要求
94
所述的重组载体，其中所述第一组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:230
的多核苷酸序列；或者所述第八组合多核苷酸序列包含
SEQ ID NO:237
的多核苷酸序列
。96.
根据权利要求
93
所述的重组载体，其中所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列一起包含编码
SEQ ID NO:160
的氨基酸序列的第一组合多核苷酸序列；所述第五...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：阿劳诺斯治疗公司，
类型：发明
国别省市：