一种外泌体制备方法及其产品和应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，提供了一种外泌体的制备方法：将分泌外泌体的母细胞以

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体制备方法及其产品和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种提高外泌体产量和免疫调节功能的方法
。

技术介绍

[0002]免疫系统是机体执行免疫应答及免疫功能的重要系统，是防卫病原体入侵机体核心武器
。
但当免疫功能紊乱时，对自身的机体成分进行攻击，从而损伤正常组织器官及其功能，诱发多种自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮
、
类风湿性关节炎
、
硬皮病
、
糖尿病等，以上所述的免疫性疾病传统上都以免疫抑制性药物进行治疗，但免疫抑制药物有个共同的不良作用，即不同程度地影响机体免疫系统的抗感染
、
抗肿瘤功能，且某些耐药难治性免疫性疾病治疗效果欠佳
。
因此，急需开发新的有效的治疗手段
。
[0003]间充质干细胞（
MSCs
）是一群具有多向分化潜能的多能干细胞，几乎存在于所有组织中
。
除了分化功能外，
MSCs
还具有显著的免疫调节功能
、
低免疫源性
、
易于在体外分离培养和迅速扩增的特性，这使得
MSCs
在免疫性和炎症性相关疾病的细胞治疗方面备受关注
。
然而
MSCs
的临床应用仍面临着许多挑战，包括体外培养
MSCs
的不均一性
、
细胞注射导致的血管阻塞
、
细胞移植后在体内存活有限<br/>、
衰老引起的遗传不稳定性或功能丧失等，更为严重的是
MSCs
用于临床还存在恶性转变及致瘤的可能性
。
[0004]值得关注的是，
MSCs
在静息或活化状态下能分泌大量的外泌体（
exosome
），这些外泌体携带了
MSCs
的重要信号分子，如蛋白质
、mRNAs、miRNAs
和
ncRNAs
等，参与细胞间的通讯并调控细胞功能
。
许多研究证实
MSCs
来源的外泌体保持着与其母细胞相似的生物学功能，而外泌体的的直径足够小（
30
‑
150nm
），不仅可以快速通过毛细血管到达病损部位，还可以透过血脑屏障等其他屏障，其作用范围将比
MSCs
更加广泛，且外泌体具有便于储存和运输的优势，同时也避免了直接注射
MSCs
的不利生物学效应，减少了临床风险
。
目前
MSCs
在常规培养条件下分泌外泌体的能力有限，且其免疫调节功能相对较弱，对自身免疫性疾病的针对性较差
。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的问题，本专利技术提供一种外泌体制备方法，能够提高外泌体产量和免疫调节功能
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案
。
[0007]一种外泌体的制备方法，包括以下步骤：
S1、
将分泌外泌体的母细胞以红光到近红外光辐照后培养；
S2、
由步骤
S1
中的培养液分离纯化获得外泌体
。
[0008]所述红光到近红外光的波长范围为
620nm
‑
1000nm
左右，在上述波长范围内，波长的增加有利于外泌体产量的增加和炎症抑制效果的增强，但是到
800nm
以上，尤其是
850nm
以上时，如
940nm、1050nm
时外泌体产量的增加不再明显
。
上述波长范围可以是由激光提供
的单波长的光束，如
633nm、635nm、638nm、650nm、660nm、680nm、690nm、730nm、750nm、760nm、785nm、793nm、808nm、830nm、842nm、850nm、880nm、915nm、940nm、980nm、1050nm、1064nm
；也可以是某一波段范围的红光或红外光，如
610nm
‑
720nm
或
630nm
‑
660nm
的红光；波长更加集中的光较分散的光获得的外泌体在粒径上更加集中，这在外泌体制剂化时可以加以利用，以获得更好的商业化品质
。
[0009]光辐照度为
10
‑
90mW/cm2，单位面积能量为1‑
4J/cm2；在该条件下，外泌体分泌量显著增高，且对细胞无伤害；优选地，光辐照度为
10
‑
20mW/cm2，单位面积能量为2‑
4J/cm2。
[0010]所述辐照为间歇式辐照，辐照的频率为
20Hz
‑
50Hz
，低的频率可以有效抑制局部升温，但是高频率对于外泌体的产量增加具有更好的效果，优选的频率为
30Hz
‑
40Hz。
[0011]所述母细胞为间充质干细胞，其来源并不限制，可以是骨髓来源
、
脂肪来源
、
脐血来源
、
脐带来源
、
外周血来源
。
所述间充质干细胞可以是直接分离获得的，也可以是由直接分离的间充质干细胞传代1‑
10
次获得的
。
[0012]所述培养的条件为黑暗条件，其培养的培养基或温度
、CO2浓度可根据细胞生长状态根据现有技术中的方法进行调节
。
[0013]分离纯化获得外泌体的方法可以选择本领域通常使用的方法，如超滤膜超滤
、
切向流过滤
、
差速离心
、
密度梯度离心
、
尺寸排阻层析
、
沉淀或免疫亲和捕获，也可以采用其中的一种或一种以上的结合
。
具体的方法可以根据样品量的多少和需要获得的外泌体浓度或纯度进行选择
。
[0014]优选地，分离纯化获得外泌体的方法，包括以下步骤：（1）步骤
S1
中的培养液去除细胞碎片获得上清液，然后超滤获得浓缩液；（2）浓缩液依次经
3000g、10000g
离心获得上清液，然后
150000g
离心上清液获得沉淀，即为外泌体
。
[0015]一种上述方法获得的外泌体
。
[0016]上述外泌体可用于制备治疗或减轻炎症或免疫调节失衡疾病的药物
。
如，红斑狼疮
、
类风湿性关节炎
、
哮喘
、2
型糖尿病
、
硬皮病
、
脓毒症
、
移植物抗宿主病
、...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、
将分泌外泌体的母细胞以红光到近红外光辐照后培养；
S2、
由步骤
S1
中的培养液分离纯化获得外泌体；所述红光到近红外光的波长为
630nm
‑
1000nm。2.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，波长为
800nm
‑
1000nm。3.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，波长为
633nm、635nm、638nm、650nm、660nm、680nm、690nm、730nm、750nm、760nm、785nm、793nm、808nm、830nm、842nm、850nm、880nm、915nm、940nm、980nm、1050nm、1064nm、610nm
‑
720nm
或
630nm
‑
660nm。4.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，光辐照度为
10
‑
90mW/cm2，单位面积能量为1‑
4J/cm2；所述辐照为间歇式辐照，辐照的频率为
20Hz
‑
50Hz。5.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，光辐照度为
10
‑
20mW/cm2，单位面积能量为2‑
4J/cm2；辐照的频率为
30Hz
‑
40Hz。6.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述母细胞为间充质干细胞
。7.
根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞的来源选自骨髓
、
脂肪
、
脐血
、
脐带
、
外周血；所述间充质干细胞为直接分离获得或由直接...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秋红，王欣，谭毅，赵小惠，梁晨，郭慧贞，
申请(专利权)人：银丰生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：