一种整合型制造技术

本发明专利技术公开了一种整合型

【技术实现步骤摘要】
一种整合型HIV
‑
1 DNA实时荧光定量检测引物探针组及应用


[0001]本专利技术涉及一种整合型
HIV
‑
1 DNA
实时荧光定量检测引物探针组及应用，属于生物医学检测

。

技术介绍

[0002]艾滋病，即获得性免疫缺陷综合征
(AIDS)
，其病原体为人类免疫缺陷病毒
(Human immunodeficiencyvirus
，
HIV)。HIV
属于反转录病毒科慢病毒属中的人类慢病毒组，为直径
100
～
120nm
的球形颗粒
。HIV
基因组全长约
9.7kb
，分为
HIV
‑1型和
HIV
‑2型，我国以
HIV
‑1为主要流行株
。HIV
进入细胞核内，在整合酶的作用下整合到宿主细胞的染色体
DNA
中
。
这种整合到宿主
DNA
中的病毒
DNA
即被称为“前病毒”。
携带
HIV
前病毒的非
ART
靶向静息记忆
CD4+T
细胞不被免疫系统识别，并在体内持续存在，这是根除
HIV
的主要障碍
。
未整合的
DNA
仅在低水平转录，对生产性
HIV
感染的贡献很小
。
因此，整合的
HIV DNA
的准确定量对于评估旨在功能性治愈的治疗策略至关重要
。
[0003]巢式
PCR
是一种变异的聚合酶链反应
(PCR)
，使用两对
PCR
引物扩增完整的片段
。
第一对
PCR
引物扩增片段和普通
PCR
相似
。
第二对引物称为巢式引物
(
因为他们在第一次
PCR
扩增片段的内部
)
结合在第一次
PCR
产物内部，使得第二次
PCR
扩增片段短于第一次扩增
。Alu
‑
PCR
技术是
1989
年由
Nelson
等人首先提出的，它利用人类
DNA
中普遍存在的
Alu
重复序列作为引物，此技术较一般
PCR
反应的区别就在于它引物设计利用了人类的
Alu
家族
。Green
是一种插入
DNA
分子的染料，具有多种分子生物学应用，其中之一就是用于实时定量
PCR(qPCR)。
随着
PCR
循环的连续进行，这种染料的荧光强度会不断增强，从而可以使人们对反应中的
DNA
进行定量
。SYBR Green
法及一些其他基于染料的
qPCR
方法比探针法的成本低，使用也更为方便
。
不过这些方法也存在着与生俱来的弊端，
SYBR Green
方法产生的非特异性产物较多，会导致高背景和假阳性；使用较为广泛的
TaqMan
探针法，较
SYBR
法相比对目标序列具有更高的特异性
。PCR
技术的专利技术与改进极大地促进了分子诊断技术的发展，对于大多数常见疾病均有采用
PCR
技术进行检测的报导
。
因此，针对整合型
HIV DNA
的
PCR
检测技术不仅能够为
HIV
感染的临床诊断提供辅助作用，也能够在
HIV
功能性治愈的临床诊疗方案提供一定的指导依据
。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是：如何准确定量检测整合的
HIV DNA
的技术问题
。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术采取了以下技术方案：
[0006]本专利技术的第一方面，提供一种整合型
HIV
‑
1 DNA
实时荧光定量检测引物探针组，所述引物探针组
(
是根据
Alu
元件及
HIV
‑
1HXB2
株基因组序列设计的
)
包括：
[0007]β
‑
actin qPCR
引物探针组：引物序列如
SEQ ID NO
：1～2所示，探针序列如
SEQ ID NO
：3所示；
[0008]Alu
‑
gag PCR
引物组：序列如
SEQ ID NO
：4～5所示；
[0009]LTR qPCR
引物探针组：引物序列如
SEQ ID NO
：6～7所示，探针序列如
SEQ ID NO
：8所示；
[0010]其中，所述探针为
TaqMan
荧光探针，其5’
末端携带有荧光基团，3’
端携带有淬灭基团
。
[0011]本专利技术的第二方面，提供上述技术方案中的引物探针组在制备定量检测整合型
HIV
‑
1 DNA
的试剂盒中的应用
。
[0012]本专利技术的第三方面，提供一种定量检测整合型
HIV
‑
1 DNA
的试剂盒，所述试剂盒中包括上述技术方案中的引物探针组
。
[0013]本专利技术的第四方面，提供一种整合型
HIV
‑
1 DNA
实时荧光定量检测方法，该方法应用上述技术方案中的引物探针组或上述技术方案中的试剂盒进行检测，包括以下步骤：
[0014]步骤1：提取来源于待测
HIV
感染者样本中的病毒核酸；
[0015]步骤2：通过
β
‑
actin PCR
反应进行细胞数量测定；
[0016]步骤3：通过
Alu
‑
gag PCR
和
LTR
‑
qPCR
扩增反应，得到样本中整合型
HIV DNA Ct
值；
[0017]步骤4：将步骤3通过两步
PCR
反应得到的循环阈值
(Ct
值
)
代入标准曲线，从而计算得到样本中整合型
HIV
‑
1 DNA
拷贝数
。
[0018]优选地，所述标准曲线是采用已知拷贝数的<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种整合型
HIV
‑
1DNA
实时荧光定量检测引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括：
β
‑
actin qPCR
引物探针组：引物序列如
SEQ ID NO
：1～2所示，探针序列如
SEQ ID NO
：3所示；
Alu
‑
gag PCR
引物组：序列如
SEQ ID NO
：4～5所示；和
LTR qPCR
引物探针组：引物序列如
SEQ ID NO
：6～7所示，探针序列如
SEQ ID NO
：8所示；其中，所述探针为
TaqMan
荧光探针，其5’
末端携带有荧光基团，3’
端携带有淬灭基团
。2.
权利要求1所述的引物探针组在制备定量检测整合型
HIV
‑
1DNA
的试剂盒中的应用
。3.
一种定量检测整合型
HIV
‑
1DNA
的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括权利要求1所述的引物探针组
。4.
一种整合型
HIV
‑
1DNA
实时荧光定量检测方法，其特征在于，该方法应用权利要求1所述的引物探针组或权利要求3所述的试剂盒进行检测，包括以下步骤：步骤1：提取来源于待测
HIV
感染者样本中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张欣宇，陈军，沈银忠，
申请(专利权)人：上海市公共卫生临床中心，
类型：发明
国别省市：