一种己糖激酶法血清葡萄糖检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种己糖激酶法血清葡萄糖检测试剂盒及其制备方法，涉及生物检测技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种己糖激酶法血清葡萄糖检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，特别是涉及一种己糖激酶法血清葡萄糖检测试剂盒及其制备方法
。

技术介绍

[0002]目前，国内外检测葡萄糖最常用的方法是酶法，以酶为试剂可以提高特异性，临床实验室常使用葡萄糖氧化酶
(GOD)
法和己糖激酶
(HK)
法测定葡萄糖
。
葡萄糖氧化酶法易受维生素
C、
尿酸
、
尿素
、
胆红素
、
肌酊的干扰，而以上各物质对己糖激酶法无干扰
。
己糖激酶法测定血液中的葡萄糖因其特异性强
、
精密度和准确度非常高是目前国际上公认测定葡萄糖的参考方法而被广大实验室釆用
。
[0003]己糖激酶方法：第一步是在己糖激酶催化下，葡萄糖和三磷酸腺苷
(ATP)
发生磷酸化反应，生成葡萄糖
‑6‑
磷酸；第二步是在葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶
(G
‑6‑
PD)
催化下，葡萄糖
‑6‑
磷酸和氧化型辅酶
I(NAD
+
)
或氧化型辅酶
II(NADP
+
)
发生氧化还原反应，生成6‑
磷酸葡萄糖酸和还原型辅酶
I(NADH)
或还原型辅酶
n(NADPH)。
在波长
>340nm
处，监测吸光度的增高
。
吸光度的净增高值与葡萄糖浓度成正比
。
己糖激酶方法对葡萄糖的特异性高，不受尿酸和抗坏血酸的干扰
。
[0004]目前各实验室使用的己糖激酶法试剂盒，虽由多家单位生产，但其中各种试剂盒的试剂基本相似，缓冲液
pH
都在
7.5
土
0.2
，可使
NADH
或
NADPH
活性最高；差异在于已糖激酶
、G
‑6‑
PD、ATP、NAD
+
或
NADP
+
加入浓度不同
。
[0005]试剂盒稳定性是保障其质量和检测结果准确性的指标，是试剂盒必备的基本属性，是检测试剂盒生产
、
运输
、
保存和使用等环节的重要参考
。
提高己糖激酶法试剂盒的稳定性，可以延长试剂盒的有效期，进而将给予生产企业合理高效安排生产
、
消化库存
、
组织销售等生产经营活动以更大的自主空间，并且可以解决终端应用受短效期的限制的问题
。
目前己糖激酶法试剂盒的有效期普遍在1年左右，如何进一步提升试剂盒的稳定性，以延长有效期，是本领域技术人员亟待解决的重要技术问题
。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种己糖激酶法血清葡萄糖检测试剂盒及其制备方法，以解决上述现有技术存在的问题，该检测试剂盒的稳定性高，效期能够达到2年
。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0008]本专利技术提供一种己糖激酶法血清葡萄糖检测试剂盒，包括第一试剂和第二试剂；
[0009]所述第一试剂包括
PBS
缓冲液
20
‑
200mmol/L、
三乙醇胺
30
‑
80mmol/L、MgCl20.2
‑
1g/L、
表面活性剂
0.2
‑
2g/L、
三磷酸腺苷
0.5
‑
4g/L、
己糖激酶
1.8
‑
8KU/L、
葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶
1.8
‑
8KU/L、
牛血清白蛋白
0.3
‑
3g/L、
草酸盐
0.5
‑
1.5g/L
和防腐剂
0.3
‑
2g/L
；
[0010]所述第二试剂包括羟乙基哌嗪乙硫磺酸
30
‑
100mmol/L、
乙二胺四乙酸
0.2
‑
2g/L、
氧化型辅酶5‑
10g/L、
牛血清白蛋白
0.3
‑
2g/L
和防腐剂
0.3
‑
3g/L。
[0011]优选地，所述第一试剂包括
PBS
缓冲液
50mmol/L、
三乙醇胺
30mmol/L、MgCl20.3 g/L、
表面活性剂
1.5g/L、
三磷酸腺苷
0.5g/L、
己糖激酶
2KU/L、
葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶
2KU/L、
牛血清白蛋白
2g/L、
草酸盐
0.6g/L
和防腐剂
1g/L
；
[0012]所述第二试剂包括羟乙基哌嗪乙硫磺酸
50mmol/L、
乙二胺四乙酸
0.5g/L、
氧化型辅酶
8g/L、
牛血清白蛋白
2g/L
和防腐剂
1g/L。
[0013]进一步地，所述表面活性剂包括
tritonx
‑
100、PEG6000、CHAPS、THESIT、
吐温
20、PEG8000、Emulgen B
‑
66
和
EmulgenA90
中的至少一种
。
[0014]优选地，所述表面活性剂为
tritonx
‑
100。
[0015]进一步地，所述草酸盐为草酸钠和草酸钾中的至少一种
。
[0016]进一步地，所述氧化型辅酶为氧化型辅酶
I
或氧化型辅酶
II。
[0017]进一步地，所述防腐剂为
PC300、PC950、
叠氮化钠
、
硫柳汞和苯甲酸钠中的至少一种
。
[0018]本专利技术还提供一种上述的己糖激酶法血清葡萄糖检测试剂盒的制备方法，包括所述第一试剂和所述第二试剂的制备步骤；
[0019]所述第一试剂的制备步骤包括：
[0020]称取表面活性剂加入水中溶解，得到表面活性剂水溶液；
[0021]称取
PBS、
三乙醇胺
、MgCl2和草酸盐加入水中溶解，调节
pH
值至
7.6
±
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种己糖激酶法血清葡萄糖检测试剂盒，其特征在于，包括第一试剂和第二试剂；所述第一试剂包括
PBS
缓冲液
20
‑
200mmol/L、
三乙醇胺
30
‑
80mmol/L、MgCl20.2
‑
1g/L、
表面活性剂
0.2
‑
2g/L、
三磷酸腺苷
0.5
‑
4g/L、
己糖激酶
1.8
‑
8KU/L、
葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶
1.8
‑
8KU/L、
牛血清白蛋白
0.3
‑
3g/L、
草酸盐
0.5
‑
1.5g/L
和防腐剂
0.3
‑
2g/L
；所述第二试剂包括羟乙基哌嗪乙硫磺酸
30
‑
100mmol/L、
乙二胺四乙酸
0.2
‑
2g/L、
氧化型辅酶5‑
10g/L、
牛血清白蛋白
0.3
‑
2g/L
和防腐剂
0.3
‑
3g/L。2.
根据权利要求1所述的己糖激酶法血清葡萄糖检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂包括
PBS
缓冲液
50mmol/L、
三乙醇胺
30mmol/L、MgCl20.3 g/L、
表面活性剂
1.5g/L、
三磷酸腺苷
0.5g/L、
己糖激酶
2KU/L、
葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶
2KU/L、
牛血清白蛋白
2g/L、
草酸盐
0.6g/L
和防腐剂
1g/L
；所述第二试剂包括羟乙基哌嗪乙硫磺酸
50mmol/L、
乙二胺四乙酸
0.5g/L、
氧化型辅酶
8g/L、
牛...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹新鹏，张玉玺，左志平，李娟娟，葛旭升，李挥，史华，王嘉铭，
申请(专利权)人：河北盛华尔生物医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：