一种用于特异性富集抗氧化肽的制造技术

本发明专利技术肽筛选技术领域，公开了一种用于特异性富集抗氧化肽的

【技术实现步骤摘要】
一种用于特异性富集抗氧化肽的Cu
‑
MOF材料及其制备和应用方法


[0001]本专利技术肽筛选
，尤其涉及一种用于特异性富集抗氧化肽的
Cu
‑
MOF
材料及其制备和应用方法
。

技术介绍

[0002]自由基是机体氧化反应中产生的有害化合物，具有强氧化性，对机体的细胞和组织可造成损害
。
从膳食中摄入富含抗氧化剂的食物是促使机体保持适当抗氧化状态的有效途径，其中食源性抗氧化肽具有安全性高
、
抗氧化活性强和易被吸收等优点，但食物中肽含量复杂，分离纯化步骤多，耗时长，并且难于选择性地分离出目标活性肽，研究一种高效的食源性抗氧化肽的筛选新方法以成为当务之急
。
[0003]中国专利
202010370897.2
一种金瓜籽抗氧化肽的制备及分离纯化鉴定方法，将金瓜籽多次酶解再离心冻干得到金瓜籽抗氧化肽的混合物，再超滤收集不同分子量的组分，选择抗氧化能力最强组分溶于水中，经凝胶色谱进一步分离，以羟自由基清除率为指标，将金瓜籽抗氧化肽中功能肽段进行逐级纯化富集，再将所得组分进行结构鉴定
。
该方法是为了得到抗氧化性功能最强的抗氧化肽，纯化过程容易造成抗氧化肽丢失，原料浪费的情况，并且过程繁琐，抗氧化肽针对性不强，抗氧化肽的纯度无法保证
。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中食源性抗氧化肽纯化率不够高且原料易浪费的情况，本专利技术一种用于特异性富集抗氧化肽的
Cu
‑
MOF
材料，对食源性肽中的抗氧化肽的特异选择性，减少抗氧化肽的丢失得到纯度高的抗氧化肽的功能；本专利技术还提供一种用于特异性富集抗氧化肽的
Cu
‑
MOF
材料的制备方法，制备出来的
Cu
‑
MOF
材料对食源性肽中的抗氧化肽的特异选择性，减少抗氧化肽的丢失并得到纯度高的抗氧化肽的功能；本专利技术还提供一种用于特异性富集抗氧化肽的
Cu
‑
MOF
材料的应用方法，用来特异性富集抗氧化肽具有减少抗氧化肽丢失和纯化抗氧化肽精度高的功能
。
[0005]本专利技术以以下技术方案实现：
[0006]一种用于特异性富集抗氧化肽的
Cu
‑
MOF
材料，所述
Cu
‑
MOF
为以
Cu
元素为金属原子的有机金属框架材料，并且比表面积为
1300
～
1500m2/g
，孔径为孔体积为
0.6
～
0.8cm3/g
，所述
Cu
‑
MOF
的
Cu
金属原子与抗氧化肽间通过螯合作用相互特异选择性吸附
。
[0007]Cu
‑
MOF
以巨大的比表面积和微孔体积显著提升螯合作用的接触面积，特异选择性的将抗氧化肽从天然产物提取的混合肽中吸附下来，极大地提高了抗氧化肽的纯化效率，使得后续的色谱筛选程序大大简化，在保持所得抗氧化肽的纯度和量的前提下，降低了工作人员的人工操作量
。
[0008]优选的，吸附了所述抗氧化肽的所述
Cu
‑
MOF
通过解吸剂解吸附所述抗氧化肽，所述解吸剂
ACN、H2O、0.1mol/L TFA
和
1mol/L NaCl
以比例为
3.5
～
4.5∶4∶1∶1
体积混合均匀的
溶液
。
[0009]解吸剂配方是根据
Cu
‑
MOF
吸附抗氧化剂的分子结构特点与相互作用亲和力的大小设计出来的，解吸高效精准，抗氧化剂无浪费
。
[0010]优选的，所述
Cu
‑
MOF
为两个金字塔形四面体底面两两相接而成的颗粒状有机金属框架结构
。
[0011]一种用于特异性富集抗氧化肽的
Cu
‑
MOF
材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0012]1)
取均苯三甲酸和可溶性铜盐溶解在乙醇水溶液中，室温混合搅拌均匀，加热反应得反应液；
[0013]2)
将步骤
1)
所得反应液离心去上清液，往剩下沉淀中加乙醇，多次离心洗涤后，干燥过夜得到
Cu
‑
MOF。
[0014]优选的，步骤
1)
中所述均苯三甲酸
、
可溶性铜盐中的
Cu
元素
、
乙醇水溶液的混合比为
1mol∶1.8
～
2.2mol∶10
～
12L
，所述可溶性铜盐包括硝酸铜
、
硫酸铜
、
氯化铜
、
乙酸铜中的一种或多种及其水合物，所述乙醇水溶液中乙醇与水的体积比为
1∶0.8
～
1.2
；混合搅拌时间为
30min
，加热温度为
110
～
130℃
，时间为
12h。
[0015]优选的，步骤
2)
中离心速度为
7000
～
9000r/min
，时间为
5min
，离心洗涤2～4次，干燥过程为先室温空气中干燥过夜，再在真空
75
～
85℃
下干燥数小时
。
[0016]一种使用上述的
Cu
‑
MOF
材料或上述的制备方法制备的
Cu
‑
MOF
材料在特异选择性吸附抗氧化肽上的应用
。
[0017]根据上述一种用于富集抗氧化肽的
Cu
‑
MOF
材料或根据上述的制备方法制备的
Cu
‑
MOF
材料在特异选择性吸附抗氧化肽上的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0018](1)
将从天然产物中提取的混合肽配成溶液，经超滤分离出分子量不同的组分
PPH
，经检测比较得出自由基清除能力最高的组分
PPH
‑
I
，加入
Cu
‑
MOF
，
35
～
38℃
混合振荡，离心取沉淀；
[0019](2)
将步骤
(1)
制备的沉淀与解吸剂混合，振荡，再离心，取上清液，氮吹除去有机相，得到粗纯化的抗氧化肽
PPH
‑
I
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
∶1
，振荡温度为
35
～
38℃
，振荡时间为
40
～
80min
，离心速度为
5000r/min
，离心时间为
5min
；步骤
(2)
中振荡温度为
35
～
38℃
，振荡时间为
10
～
14h
，离心速度为
5000r/min
，离心时间为
5min。10.
根据权利要求8所述的
Cu
‑
MOF
材料在特异选择性吸附抗氧化肽上的应用方法，其特征在于，步骤
(3)
中凝胶过滤色谱纯化所述
PPH
‑
I
‑
Cu
过程如下：将色谱柱垂直固定在支架上，将
Sephadex G
‑
10
凝胶置于抽滤瓶中真空脱气，倒掉多余液体，使得
Sephadex G
‑
10
和水以
3∶1
的比例将其混匀，沿着柱内壁缓慢倾入色谱柱，拧紧上端接口；采用2～3个柱体积的洗脱剂平衡柱子，而后上样；将
PPH
‑
I
‑
Cu
过滤后上样，采用去离子水以
2mL/min
流速进行洗脱，检测波长为
220nm
；收集洗脱组分并冻干，即为
PPH
‑
I
‑
Cu
凝胶过滤色谱分离组分
PPH
‑
I
‑
Cu
‑
A
；步骤
(3)
所述反相高效色谱纯化
PPH
‑
I
‑
Cu
‑
A
的过程如下：色谱仪为
Water e2695
色谱仪，配有
2998
紫外检测器和
Empower
工作站，色谱柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：程云辉，高正杰，焦叶，崔波，陶海腾，陈茂龙，程静，许宙，
申请(专利权)人：长沙理工大学，
类型：发明
国别省市：