子宫内膜细胞制剂及其应用以及子宫内膜细胞的培养方法技术

本发明专利技术提供了子宫内膜细胞制剂及其应用以及子宫内膜细胞的培养方法

【技术实现步骤摘要】
子宫内膜细胞制剂及其应用以及子宫内膜细胞的培养方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及子宫内膜细胞制剂及其应用以及子宫内膜细胞的培养方法
。

技术介绍

[0002]人子宫组织存在子宫内膜上皮干细胞
(endometrial epithelial stem cells,eESCs)
和子宫内膜间充质干细胞
(endometrial mesenchymal stem cells,eMSCs)。
组织器官的损伤修复，成体干细胞的增殖分化起到非常关键的作用，子宫内膜的损伤修复同样需要上皮
‑
间质两种干细胞的参与，因此体外构建子宫内膜上皮干细胞和间质干细胞培养体系对研究子宫内膜的病理生理修复和治疗宫腔粘连
(intrauterine adhesion,IUA)
意义重大
。
[0003]子宫内膜间充质干细胞
eMSCs
已经被证明具有多谱系分化的能力，而子宫内膜上皮干细胞
eESCs
由于很难用传统的二维培养方法进行长时间的体外培养，因此其功能检测在体外研究中受到了限制
。
[0004]可见，成功实现
eESCs
的体外培养具有重要意义，不仅有助于进一步了解子宫内膜上皮细胞的起源和修复机制，更重要的是有助于拓展子宫内膜干细胞的细胞来源
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供子宫内膜细胞制剂及其应用以及子宫内膜细胞的培养方法，成功实现了对子宫内膜损伤具有修复促进作用的子宫内膜上皮前体样细胞的体外培养和分化培养，拓展子宫内膜干细胞的细胞来源
。
[0006]本专利技术的所述子宫内膜细胞制剂包括子宫内膜上皮前体样细胞，所述子宫内膜上皮前体样细胞阳性表达阶段特异性胚胎抗原，所述子宫内膜上皮前体样细胞由阳性表达上皮细胞相关标志物的原代子宫内膜细胞经体外培养得到，对子宫内膜损伤具有修复促进作用
。
[0007]优选的，所述子宫内膜细胞制剂还包括子宫内膜间质细胞
。
所述子宫内膜间质细胞和阳性表达阶段特异性胚胎抗原的所述子宫内膜上皮前体样细胞联用对子宫内膜损伤具有进一步的修复促进作用
。
[0008]优选的，所述阶段特异性胚胎抗原的表达率不低于
80
％
。
[0009]优选的，所述阶段特异性胚胎抗原为
SSEA
‑
1。
[0010]优选的，所述上皮细胞相关标志物表达率不低于
70
％
。
[0011]优选的，所述上皮细胞相关标志物为
EpCAM、E
‑
Cadherin、CD9、CK19、CD24
和
CD44
的任意一种
。
[0012]本专利技术所述子宫内膜细胞制剂在制备子宫内膜损伤修复药物方面的应用包括使用所述子宫内膜细胞制剂干预体内动物模型后获取离体样本，以考察所述子宫内膜细胞制剂对子宫内膜损伤的修复作用
。
[0013]本专利技术的子宫内膜细胞的培养方法包括：
[0014]获取阳性表达上皮细胞相关标志物的原代子宫内膜细胞；
[0015]使用内膜前体细胞培养基对所述阳性表达上皮细胞相关标志物的原代子宫内膜细胞进行体外培养，得到阳性表达阶段特异性胚胎抗原的子宫内膜上皮前体样细胞
。
[0016]优选的，所述子宫内膜细胞的培养方法还包括使用所述内膜前体细胞培养基对所述阳性表达阶段特异性胚胎抗原的子宫内膜上皮前体样细胞继续进行扩增培养
。
[0017]优选的，所述子宫内膜细胞的培养方法还包括使用诱导培养基对所述阳性表达阶段特异性胚胎抗原的子宫内膜上皮前体样细胞进行分化培养，得到阳性表达所述上皮细胞相关标志物和白细胞分化抗原的上皮样细胞
。
[0018]优选的，所述诱导培养基由基础培养基
、
雌激素
、
血清
、
人表皮细胞生长因子
、
转化生长因子
β1和重组人血小板源性生长因子组成
。
[0019]优选的，以占所述基础培养基的体积计，所述雌激素的含量为
0.5
×
10
‑7‑2×
10
‑6摩尔
/
升，所述人表皮细胞生长因子的含量为5‑
50
纳克
/
毫升，所述转化生长因子
β1的含量为5‑
15
纳克
/
毫升，所述重组人血小板源性生长因子的含量为5‑
50
纳克
/
毫升
。
[0020]优选的，所述内膜前体细胞培养基包括基础培养基
、
生长因子
、TGF
‑
β
信号通路抑制剂
、Wnt
信号通路激动剂
、ROCK
激酶抑制剂和血清类物质
。
[0021]优选的，所述内膜前体细胞培养基还包括
N
‑
乙酰
‑
L
‑
半胱氨酸和抗坏血酸的至少一种
。
[0022]优选的，以占所述基础培养基的体积计，所述生长因子的含量为5‑
50
纳克
/
毫升，所述
ROCK
激酶抑制剂的含量为
0.5
‑
50
微摩尔
/
升，所述
WNT
信号通路激动剂的含量为
0.5
‑
50
微摩尔
/
升，所述
TGF
‑
β
信号通路抑制剂的含量为
0.5
‑
50
微摩尔
/
升，所述血清类物质的含量不超过
20
％
。
附图说明
[0023]图1为本专利技术实施例1中对离心管待测细胞悬液验证磁珠分选效率的流式分析结果；
[0024]图2为本专利技术实施例1中对分选管待测细胞悬液验证磁珠分选效率的流式分析结果；
[0025]图3为本专利技术实施例2的
EpCAM
+
细胞
、P0
细胞
、P1
细胞和
P2
细胞经表面抗体流式检测后得到的
EpCAM
和
SSEA
‑1的表达情况对比图；
[0026]图4为本专利技术实施例2的使用
ECM
进行扩增培养第4天的
EpCAM
+
细胞光镜图；
[0027]图5为本专利技术实施例2的使用
TEM
‑1培养基培养第2天的
EpCAM
+
细胞光镜本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种子宫内膜细胞制剂，其特征在于，包括子宫内膜上皮前体样细胞，所述子宫内膜上皮前体样细胞阳性表达阶段特异性胚胎抗原，所述子宫内膜上皮前体样细胞由阳性表达上皮细胞相关标志物的原代子宫内膜细胞经体外培养得到
。2.
根据权利要求1所述的子宫内膜细胞制剂，其特征在于，还包括子宫内膜间质细胞
。3.
根据权利要求1所述的子宫内膜细胞制剂，其特征在于，所述阶段特异性胚胎抗原的表达率不低于
80
％
。4.
根据权利要求1所述的子宫内膜细胞制剂，其特征在于，所述阶段特异性胚胎抗原为
SSEA
‑
1。5.
根据权利要求1所述的子宫内膜细胞制剂，其特征在于，所述上皮细胞相关标志物表达率不低于
70
％
。6.
根据权利要求1所述的子宫内膜细胞制剂，其特征在于，所述上皮细胞相关标志物为
EpCAM、E
‑
Cadherin、CD9、CK19、CD24
和
CD44
的任意一种
。7.
如权利要求1所述的子宫内膜细胞制剂在制备子宫内膜损伤修复药物方面的应用，其特征在于，包括使用所述子宫内膜细胞制剂干预体内动物模型后获取离体样本，以考察所述子宫内膜细胞制剂对子宫内膜损伤的修复作用
。8.
一种子宫内膜细胞的培养方法，其特征在于，包括：获取阳性表达上皮细胞相关标志物的原代子宫内膜细胞；使用内膜前体细胞培养基对所述阳性表达上皮细胞相关标志物的原代子宫内膜细胞进行体外培养，得到阳性表达阶段特异性胚胎抗原的子宫内膜上皮前体样细胞
。9.
根据权利要求8所述的子宫内膜细胞的培养方法，其特征在于，还包括使用所述内膜前体细胞培养基对所述阳性表达阶段特异性胚胎抗原的子宫内膜上皮前体样细胞继续进行扩增培养
。10.
根据权利要求8所述的子宫内膜细胞的培养方法，其特征在于，还包括使用诱导培养基对所述阳性表达阶段特异性胚胎抗原的子宫内膜上皮前体样细胞进行分化培养，得到阳性表达所述上皮细胞相关标志物和白细胞分化抗原的上皮样细胞
。11.
根据权利要求
10
所述的子宫内膜细胞的培养方法，其特征在于，所述诱导培养基由基础培养基
、
雌激素
、
血清
、
人表皮细胞生长因子

【专利技术属性】
技术研发人员：张洪丹，黄仁杰，
申请(专利权)人：上海赛立维生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：