含有制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种含有

【技术实现步骤摘要】
含有NLRP7突变的家族性复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系及构建方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种含有
NLRP7
突变的家族性复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系及构建方法
。

技术介绍

[0002]葡萄胎
(hydatidiform mole, HM)
是妊娠滋养细胞疾病的一种，其特征是滋养层过度增殖和胚胎发育异常，可以是零星或反复发生，以散发为主
。
根据其组织病理特征，
HM
可分为完全性葡萄胎
(complete HM, CHM)
和部分性葡萄胎
(partial HM, PHM)。
有
1%
～
6%
存在既往
HM
病史的患者会复发，当同一患者发生2次以上的葡萄胎妊娠时，称为复发性葡萄胎，一个家系中有
≥2
名妇女出现复发性葡萄胎时，称为家族性复发性葡萄胎
。
[0003]NLRP
炎性小体是一个多蛋白复合物，含有3个结构域：核苷酸结合寡聚结构域
、
富亮氨酸重复序列和
pyrin
结构域
。
它的激活与小胶质细胞介导的神经炎症和部分神经元变性有关
。
研究表明，
NLRP7
基因不同类型的突变均会导致
HM
的发生，其表型为绒毛滋养细胞增生
、
间质增多，几乎无胎儿组织或发育异常，通常形成大小不等的水泡，状如葡萄
。NLRP7
又名
NALP7、NOD12、PYPAF3、CLR19.4、PAN7
和
HYDM
，是目前已发现的
14
个
NLRPs
亚家族成员之一，是
CATERPILLER
蛋白家族成员，含1个
Nacht
结构域和1个
Nacht
相关结构域，是家族性复发性葡萄胎主要致病基因，
48%
～
80%
的家族性复发性葡萄胎与其突变有关
。
其相关通路包括
Toll
样受体信号通路和核苷酸结合寡聚化结构域
(NOD)
通路
。NLRP7
在生殖系统
、
妊娠发育以及胎盘形成等过程中都有非常重要的作用，因此
NLRP7
可能是复发性葡萄胎的潜在相关基因
。
[0004]随着体细胞重编程技术的不断进步，获取患者外周血构建特异性诱导多能干细胞系成为现实，研究表明，
iPSC
具有向机体几乎所有细胞分化的能力，且诱导得到的
iPSC
还具有患者特异性，可构建多种体外细胞模型进行疾病机制的研究以及药物筛查
。
采用患者外周血中的单个核细胞进行重编程，既避免了以往取成纤维细胞重编程的有创性，又降低了尿液重编程的污染风险
。
[0005]因此，构建含有
NLRP7
复合杂合突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系，可以为
NLRP7
突变相关疾病的发病机制及治疗研究提供新的生物材料及疾病模拟模型
。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种含有
NLRP7(
基因参考
NM_206828.3)
复合杂合突变或纯合突变的家族性复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系，该突变为复合杂合突变或纯合突变，以弥补现有的技术缺陷，本专利技术构建含有
NLRP7
复合杂合突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系，可以为
NLPR7
基因突变相关疾病的发病机制和治疗研究提供新型生物材料
。
[0007]本专利技术还提供了一种含有
NLRP7
复合杂合突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多
能干细胞系的构建方法
。
[0008]本专利技术为了实现上述目的所采用的技术方案为：本专利技术提供了一种含有
NLRP7
突变的家族性复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系，所述突变包括
NLRP7
复合杂合突变或
NLRP7
纯合突变；所述
NLRP7
复合杂合突变为
c.2161C>T, c.2471+1G>A
或
c.2161C>T,c1717_1718del
；所述
NLRP7
纯合突变为
c.1164_1184del。
[0009]本专利技术还提供了上述含有
NLRP7
突变的家族性复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系的构建方法，包括以下步骤：（1）以肝素抗凝采血管收集
NLRP7
基因突变患者的外周血，其
NLRP7
基因
c.2161C>T, c.2471+1G>A
或
c.2161C>T,c1717_1718del
或
c.1164_1184del
；
(2)
从外周血中分离单个核细胞并培养；
(3)
采用质粒转染方法将步骤
(2)
得到的单个核细胞重编程为诱导干细胞，获得含有
NLRP7
突变的家族性复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞
。
[0010]进一步的，步骤（2）中，具体的过程为：收集外周血后使用人外周血淋巴细胞分离液，去除血浆和红细胞，获得外周血单个核细胞；使用
PBS
洗涤，重悬于造血干细胞培养基中悬浮培养6‑8天
。
[0011]进一步的，步骤（2）中，所述造血干细胞培养基由
500 mLStemPro
™‑
34 无血清培养基加入
13 mLStemPro
™‑
34 营养素补充剂组成
。
[0012]进一步的，步骤（3）中，所述质粒转染方法具体为：在步骤
(2)
扩增的造血干细胞中通过电转入
m p53 DD
，
hOCT4
，
hSK
，
hUL
，
EBNA1
五个因子，将细胞转移至由
Matrigel
包被的培养板上，第一周
TeSR
‑
E7
培养基隔天增加
1ml
，第七天去除所有培养基，后续
TeSR
‑
E7
培养基每天换液，维持培养至
27
‑
29
天出现
iPSC
样细胞，挑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种含有
NLRP7
突变的家族性复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系，其特征在于，所述突变包括
NLRP7
复合杂合突变或
NLRP7
纯合突变；所述
NLRP7
复合杂合突变为
c.2161C>T, c.2471+1G>A
或
c.2161C>T,c1717_1718del
；所述
NLRP7
纯合突变为
c.1164_1184del。2.
一种如权利要求1所述的含有
NLRP7
突变的家族性复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）以肝素抗凝采血管收集
NLRP7
基因突变患者的外周血，其
NLRP7
基因
1261
位的碱基由
C
突变为
T
，
2471+1
位的碱基由
G
突变为
A
；
(2)
从外周血中分离单个核细胞并培养；
(3)
采用质粒转染方法将步骤
(2)
得到的单个核细胞重编程为诱导干细胞，获得含有
NLRP7
突变的家族性复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞
。3.
根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤（2）中，具体的过程为：收集外周血后使用人外周血淋巴细胞分离液，去除血浆和红细胞，获得外周血单个核细胞；使用
PBS
洗涤，重悬于造血干细胞培养基中悬浮培养6‑8天
。4.
根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵涵，赵如凇，孙健，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：