广谱中和新冠病毒的纳米抗体制造技术

本发明专利技术公开了一种广谱中和新冠病毒的纳米抗体

【技术实现步骤摘要】
广谱中和新冠病毒的纳米抗体、含其的融合蛋白及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种广谱中和新冠病毒的纳米抗体
、
含其的融合蛋白及其应用
。

技术介绍

[0002]冠状病毒
(Coronaviruses)
属于套式病毒目
(Nidovirales)
冠状病毒科
(Coronaviridae) 冠状病毒属
(Coronavirus)
，是一类具有囊膜
、
遗传物质为线性单链正链
RNA(ssRNA) 病毒，在自然界中广泛存在
(Weiss et al.,2005)。
截至目前已发现7种感染人类的冠状病毒，分别为
HCoV
‑
229E(
α
属，
1965
年
)、HCoV
‑
OC43(
β
属，
1967
年
)、SARS
‑
CoV
‑
1 (
β
属，
2003
年
)、HCoV
‑
NL63(
α
属，
2004
年
)、HCoV
‑
HKU1(
β
属，
2005
年
)、MERS
‑ꢀ
CoV(
β
属，
2012
年/>)
和
SARS
‑
CoV
‑
2(
β
属，
2019
年
)。
该7种冠状病毒均可引起人呼吸系统疾病，其中，
HKU1
，
NL63
，
OC43
和
229E
引起呼吸系统轻微症状，是普通流感相关第二大类感染病毒；而
SARS
‑
CoV
‑1，
MERS
‑
CoV
和
SARS
‑
CoV
‑2可引起严重的呼吸系统疾病
(Corman et al.,2018)
，尤其是
SARS
‑
CoV
‑2传染性更强，危害性更大
。
[0003]SARS
‑
CoV
‑2是具有包膜结构的正链单链
RNA
病毒，其整体形态呈圆形或椭圆形，直径约
80
‑
120nM
，由4种结构蛋白构成，分别为包膜蛋白
(E
蛋白
)、
膜蛋白
(membrane
， M
蛋白
)、
刺突蛋白
(spike
，
S
蛋白
)
和核壳蛋白
(nucleocapsid
，
N)。
其中，
N
蛋白包裹病毒的核酸物质，
S、E
和
M
蛋白共同构成病毒的外壳
。S
蛋白表达于
SARS
‑
CoV
‑2病毒粒子表面，是由
S1
和
S2
亚基以非共价键构成的一个同源三聚体
(Wrapp et al.,2020b)。
病毒粒子通过表面刺突蛋白的受体结合域
(receptor binding domain
，
RBD)
，与表达
ACE
‑
2 的宿主细胞相结合，然后通过
S2
亚基功能结构域，与宿主细胞融合并侵入感染宿主
。 SARS
‑
CoV
‑2病毒侵入人体后，会引起机体免疫应答，分泌干扰素
(IFN)
以及趋化因子，用于抑制病毒增殖和召集白细胞攻击病毒；或产生特异性抗体，阻断病毒
S
蛋白与机体 ACE
‑2结合再感染等
。
然而，
S
蛋白由于存在较多
N
‑
糖基化位点而易形成糖蛋白，大量的糖基化在一定程度上可改变该蛋白的空间结构，封闭或破坏抗原表位，抑制机体产生免疫应答，从而逃避免疫
。
除此之外，
SARS
‑
CoV
‑2产生大量突变，传染性强，且离开宿主后可在室温环境下存活长达9天，在空气或不同材质的物体表面2小时到9天仍可保持感染性
(Kampf et al.,2020)。
[0004]疫苗是流行性感染类疾病的有效预防措施之一
。
但是，个体接种疫苗后，往往需要长达2个月方能产生足够强的免疫
。
而对一些免疫力弱或不能有效产生抗体的老年或青少年人群，疫苗可能发挥不了应有预防的作用
。
广谱中和抗体，可快速应对突发的大规模病毒感染事件，或及时应对疫情中出现的病毒变异或免疫逃逸现象，具有预防及治疗的双重功效；可以弥补疫苗的不足，也为未来可能出现的新的突变株蔓延或其他突发病毒感染事件做好抗体候选分子库储备
。
[0005]目前大多数新冠病毒中和抗体主要通过竞争阻断病毒
RBD
同宿主细胞
ACE
‑2的结合，从而阻断病毒粒子的感染而达到防治的效果
。
已有较多的是自
SARS
‑
CoV
‑2康复病人血清中分离出的针对
RBD
或非
RBD
结合表位的传统人源
IgG
型中和抗体
(Brouwer etal.,
2020
；
Cao et al.,2020
；
Hansen et al.,2020
；
Liu et al.,2020
；
Robbiani et al.,2020
；
Wec etal.,2020
；
Wrapp et al.,2020a
；
Xiang et al.,2020)
，该类传统抗体生产成本高，价格昂贵，不易于大规模推广应用；且同时需要评估抗体依赖性增强效应
(antibody
‑
dependentenhancement,ADE)
的影响
。
同时，由于自康复病人血清中分离的中和抗体，受病毒株变异影响，分离所获得的中和抗体的广谱中和活性往往受到限制
。
开发广谱中和抗体，防止由于病毒
S
蛋白氨基酸变异导致的免疫逃逸问题，是目前中和抗体药物开发的重点
。
根据作用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括
CDR1、CDR2、CDR3
，所述
CDR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:1
所示，所述
CDR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:2
所示，所述
CDR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
所示
。2.
如权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述
CDR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:4
所示，所述
CDR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:5
所示，所述
CDR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
所示；或，所述
CDR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:6
所示，所述
CDR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:7
所示，所述
CDR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
所示；或，所述
CDR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:8
所示，所述
CDR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:9
所示，所述
CDR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
所示；或，所述
CDR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:10
所示，所述
CDR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:11
所示，所述
CDR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
所示
。3.
如权利要求1或2所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体还包括
FR1、FR2、FR3
和
FR4
；所述
FR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:12
所示，所述
FR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:13
所示，所述
FR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:14
所示，所述
FR4
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:15
所示；优选地，所述
FR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:16
所示，所述
FR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:17
所示，所述
FR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:18
所示，所述
FR4
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:15
所示；或，所述
FR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:19
所示，所述
FR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:20
所示，所述
FR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:21
所示，所述
FR4
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:15
所示；或，所述
FR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:22
所示，所述
FR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:23
所示，所述
FR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:24
所示，所述
FR4
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:15
所示；或，所述
FR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:25
所示，所述
FR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:26
所示，所述
FR3
的氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小盼，王媚娘，刘淡珊，顾颖，刘龙奇，
申请(专利权)人：深圳华大生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：