用于外周血造血干细胞的冻存液及冻存方法技术

本发明专利技术公开了一种用于外周血造血干细胞的冻存液，由羟乙基淀粉

【技术实现步骤摘要】
用于外周血造血干细胞的冻存液及冻存方法


[0001]本专利技术涉及一种用于外周血造血干细胞的冻存液及冻存方法，属于细胞的冻存保护

。

技术介绍

[0002]外周血造血干细胞移植
(PBSCT)
是目前治疗恶性血液病和多种实体瘤的有效方法
。
外周血造血干细胞
(PBSC)
的体外保存是
PBSCT
的重要组成部分
。
外周血造血干细胞储存是指临床通过血细胞单采技术从供者体内获取外周血造血干细胞，进行低温储存
。
正常情况下，人体外周血中是没有造血干细胞的，要通过提前注射造血细胞生长因子来促使骨髓中的干细胞释放到外周血中，然后再通过细胞单采技术采集释放到外周血中的造血干细胞
。
造血干细胞冻存技术的应用，使患者有充裕的时间选择最佳预处理方案进行造血干细胞移植，体外保存过程中有效地保证造血干细胞的活力是移植成功的关键，冻存干细胞的效率高低直接影响移植成功率
。
[0003]目前用于外周血造血干细胞的冻存液通常是由
10
％的二甲基亚砜
(DMSO)
和
90
％的胎牛血清组成的，二甲基亚砜常温下具有细胞毒性，且在临床使用时无法洗脱，有报道表明当输入患者体内的冻存干细胞中
DMSO
含量大于5％时，可引起患者不同程度的副作用发生
。
因此，有必要研发一种冻存效果更佳且无毒的冻存液
。
专利
技术实现思路

[0004]针对上述现有技术，本专利技术提供了一种用于外周血造血干细胞的冻存液，以及一种冻存外周血造血干细胞的方法
。
[0005]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]一种用于外周血造血干细胞的冻存液，由羟乙基淀粉
40
氯化钠注射液和
DMSO
组成，二者体积比为
9:1。
[0007]一种冻存外周血造血干细胞的方法：向含有外周血造血干细胞的血液中加入羟乙基淀粉
40
氯化钠注射液和
DMSO
，混匀，冻存；其中，
PBSC、
羟乙基淀粉
40
氯化钠注射液及
DMSO
三者体积比例为
10:9:1。
[0008]进一步地，所述含有外周血造血干细胞的血液
(PBSC
由血细胞分离机提前分离
)
临时储存在样本管或血袋中，进行冻存时，将血袋转移到洁净工作台上，摇床混匀3～
5min
；消毒血袋导管，剪开斜口，插入连接管，将血液转移至回输袋或冻存袋
(
短期冻存体积
≦30ml
，长期冻存体积
≦24ml)
；注入羟乙基淀粉
40
氯化钠注射液和
DMSO
，混匀，直接转入
‑
80℃
冰箱
(
短期冻存
)
或样本程序降温后转入
‑
196℃
液氮
(
长期冻存
)。
[0009]进一步地，所述样本程序降温使用程序降温仪进行，降温流程为：
[0010]a.4℃
等待，至
PBSC
放入程序降温仪；
[0011]b.PBSC
放入后，以
5℃/min
降至
0℃
，保持
5min
；
[0012]c.
以
2℃/min
降至
‑
10℃
，保持
5min
；
[0013]d.
以
1℃/min
降至
‑
45℃
，保持
35min
；
[0014]e.
以
5℃/min
降至
‑
90℃
，保持
5min
；
[0015]d.
样本转入
‑
196℃
液氮长期保存
。
[0016]本专利技术的用于外周血造血干细胞的冻存液，冻存效果更佳，且复苏效果优异，可保证
PBSC
冻存复苏后的活性；且本专利技术的
DMSO
含量低，能够直接静脉注射回输到人体内
。
本专利技术的冻存外周血造血干细胞的方法，步骤简洁且提高了
PBSC
细胞回收率
。
附图说明
[0017]图1：胞活性流式结果示意图
。
[0018]图2：
CD34
流式检测结果示意图
。
具体实施方式
[0019]下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明
。
然而，本专利技术的范围并不限于下述实施例
。
本领域技术人员能够理解，在不背离本专利技术的精神和范围的前提下，可以对本专利技术进行各种变化和修饰
。
[0020]下述实施例中所涉及的仪器
、
试剂
、
材料，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器
、
试剂
、
材料，可通过正规商业途径获得
。
下述实施例中所涉及的实验方法
、
检测方法，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法
、
检测方法
。
[0021]实施例1外周血造血干细胞的冻存
[0022]实验材料：
PBSC
，
DMSO
，羟乙基淀粉
40
氯化钠注射液，
Thermo
程序降温仪，苏净安泰超净工作台，
Thermo
液氮罐，
Beckman FC500
流式细胞仪
。
[0023]冻存液配制及外周血造血干细胞冻存：按体积分数计，量取
45
份羟乙基淀粉
40
氯化钠注射液，5份
DMSO
，与
50
份外周血造血干细胞混匀，贴上标签，放入程序降温仪，按程序进行降温，然后转移至液氮罐中冻存至相应时间
。
液氮温度为
‑
196℃。
[0024]外周血造血干细胞的复苏
、
检测：冻存五个月后，取出冻存袋，迅速放入
37℃
水浴锅中，充分振荡使其融化，采用7‑
AAD
染色进行流式细胞仪检测，分析外周血造血干细胞活性
。
流式检测结果如图1所示，结果表明本专利技术的冻存液适用于外周血造血干细胞的保存，且
DMSO
的浓度低，直接注射后，对体内其他细胞的毒性小
。
[0025]外周血本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于外周血造血干细胞的冻存液，其特征在于：由羟乙基淀粉
40
氯化钠注射液和
DMSO
组成，二者体积比为
9:1。2.
一种冻存外周血造血干细胞的方法，其特征在于：向含有外周血造血干细胞的血液中加入羟乙基淀粉
40
氯化钠注射液和
DMSO
，混匀，冻存；其中，
PBSC、
羟乙基淀粉
40
氯化钠注射液及
DMSO
三者体积比例为
10:9:1。3.
根据权利要求2所述的冻存外周血造血干细胞的方法，其特征在于：所述含有外周血造血干细胞的血液临时储存在样本管或血袋中，进行冻存时，将血袋转移到洁净工作台上，摇床混匀3～
5min
；消毒血袋导管，剪开斜口，插入连接管，将血液转移至回输袋或冻存袋；注入羟乙基淀粉
40
氯化钠注射液和
DMSO
，混匀，直接转入
‑
80℃
冰箱或样本程序降温后转入
‑
1...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏洁芳，杨旭东，李雁冰，田雨，盛燕华，赵莹，
申请(专利权)人：银丰生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：