一种间充质干细胞的传代培养方法技术

本发明专利技术公开了一种间充质干细胞的传代培养方法，属于干细胞培养技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞的传代培养方法


[0001]本专利技术涉及干细胞培养
，尤其涉及一种间充质干细胞的传代培养方法
。

技术介绍

[0002]干细胞是具有增殖和分化潜能的细胞，能够产生高度分化的功能细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。
目前有
6000
多项干细胞临床试验正在进行中，涉及
200
种适应症
、8
大系统疾病，在呼吸系统
、
神经系统
、
内分泌系统
、
运动系统
、
免疫系统
、
生殖系统
、
循环系统以及消化系统等多系统领域均有成功案例报道
。
因此，在无菌条件下，如何对干细胞进行高效的体外培养具有重要意义
。
[0003]目前，在干细胞体外培养过程中，一般考虑培养基
、
培养温度
、
培养时间
、
换液频次等条件对细胞生长的影响，并不断地优化这些培养条件，从而提高细胞培养效率
。
但是，随着培养条件的不断优化，遇到了技术瓶颈，干细胞培养效率的提高程度受到了限制
。
因此，急需进行技术性的突破，以能够在优化的培养条件的基础上再次提高干细胞培养效率
。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供了如下技术方案
。
[0005]本专利技术提供了一种间充质干细胞的传代培养方法，包括：首先将平台放置在
37℃
细胞培养箱或
35
‑
37℃
温控箱中，并使用精度为
0.01
‑
0.05mm/m
的水平仪将所述平台调整水平，将接种有细胞的细胞培养瓶或细胞工厂放置在所述平台上；然后在细胞培养箱或温控箱中进行细胞贴壁培养，当细胞贴壁率达到
90%
后进行后续培养；其中，所述平台包括一个平板以及与平板下表面连接的4‑6个
Z
轴带刻度位移台，所述平板的平整度
=2
×
(1+d/1000)mm
，其中
d
为平板工作面对角线长度；使用时，使用精度为
0.01
‑
0.05mm/m
的水平仪调节所述
Z
轴带刻度位移台使所述平板至水平，将接种有细胞的细胞培养瓶或细胞工厂直接置于所述平板上
。
[0006]优选地，所述
Z
轴带刻度位移台的长度为
80
‑
120mm、
宽度为
80
‑
120mm、
移动量为
10
‑
40mm、
载重量为5‑
20kg、
移动调控精度为
1mm。
[0007]优选地，所述平板的尺寸为
100
×
500mm。
[0008]优选地，所述平板上开设有
20
‑
100
个孔
。
[0009]优选地，所述平板为
00
级的花岗岩平板
。
[0010]优选地，所述温控箱采用防火保温板制备，所述温控箱的箱体的至少一个面板上设置有散热器和加热板，所述温控箱还设置有温度探头和温度控制器，所述温度探头和所述加热板分别与所述温度控制器电连接
。
[0011]优选地，所述温度控制器的控制精度为
0.05
‑
0.2℃
，所述温控箱内的温度控制在
35
‑
37℃
；所述防火保温板的导热系数小于等于
0.050W/(m
·
k)
；所述加热板的功率为
50
‑
200W
；所述散热器的长度为
50
‑
150mm、
宽度为
50
‑
150mm、
电压为
12
‑
110V。
[0012]优选地，当所述细胞工厂大于
20
层或细胞规模化培养时，将所述平台放置在温控
箱中，否则，将所述平台放置在细胞培养箱中
。
[0013]本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的一种间充质干细胞的传代培养方法，首先将平台放置在
37℃
细胞培养箱或
35
‑
37℃
温控箱中，并使用精度为
0.01
‑
0.05mm/m
的水平仪将所述平台调整水平，将接种有细胞的细胞培养瓶或细胞工厂放置在所述平台上；然后在细胞培养箱或温控箱中进行细胞贴壁培养，当细胞贴壁率达到
90%
后进行后续培养
。
通过使用平台放置细胞培养瓶或细胞工厂，并调整平台的水平状态使其达到较高的水平度，优化了细胞贴壁培养中的条件，使得细胞在细胞培养瓶或细胞工厂中能够分布均匀，细胞贴壁率得到了较大的提高，进而提高了细胞的培养效率
。
实验证明，采用本专利技术提供的方法，可将每
T175
瓶细胞产量由1×
107细胞
/
瓶左右提高至
1.4
×
107细胞
/
瓶左右，将
10
层细胞工厂产量由
3.1
×
108细胞
/
个提升至
5.1
×
108细胞
/
个，将
20
层大规格细胞工厂产量由
5.6
×
108细胞
/
个提升至
9.1
×
108细胞
/
个，突破了现有技术中通过优化培养基等条件无法有效提高培养效率的技术瓶颈，而且本专利技术的方法适用于大规格的细胞工厂以及规模化细胞培养
。
附图说明
[0014]图1为本专利技术所述间充质干细胞的传代培养方法流程示意图；图2为本专利技术所述的平台的结构示意图；图3为本专利技术所述的温控箱的结构示意图；图中各符号的含义如下：
1、
平台，
2、
温控箱，
3、
防火保温板，
4、
散热器，
5、
加热板，
6、
温度探头，
7、
温度控制器，
8、
平板，
9、Z
轴带刻度位移台，
10、
探头连接线，
11、
加热板连接线，
12、
孔
。
具体实施方式
[0015]为了更好地理解上述技术方案，下面将结合说明书附图以及具体的实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种间充质干细胞的传代培养方法，其特征在于，包括：首先将平台放置在
37℃
细胞培养箱或
35
‑
37℃
温控箱中，并使用精度为
0.01
‑
0.05mm/m
的水平仪将所述平台调整水平，将接种有细胞的细胞培养瓶或细胞工厂放置在所述平台上；然后在细胞培养箱或温控箱中进行细胞贴壁培养，当细胞贴壁率达到
90%
后进行后续培养；其中，所述平台包括一个平板以及与平板下表面连接的4‑6个
Z
轴带刻度位移台，所述平板的平整度
=2
×
(1+d/1000)mm
，其中
d
为平板工作面对角线长度；使用时，使用精度为
0.01
‑
0.05mm/m
的水平仪调节所述
Z
轴带刻度位移台使所述平板至水平，将接种有细胞的细胞培养瓶或细胞工厂直接置于所述平板上
。2.
如权利要求1所述的间充质干细胞的传代培养方法，其特征在于，所述
Z
轴带刻度位移台的长度为
80
‑
120mm、
宽度为
80
‑
120mm、
移动量为
10
‑
40mm、
载重量为5‑
20kg、
移动调控精度为
1mm。3.
如权利要求1所述的间充质干细胞的传代培养方法，其特征在于，所述平板的尺寸为
100
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李帅民，修冰水，朱礼华，史秀珍，刘世红，
申请(专利权)人：北京中卫医正科技有限公司，
类型：发明
国别省市：