测定血液中神经退行性疾病危险因素的方法技术

本公开描述了考虑

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Europ
é
in 2008
–
cost estimates from the Eurocode project.International Journal of Geriatric Psychiatry 26,825
‑
832)。
国际老年精神病学杂志
26,825
‑
832)。
据估计，
65
岁以上的人中有十分之一，
85
岁以上的人中有近一半患有
AD。
目前，养老金领取者占总人口的比例为
20
％，而且还在上升，这对瑞典国家卫生和社会保健系统来说是一个沉重的负担
。
[0006]目前还没有治愈
AD
的方法，批准的药物也只能提供对症治疗
。
尽管治疗
AD
非常困难，预防它则是一个更现实的目标
。
据估计，将
AD
的发病时间推迟5年将使其病例数量减少一半；如果推迟
10
年，这种类似流行病的现象几乎是会消失的
。
为了建立成本效益好的预防方案，对
AD
进行早期诊断是非常重要的
。
为了
AD
患者自身以及他们的亲属和雇主的利益，一旦
AD
被诊断出来，能够预测
AD
的发展也是很重要的
。
由于测量血液蛋白中的
isoAsp
以及抗
isoAsp
抗体的水平可以帮助评估
AD
发展的风险，或者，当
AD
已经被诊断出来时，估计快速智力下降的风险，因此创造一种廉价而准确的测量方法是很重要的
。
[0007]与血液中
isoAsp
含量有关的另一个问题是，人类血浆在血库中的保存期限很短，通常为
12
个月
。
人类血液是一种宝贵的生物液体，全世界每年收集和分离
2800
万升血液以获得血浆或血清
。
大约7％的采集血液被立即丢弃，主要是由于病毒感染
。
大约3％，即
100
万升，由于储存问题或过期而最终被丢弃
。
在储存条件下
(
通常为
‑
20
～
‑
25℃)
，
Asn
的脱酰胺仍然发生，因此
isoAsp
水平随着储存时间的增加而增加
。
尤为重要的是测量储存血液中的
isoAsp
含量，以避免输入
isoAsp
水平升高的不健康血液，因为输入这样的血液可能携带神经退行性疾病的风险
。
[0008]测定血液中
isoAsp
的残留量并不简单
。
其中一种方法是使用复杂而昂贵的液相色谱结合串联质谱
(LC
‑
MS/MS)
的方法，类似于
Yang
等工作中使用的方法
。
目前市面上唯一的商用方法名为
ISOQUANT
，它能测定
PIMT
利用
SAM
分子将
isoAsp
转化为
Asp
的速率
。ISOQUANT
读出的是反应产物样品中
SAH
的浓度
。
为了获得蛋白质中
isoAsp
浓度的期望值，测量的
SAH
水平必须通过蛋白质浓度进行标准化，而蛋白质浓度需要通过不同的测定方法测量
。
图3显示了
ISOQUANT
分析的结果，显示
12
例认知功能快速下降的
AD
患者与
12
例认知功能缓慢下降的
AD
患者相比，其血液蛋白质中的
isoAsp
浓度升高
。
图4显示了根据这些数据得到的受试者工作特征曲线
(ROC)。
曲线下面积为
0.82
，表明以血液蛋白中
isoAsp
占比预测
AD
患者认知功能下降速率的分析性能较好
。
[0009]然而，目前基于
ISOQUANT
或
LC
‑
MS/MS
来分析
isoAsp
水平具有异质性和高成本的特点，是阻碍其在临床实践中广泛应用的因素
。
为达到这一目的，利用基于抗体的生化检测将是更简单
、
更快且更靠谱的方法
。
[0010]这其中有一种方法是酶联免疫吸附测定方法
(ELISA)
，最早由
Engvall
和
Perlmann
提出
(J Immunol 1972,109,129
‑
135)。ELISA
目前在血液分析中的应用极为广泛
。
然而，
ELISA
方法需要一个特异性识别
isoAsp
的抗体，而由于
isoAsp
的免疫原性低，其化学基团较小，很难研制出在含有所有氨基酸的环境下对
isoAsp
残基都具有特异性的抗体
(
泛
isoAsp
抗体
)。
这是迄今为止尚未报道以抗体为基础的检测大量血液蛋白质中
isoAsp
浓度的主要原因
。

技术实现思路

[0011]本专利技术基于这样一种认识，即与其通过泛
isoAsp
抗体来测定所有或大多数人体蛋
白中的
isoAsp
水平，不如只测定一种血液中丰度高的蛋白上某个代表性位点的
isoAsp
水平就足够了
。
由于血浆和血清中大约一半的蛋白质含量是由人血清白蛋白
(HSA)
引起的，因此我们选择这种蛋白作为血液中的代表蛋白
。HSA
分子在血液中的停留时间通常为
25
天左右
。
由于
HSA
序列含有几个
Asn
残基，在此期间，至少有一个
Asn
残基可通过脱酰胺作用转化为
isoAsp。
当
isoAsp
通过肝脏时，
PIMT
会将其修复并转化为正常的
L
‑
Asp
残基
。
我们认识到，由于该修复反应对蛋白质特性的特异性较低，
HSA
中的
isoAsp
水平应该与血液中其他本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种用于确定给定人血液样品是否属于正常组或风险组的方法，所述方法包括：获得被认为正常的第一组测试血液样品和第二组对照血液样品；从所述血液样品获得血浆；测量每个血浆样品中抗异天冬氨酸抗体的相对丰度；获得所述正常血浆样品组中抗异天冬氨酸抗体的相对丰度的分布；建立给定相对丰度的抗异天冬氨酸抗体源自正常样品的概率的统计模型；基于根据所述统计模型的最大可能性和抗异天冬氨酸抗体的测量的相对丰度，将每个血浆测试样品归属于正常组或风险组
。2.
根据权利要求1所述的方法，其中用于测量抗异天冬氨酸抗体的相对丰度的抗原是一种或多种人工脱酰胺的血液蛋白
。3.
根据权利要求1所述的方法，其中代替抗异天冬氨酸抗体的相对丰度，使用人血清白蛋白中代表性序列位置中异天冬氨酸残基的占有率
。4.
根据权利要求1和3所述的方法，其中使用抗异天冬氨酸抗体的相对丰度以及代表性人血清白蛋白序列位置中异天冬氨酸残基的占有率，并且给定样品属于正常组或风险组的概率的统计模型基于两种类型的测量的组合
。5.
根据权利要求1‑4所述的方法，其中选择所述正常对照样品组，使得其在任何以下参数或其组合方面与所述测试样品组匹配：性别
、
年龄
、
种族
、
民族
、
基因型
、
教育
、
职业
、
生活方...

【专利技术属性】
技术研发人员：王纪晶，罗曼，
申请(专利权)人：罗曼，
类型：发明
国别省市：