本发明专利技术公开了过表达Clec1b蛋白质细胞膜在制备膝骨关节炎药物的用途。具体还公开了一种治疗膝骨关节炎的药物及其制备方法；本发明专利技术基于骨关节炎关节滑膜单细胞测序发现一种PDPN+炎性巨噬细胞亚型。目前如何通过将药物递送至PDPN+炎性巨噬细胞从而调控其炎症水平，最终缓解滑膜炎症是目前需要解决的重点和难点。难点。
【技术实现步骤摘要】
过表达Clec1b蛋白质细胞膜在制备膝骨关节炎药物的用途
[0001]本专利技术涉及生物医药领域；具体涉及过表达Clec1b蛋白质细胞膜在制备膝骨关节炎药物的用途。
技术介绍
[0002]膝骨关节炎或退行性骨关节炎是老龄化社会的一个公共健康问题。它是一种活动关节的慢性肌肉骨骼疾病，如膝关节和髋关节。全世界约有2.5亿人患有骨关节炎，其中大多数是老年人。OA(osteoarthrosis)是最常见的与疼痛和残疾相关的关节疾病。其主要临床症状为慢性疼痛、关节不稳、僵硬和放射学关节间隙狭窄。然而目前并没有针对OA的特效药物，晚期OA患者只能接受手术治疗。
[0003]滑膜炎(炎症细胞浸润滑膜)是一种骨关节炎发生发展过程中的一种最常见的病理改变，它可以出现在骨关节炎的早期阶段，当还未出现明显的软骨退变时，就可以通过超声，磁共振等检测出来，并且滑膜炎被认为与骨关节炎的严重程度密切相关。在骨关节炎患者的滑膜液中发现了多种炎症介质，所有这些成分能诱导软骨细胞以及滑膜细胞分泌基质金属蛋白水解酶，导致软骨基质的降解，软骨失去稳定的生存环境，最终导致软骨的损伤。而滑膜组织中的巨噬细胞在骨性关节炎病理中起着关键作用。越来越多的证据表明滑膜中的巨噬细胞可以通过释放炎症分子来促进骨性关节炎，这些炎症分子能够刺激驻留的成纤维细胞群体产生软骨细胞外基质降解酶包括金属蛋白酶家族MMPs和ADAMTS。因此，靶向OA早期滑膜巨噬细胞，是延缓OA进展的有效途径。
[0004]前期的单细胞转录组测序结果显示，在OA的进展过程中，滑膜中巨噬细胞大量增加，并特异性高表达PDPN。因此将药物精准递送至PDPN阳性巨噬细胞的，进而调控其炎性反应对于缓解OA滑膜炎症并进一步调控OA进展有望成为新的治疗途径。而具有临床价值的药物通常会被关节快速清除,无法到达组织深部,使骨关节炎的临床管理变得更加复杂。基于纳米材料构建的纳米载药体系虽然一定程度的缓解了单纯药物在体内的代谢及摄取缺点，但不可避免的遭遇到面临的难题：1)纳米药物递送缺乏高效性；2)所应用的载体为外来物，生物相容性差；3)易被循环系统内的血清或血浆蛋白等封闭表面使得内部药物不易释放；4)容易被网状内皮系统的单核、巨噬细胞等清除其效能降低。
技术实现思路
[0005]本专利技术发现滑膜组织中的巨噬细胞在骨性关节炎病理中起着关键作用，其可以通过释放炎症分子来促进骨性关节炎。因此，靶向OA早期滑膜巨噬细胞，是延缓OA进展的有效途径。本专利技术基于骨关节炎关节滑膜单细胞测序发现一种PDPN+炎性巨噬细胞亚型。目前如何通过将药物递送至PDPN+炎性巨噬细胞从而调控其炎症水平，最终缓解滑膜炎症是目前需要解决的重点和难点。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术的目的是提出一种靶向PDPN+巨噬细胞的药物载体及其制备方法和应用，
以解决现有技术中的膝骨关节炎缺乏特异性靶向抗炎药物的问题，同时提供了一种新的膝关节滑膜组织炎症的治疗靶点。
[0008]在阐述本专利技术的技术方案之前，定义本文中所使用的术语如下：
[0009]术语“PLGA”是指：聚乳酸
‑
羟基乙酸共聚物。
[0010]术语“PVA”是指：聚乙烯醇。
[0011]术语“LPS”是指：脂多糖。
[0012]术语“PBS”是指：磷酸缓冲盐溶液。
[0013]术语“M
Clec1b+”是指：过表达Clec1b蛋白的细胞膜。
[0014]术语“M
Clec1b+
/PL”是指：过表达Clec1b膜蛋白的293T细胞膜包裹PLGA核含Liquiritigenin(LIQ)的纳米囊。
[0015]术语“293T
Clec1b+”是指：过表达Clec1b膜蛋白的293T稳转细胞株。
[0016]术语“PL”是指：PLGA核含Liquiritigenin药物的纳米囊。
[0017]术语“LIQ”是指：Liquiritigenin示例抗炎药物。
[0018]术语“DMM”是指：内侧半月板失稳手术。
[0019]为实现上述目的，本专利技术的第一方面基于单细胞测序在DMM术后滑膜组织中发现了一群PDPN+巨噬细胞，并基于PDPN配体特异性配体蛋白Clec1b构建了一种工程化过表达Clec1b蛋白的工具细胞系，并提取该细胞系来源的过表达Clec1b蛋白的细胞膜M
Clec1b+
。其中，所述细胞系选自以下一种或多种：人胚肾细胞(293T细胞)，RAW264.7巨噬细胞，SW1353软骨肉瘤细胞，MLE12肺泡上皮细胞；优选为293T细胞。
[0020]本专利技术的第二方面提供了一种能够靶向PDPN+巨噬细胞的工程化仿生膜药物载体纳米递送系统或药物，所述纳米系统为如第一方面所述的工程化生物膜包裹的内部载有抗炎药物的纳米囊。
[0021]根据本专利技术第二方面的纳米递送系统，其中，所述纳米囊的材料选自以下一种或多种：PLGA、聚氨基酯、透明质酸、壳聚糖、聚乳酸；优选为PLGA。
[0022]根据本专利技术第二方面的纳米递送系统或药物，其中，所述纳米囊中，PLGA与示例抗炎药物Liquiritigenin(LIQ)的质量比为5:1～50:1，优选为15:1～30:1，最优选为20:1。
[0023]根据本专利技术第二方面的纳米递送系统或药物，其中，所述工程化生物膜、纳米囊与LIQ的质量份数为：生物膜1～50份，纳米囊1～50份，LIQ 0.5～5份；优选为生物膜10～30份，纳米囊10～30份，LIQ 0.5～2份；最优选为生物膜21份，纳米囊20份，LIQ 1份；
[0024]优选地，当纳米囊材料选自PLGA时，所述生物膜与所述纳米囊的质量比为1:1。
[0025]本专利技术的第三方面提供了一种抑制炎性巨噬细胞炎性产物的药物
[0026]本专利技术的第三方面提供了第二方面所述的工程化仿生膜靶纳米靶向递送系统的制备方法，该制备方法可以包括以下步骤：
[0027](1)制备抗炎药物溶液；
[0028](2)将步骤(1)制备的药物溶液滴加入纳米囊材料的溶液中；
[0029](3)将步骤(2)所得混合溶液滴加入溶剂中，超声搅拌离心去上清，重悬所得沉淀；
[0030](4)将步骤(3)所得重悬液与生物膜混合，超声，得到所述纳米递送系统。
[0031]根据本专利技术第三方面的制备方法，其中，所述步骤(3)中，所述溶剂选自以一或多种：PVA水溶液、、吐温20水溶液、吐温80水溶液；优选为PVA水溶液，更优选为1％
‑
10％的PVA
水溶液，最优选为3％PVA水溶液。
[0032]本专利技术的第四方面提供了第一方面所述的工程化细胞株和第二方面所述的纳米递送系统在制备用于治疗骨关节炎的药物递送至PDPN+巨噬细胞中的应用。
[0033]本专利技术旨在寻找一种基于靶向PDPN+炎性巨噬细胞的工程化仿生膜伪装的高本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.过表达Clec1b蛋白质细胞膜在制备膝骨关节炎药物的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的膝骨关节炎为滑膜中巨噬细胞中PDPN阳性的膝骨关节炎。3.一种膝骨关节炎药物，其特征在于包括如下组分：M
Clec1b+
、纳米囊、抗炎药。4.如权利要求3所述的膝骨关节炎药物，其特征在于包括以下按重量份计的组分：M
Clec1b+
1～50份、纳米囊1～50份、抗炎药0.5～5份。5.如权利要求3或4所述的膝骨关节炎药物，其特征在于：所述的纳米囊选自以下材料中的至少一种：PLGA、聚氨基酯、透明质酸、壳聚糖、聚乳酸。6.如权利要求3或4所述的膝骨关节炎药物，其特征在于：所述的抗炎药为Liquiritigenin。7.如权利要求3所述的膝骨关节炎药物，其特征在于：所述的纳米囊的材料为PLGA；所述的抗炎药为Liquiritigenin；所述纳米囊与抗炎药的质量比例为5:1～50:1。8...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭睿，桂涛，倪正鑫，
申请(专利权)人：暨南大学附属第一医院广州华侨医院，
类型：发明
国别省市：
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