GP130结合分子及使用方法技术

本发明专利技术涉及生物活性分子，所述生物活性分子包括特异性结合至人gp130的胞外结构域的单域抗体(sdAb)，包含这种抗体的组合物及其使用方法。方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】GP130结合分子及使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年8月5日提交的美国临时申请号63/061,562、2020年9月15日提交的美国临时申请号63/078,745和2021年1月11日提交的美国临时申请号63/135,884的优先权权益，其公开通过引用全文纳入本文以用于所有目的。


[0003]本专利技术涉及生物活性分子，所述生物活性分子包括特异性结合至gp130的胞外结构域的单域抗体，包含这种单域抗体的组合物，及其使用方法。

技术介绍

[0004]糖蛋白130(gp130)，也称为IL6ST、IL6R
‑
β和CDw130m，是一种高度保守的跨膜蛋白，在IL6受体家族中形成1型细胞因子受体的亚基。gp130在人体中普遍表达，是至少九种细胞因子的共享受体亚基，包括IL6、IL27、心肌营养素
‑
1(CT
‑
1)和神经生成素(NP)、制瘤素M(OSM)、白血病抑制因子(LIF)、IL11、睫状神经营养因子(CNTF)和心肌营养素样细胞因子(CLC)。这些不同的细胞因子介导高度多样的生物过程，因此gp130已被证明在各种类型的癌症、心血管疾病、自身免疫性疾病中发挥作用。通过形成适当的受体复合物，gp130能够与多种细胞因子相互作用，从而与50多种不同的细胞反应相关联。
[0005]gp130的胞外结构域包括六个连续的三明治结构域(D1
‑‑
D6)：N
‑
末端免疫球蛋白样结构域(D1)，然后是五个纤连蛋白3型结构域(D2
‑
D6)。大多数配体与膜远端结构域D1、D2和D3中的gp130相互作用。细胞因子反应需要N
‑
末端D1免疫球蛋白样结构域。作为对配体结合的反应，胞内结构域与Janus激酶(JAK)相互作用，以提供胞内信号转导
[0006]除了其膜结合形式外，gp130还具有三种可溶性同种型sgp130
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RAPS、sgp130
‑
E10和“全长”sgp130。gp130的可溶性形式缺乏跨膜和胞质结构域，但保留了胞外配体结合结构域。gp130的可溶性形式与IL6受体的可溶性形式相互作用。尽管sgp130的生理作用尚未完全确定，但已假定sgp130通过抑制gp130信号转导具有抗炎作用。sgp130对于IL6:sIL6R具有高亲和力(1mM)，该复合物驱动促炎和促动脉粥样硬化的IL6反式信号转导途径。sgp130与IL6:sIL6R的结合导致IL6:sIL6R复合物的中和，从而降低其炎症活性。在小鼠中，sgp130的重组形式(sgp130Fc)与动脉粥样硬化硬化小鼠实验模型中的保护作用相关联。可溶性gp130也被报道可抑制IL
‑
6、OSM、LIF和CNTF的功能。
[0007]尽管gp130在人体中普遍表达，但其表达在各种器官和细胞类型中差异显著，并且在成人器官中的表达高于胎儿组织。由于gp130参与多种细胞因子信号转导途径，认为其他受体亚基表达的差异可能有助于与涉及gp130的受体的配体相关联的不同且广泛变化的功能。例如，IL
‑
6R以相对较高的水平存在于肝脏、中性粒细胞和白细胞中。LIF受体在神经系统和免疫系统中高度表达。IL
‑
11R在T淋巴细胞、心房和主动脉中高度表达
[0008]由于gp130在一系列组织和器官类型的细胞信号转导中的核心作用，gp130已被提议作为干预多种人类疾病状态的靶点。例如，抗
‑
gp130抗体已被提出用于调节与创伤、感染
和损伤相关的急性期炎症反应。Harrison,等(1996)British Journal of Haematology 95(3):443
‑
451。Harrison等证明了针对gp130的胞外结构域的单克隆抗体在下调急性期反应中的IL6急性期反应方面是有效的。Okamato等观察到，抗
‑
gp130单克隆抗体可以在U1细胞中抑制IL
‑6‑
诱导的HIV
‑
1的表达，这表明阻断gp130信号转导可能对治疗HIV
‑
1感染具有治疗潜力。Okamato,等(1997)Biochemistry and Molecular Biology International 43(4):733
‑
740。
[0009]下调或抑制gp130活性的药剂已被证明在多种癌症类型中有效。Xu等报道了一种口服小分子gp130抑制剂用于治疗卵巢癌。Xu,等(2013)Mol Cancer Ther；12(6)；937
–
49。Martin等证明，gp130的表达与膀胱癌的侵袭性形式相关，并且用siRNA抑制gp130提供了肿瘤特异性反应，表明阻断gp130在控制肿瘤生长方面具有治疗性潜力Martin,等(2019)Mol Cancer Ther；18(2):413
‑
420。此外，Burger等证明，在治疗骨髓瘤方面，抗
‑
gp130抗体比抗
‑
IL6抗体更有效，并且gp130抗体治疗可完全预防浆细胞瘤的发展。Burger,等(2017)Haematologica 102(2):381
–
390。
[0010]尽管单克隆抗体是用于检测和定量蛋白质的最广泛的试剂，但单克隆抗体是约150kDa的大分子，有时会限制其在多个试剂竞争近表位识别的试验中的使用。一类独特的免疫球蛋白，含有重链结构域，但缺乏轻链结构域(通常称为重链”抗体(HCAb))存在于骆驼科动物中，包括单峰骆驼、双峰驼、野生双峰驼，美洲驼、羊驼、骆马和原驼，以及软骨鱼类，如鲨鱼。HCAb的分离的可变结构域区域被称为VHH(反映其“可变
‑
重
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重”结构的缩写)或(Ablynx)。单域VHH抗体具有体积小(～12
‑
14kD)、分子量约为常规哺乳动物IgG类抗体的十分之一的优点，这有助于这些VHH分子与gp130的抗原决定簇的结合，而常规单克隆IgG形式可能无法接近这些决定簇(Ingram等.,2018)。此外，VHH单结构域抗体通常具有高热稳定性，有助于将药剂分布到难以或不可能维持冷链的地理区域。这些性质，特别是结合不需要重/轻链配对(如IgG抗体的情况)和简单制造(如在细菌表达系统中)的简单噬菌体展示发现方法，使得VHH单域抗体在多种应用中有用，包括成像剂和治疗剂的开发。

技术实现思路

[0011]本专利技术提供了特异性结合gp130的多肽。
[0012]本专利技术提供了特异性结合gp130胞外结构域的多肽。
[0013]本专利技术提供了一种gp130结合分子，其特异性结合gp130(例如，人gp130)的胞外结构域。
[0014]在一些实施方式中，gp130结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种特异性结合至gp130胞外结构域的gp130结合分子。2.如权利要求1所述的gp130结合分子，其中所述gp130结合分子包括单域抗体(sdAb)。3.如权利要求2所述的gp130结合分子，其中所述sdAb包含互补决定区1(CDR1)、CDR2和CDR3，如下表的行中所示：4.如权利要求2或3所述的gp130结合分子，其中所述sdAb与选自SEQ ID NO:2、3、4、5、6和7中的任一项的多肽序列具有至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％同一性或100％同一性。5.如权利要求2所述的gp130结合分子，其中所述sdAb包含互补决定区1(CDR1)、CDR2和CDR3，如下表的行中所示：
6.如权利要求2所述的gp130结合分子，其中所述sdAb与选自SEQ ID NO:26
‑
74中的任一多肽序列具有至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％同一性或100％同一性。7.如权利要求3或5中任一项所述的gp...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：辛德凯因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：