一种铁皮石斛一次成苗组培方法技术

本发明专利技术提供一种铁皮石斛一次成苗组培方法，涉及铁皮石斛培养技术领域，采用1/2MS与0.30mg/L的NAA激素、8％马铃薯汁和12％香蕉汁混合形成的培养基对铁皮石斛进行240d的培养，在此培养基上铁皮石斛种子可以在不需要人工进行转接的情况下，直接在一种培养基上完成种子形成原球茎、原球茎分化并生长为6

【技术实现步骤摘要】
一种铁皮石斛一次成苗组培方法


[0001]本专利技术涉及铁皮石斛培养
，具体为一种铁皮石斛一次成苗组培方法。

技术介绍

[0002]铁皮石斛为兰科石斛属草本植物，因其茎节处呈黑褐色，又称黑节草，是我国传统珍贵药材之一，与人参、天山雪莲、灵芝等并称为中华九大仙草。
[0003]铁皮石斛种苗的工厂化育苗多采用种子进行扩繁。任海虹等(2017)选择铁皮石斛种子为试验材料，建立了铁皮石斛种子的四步成苗方式，依次经过诱导产生原球茎、原球茎增殖培养、分化芽苗和芽苗生根的四步成苗技术，后经过改进形成三步成苗方式，分别为种子无菌萌发、丛生苗壮苗和大苗生根。
[0004]现有的铁皮石斛的成苗时存在工艺流程繁琐，需要多次换瓶转接，培育周期长，导致人力、物力和财力的浪费，且组培苗的污染率增加，导致培育的出瓶率低，不利于实际使用。

技术实现思路

[0005]解决的技术问题
[0006]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种铁皮石斛一次成苗组培方法，解决了以下问题铁皮石斛培育过程繁琐，培育周期长，成本高的问题。
[0007]技术方案
[0008]为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种铁皮石斛一次成苗组培方法，包括所述铁皮石斛的成苗方法如下：
[0009]Sp1：组培材料预准备，所述组培材料预准备为准备铁皮石斛蒴果、蒸馏水、75％的乙醇、10％的NaClO溶液、无菌水、培养基所需仪器和材料；
[0010]Sp2：铁皮石斛的消毒，所述铁皮石斛的消毒为将铁皮石斛进行表面冲洗后，置于超净工作台内用内用75％的乙醇消毒，再将其置于10％的NaC l O溶液中浸泡，将消毒后的蒴果用无菌水漂洗4
‑
5次，然后用灭过菌的干燥滤纸除去蒴果表面附着的水分；
[0011]Sp3：悬浮液的制备，所述悬浮液的制备为取步骤Sp2中清洗后的蒴果用镊子夹紧果柄一端，用解剖刀在蒴果另一端切一小口，并用解剖刀轻轻敲打镊子，将种子都落在无菌水里面，制成悬浮液备用；
[0012]Sp4：培养基的制备，所述培养基的制备为取1/2MS培养基内部加入0.30mg/L的NAA激素、8％马铃薯汁和12％香蕉汁混合，并经过灭菌后得到无菌培养基；
[0013]Sp5：移栽和培养，所述移栽和培养为取步骤Sp3中的铁皮石斛种子悬浮液用移液枪吸取1
‑
2mL注射到经过步骤Sp4中制备的无菌培养基内，并摇晃均匀，并设置培育环境；
[0014]Sp6：铁皮石斛的成苗，所述铁皮石斛的成苗240d左右后，成苗植株高度在6
‑
8cm,完成整个组培成苗过程。
[0015]优选的，所述组培材料预准备中选用的铁皮石斛蒴果为饱满、成熟未开裂状态。
[0016]优选的，所述铁皮石斛的消毒中铁皮石斛的清洗为在在自来水下用洗洁精清洗蒴果表面，然后在自来水下冲洗0.5h，再继续用蒸馏水冲洗三遍。
[0017]优选的，所述培养基的制备过程中采用高压灭菌锅内部灭菌的方式进行培养基的灭菌处理。
[0018]优选的，所述移栽和培养过程中培育环境为设置培养温度为25
±
2℃，空气湿度为50
‑
60％。
[0019]优选的，所述移栽和培养过程中采用培养60d对培养基内部的状态和幼苗长度进行记录。
[0020]优选的，所述移栽和培养中采用培育环境控制时在培养基内部种子小芽长出前均采用2000l x强度的光照，光照时间为12/d，小芽长出后采用强度为3000l x强度的光照，光照时间为11/d。
[0021]优选的，所述铁皮石斛的成苗过程和依次为20d种子变绿、50d种子形成原球茎、120d分化出健壮小苗、240d长为6
‑
8cm根茎叶俱全的健壮植株。
[0022]优选的，所述铁皮石斛的消毒中在75％的乙醇消毒时间为25
‑
30s，在10％的NaC l O溶液中浸泡时间为20
‑
30min。
[0023]优选的，所述培养基制备过程中通过加热的方法，使其转变琼脂的形态，当其彻底溶解灭菌后，冷却备用。
[0024]有益效果
[0025]本专利技术提供了一种铁皮石斛一次成苗组培方法。具备以下有益效果：
[0026]本专利技术采用1/2MS与0.30mg/L的NAA激素、8％马铃薯汁和12％香蕉汁混合形成的培养基对铁皮石斛进行240d的培养，在此培养基上铁皮石斛种子可以在不需要人工进行转接的情况下，直接在一种培养基上完成种子形成原球茎、原球茎分化并生长为6
‑
8cm的带有根、茎、叶的完整幼苗种子，极大简化了现有铁皮石斛种苗的生产工艺、缩短了生长周期，从而将常规的三步成苗优化为一步成苗，省去了壮苗与生根两个环节，极大简化了现有种苗生产的操作流程。并且育苗所用时间缩短为240d，比现有三步成苗技术缩短60d，有效缩短了现有铁皮石解种苗的育苗时间，降低了种苗的生产成本。
附图说明
[0027]图1为本专利技术的铁皮石斛成苗方法图；
[0028]图2为本专利技术的铁皮石斛NAA激素浓度实验图；
[0029]图3为本专利技术的铁皮石斛有机物含量实验图；
[0030]图4为本专利技术的铁皮石斛马铃薯汁含量实验图。
具体实施方式
[0031]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0032]具体实施例一：
[0033]如图1
‑
4所示，一种铁皮石斛一次成苗组培方法，包括，包括所述铁皮石斛的成苗方法如下：
[0034]Sp1：组培材料预准备，组培材料预准备为准备铁皮石斛蒴果、蒸馏水、75％的乙醇、10％的NaCl O溶液、无菌水、培养基所需仪器和材料；
[0035]Sp2：铁皮石斛的消毒，铁皮石斛的消毒为将铁皮石斛进行表面冲洗后，置于超净工作台内用内用75％的乙醇消毒，再将其置于10％的NaCl O溶液中浸泡，将消毒后的蒴果用无菌水漂洗4
‑
5次，然后用灭过菌的干燥滤纸除去蒴果表面附着的水分；
[0036]Sp3：悬浮液的制备，悬浮液的制备为取步骤Sp2中清洗后的蒴果用镊子夹紧果柄一端，用解剖刀在蒴果另一端切一小口，并用解剖刀轻轻敲打镊子，将种子都落在无菌水里面，制成悬浮液备用；
[0037]Sp4：培养基的制备，培养基的制备为取1/2MS培养基内部加入0.30mg/L的NAA激素、8％马铃薯汁和12％香蕉汁混合，并经过灭菌后得到无菌培养基；
[0038]Sp5：移栽和培养，移栽和培养为取步骤Sp3中的铁皮石斛种子悬浮液用移液枪吸取1
‑
2mL注射到经过步骤Sp4中制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛一次成苗组培方法，其特征在于：所述铁皮石斛的成苗方法如下：Sp1：组培材料预准备，所述组培材料预准备为准备铁皮石斛蒴果、蒸馏水、75％的乙醇、10％的NaClO溶液、无菌水、培养基所需仪器和材料；Sp2：铁皮石斛的消毒，所述铁皮石斛的消毒为将铁皮石斛进行表面冲洗后，置于超净工作台内用内用75％的乙醇消毒，再将其置于10％的NaClO溶液中浸泡，将消毒后的蒴果用无菌水漂洗4
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5次，然后用灭过菌的干燥滤纸除去蒴果表面附着的水分；Sp3：悬浮液的制备，所述悬浮液的制备为取步骤Sp2中清洗后的蒴果用镊子夹紧果柄一端，用解剖刀在蒴果另一端切一小口，并用解剖刀轻轻敲打镊子，将种子都落在无菌水里面，制成悬浮液备用；Sp4：培养基的制备，所述培养基的制备为取1/2MS培养基内部加入0.30mg/L的NAA激素、8％马铃薯汁和12％香蕉汁混合，并经过灭菌后得到无菌培养基；Sp5：移栽和培养，所述移栽和培养为取步骤Sp3中的铁皮石斛种子悬浮液用移液枪吸取1
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2mL注射到经过步骤Sp4中制备的无菌培养基内，并摇晃均匀，并设置培育环境；Sp6：铁皮石斛的成苗，所述铁皮石斛的成苗240d左右后，成苗植株高度在6
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8cm,完成整个组培成苗过程。2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛一次成苗组培方法，其特征在于：所述组培材料预准备中选用的铁皮石斛蒴果为饱满、成熟未开裂状态。3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛一次成苗组培方法，其特征在于：，所述铁皮石斛的消毒中铁皮石斛的清洗为在在自来水下用洗洁精清洗蒴果表面，然...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文明，杨茂林，陈超，陈华，
申请(专利权)人：贵州梵天农业科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：