本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及一种检测儿童腹泻病原体的试剂盒。本发明专利技术提供了引物探针组、引物探针组的应用、试剂、试剂盒、装置以及检测方法。本发明专利技术能够特异性检测A群轮状病毒、F组肠道腺病毒40、41，其中以轮状病毒VP7的保守片段设计的引物探针能够覆盖其不同基因型，解决现有儿童腹泻病毒检测技术准确度不高、覆盖度不高等问题。覆盖度不高等问题。
【技术实现步骤摘要】
一种检测儿童腹泻病原体的试剂盒
[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及一种检测儿童腹泻病原体的试剂盒。
技术介绍
[0002]根据世界卫生组织(WHO)和联合国国际儿童紧急救援基金会(UNICEF)的数据，全球每年约有20亿腹泻病例发生，其中5岁以下儿童中每年约有1,900,000死于腹泻，主要发生在发展中国家。5岁以下儿童中这一高达18％的死亡率意味着每天约有5000名以上的儿童因腹泻死亡。在所有因腹泻致死的儿童中，78％发生在非洲和东南亚地区。5岁以下儿童平均每年约发生3次急性腹泻。从全球来看，在这一年龄组中，急性腹泻是其第二大死因(仅次于肺炎)，腹泻的发生率和致死率在这一组年龄的患儿中均为最高，在婴幼儿中尤为突出——此后随年龄增长风险率下降。在发展中国家，腹泻对儿童所造成的其他直接后果包括发育迟缓，营养不良和认知损害。病毒性腹泻最常见的病原主要包括轮状病毒(Rotavirus，RV)、杯状病毒(Human Calicivirus，HuCV)、肠道腺病毒、星状病毒等，其中轮状病毒感染所占比例最大。最常见的病毒病原体是诺如病毒和轮状病毒，其次是札如病毒、肠道腺病毒和星状病毒。6株A群轮状病毒(G1P[8]、G2P[4]、G3P[8]、G4P[8]、G9P[8]和G12P[8])占全球流行的A群轮状病毒的90％粪口转播，甚至是动物传播给人。
[0003]轮状病毒无处不在，感染全球3～5岁的几乎所有儿童。2003年，全球5岁儿童中报告了1.14亿例轮状病毒感染病例，其中2400万例需要门诊就诊，230万例需要住院治疗。2013年，全球5岁以下儿童估计有20万例死亡与轮状病毒有关。轮状病毒感染引起的腹泻严重程度高于平均水平，社区感染的轮状病毒患者中，需要家庭护理的患者中所占的比例(5～10％)，低于需要门诊治疗的患者(15～20％)或住院治疗(30～50％)。
[0004]腺病毒是与儿童急性胃肠炎相关的病原体之一。人腺病毒占所有儿童腹泻病例的1～31％。该病毒属于腺病毒科。该病毒为双链DNA无包膜球形病毒，直径70～90nm。腺病毒含有11种结构蛋白。其中三个在衣壳中，如六邻体、五邻基和纤维。六邻体和纤维上均有群特异性和型特异性表位。根据衣壳蛋白的变异情况分为6种，分别命名为A～G。与婴幼儿腹泻相关的常见基因型为F基因型，主要流行的血清型为40型和41型，称为肠道腺病毒。肠道腺病毒感染腹泻占腹泻的20％。临床诊断应综合流行病学资料、临床表现和粪便常规检查进行。病原确诊应依据从粪便、呕吐物、血等标本中检测出病原，或特异性抗原、特异性核酸片段检测阳性。
[0005]目前针对腹泻病毒的检测，实验室常见的检测方法有核酸检测和免疫层析等。其中免疫层析检测是最为常见的一种方法，但其检测准确度却远远不及核酸检测。有文章显示根据VP2基因设计的分型引物，探针用一条；也有文献报道根据NSP3基因设计引物探针，后期发现该引物探针覆盖度不高，对临床样本检测会发生漏检。
技术实现思路
[0006]有鉴于此，本专利技术提供的一种检测儿童腹泻病原体的试剂盒，解决现有儿童腹泻
病毒检测技术准确度不高、覆盖度不高等问题。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了引物探针组，包括引物探针组A或引物探针组B；
[0009]所述引物探针组A包括引物A、引物B和探针A；
[0010]所述引物探针组B包括引物C、引物D和探针B；
[0011]所述引物A具有：
[0012](1)、如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；或
[0013](2)、如(1)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(1)的相同或相似；或
[0014](3)、与如(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有95％同源性的核苷酸序列；
[0015]所述引物B具有：
[0016](4)、如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；或
[0017](5)、如(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(4)的相同或相似；或
[0018](6)、与如(4)或(5)所示的核苷酸序列至少有95％同源性的核苷酸序列；
[0019]所述引物C具有：
[0020](7)、如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；或
[0021](8)、如(7)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(7)的相同或相似；或
[0022](9)、与如(7)或(8)所示的核苷酸序列至少有95％同源性的核苷酸序列；
[0023]所述引物D具有：
[0024](10)、如SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列；或
[0025](11)、如(10)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(10)的相同或相似；或
[0026](12)、与如(10)或(11)所示的核苷酸序列至少有95％同源性的核苷酸序列；
[0027]所述探针A具有：
[0028](13)、如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；或
[0029](14)、如(13)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(13)的相同或相似；或
[0030](15)、与如(13)或(14)所示的核苷酸序列至少有95％同源性的核苷酸序列；
[0031]所述探针B具有：
[0032](16)、如SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列；或
[0033](17)、如(16)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(16)的相同或相似；或
[0034](18)、与如(16)或(17)所示的核苷酸序列至少有95％同源性的核苷酸序列；
[0035]所述多个为2个至3个。
[0036]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述引物探针组包括所述引物探针组A和所述引物探针组B。
[0037]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述引物探针组中，所述探针A和所述探针B分
别标记不同的荧光基团。
[0038]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述引物探针组中，所述荧光基团包括FAM、VIC、FAM
‑
dT、HEX、Cy3、TAMRA
‑
dT、JOE、Cy5、CY3
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dT、ROX、Cy5.5、CY5
‑
dT、TAMRA、Texas Red、HEX
‑
dT、TET或NED中的一种或两种或三种。
[0039]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述引物探针组中，所述探针A和所述探针B标记的淬灭基团包括BHQ1、BHQ1
‑
dT、BHQ2、BHQ2
‑
dT、BHQ3、Dabcyl、Ecli本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.引物探针组，其特征在于，包括引物探针组A或引物探针组B；所述引物探针组A包括引物A、引物B和探针A；所述引物探针组B包括引物C、引物D和探针B；所述引物A具有：(1)、如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；或(2)、如(1)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(1)的相同或相似；或(3)、与如(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有95％同源性的核苷酸序列；所述引物B具有：(4)、如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；或(5)、如(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(4)的相同或相似；或(6)、与如(4)或(5)所示的核苷酸序列至少有95％同源性的核苷酸序列；所述引物C具有：(7)、如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；或(8)、如(7)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(7)的相同或相似；或(9)、与如(7)或(8)所示的核苷酸序列至少有95％同源性的核苷酸序列；所述引物D具有：(10)、如SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列；或(11)、如(10)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(10)的相同或相似；或(12)、与如(10)或(11)所示的核苷酸序列至少有95％同源性的核苷酸序列；所述探针A具有：(13)、如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；或(14)、如(13)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(13)的相同或相似；或(15)、与如(13)或(14)所示的核苷酸序列至少有95％...
【专利技术属性】
技术研发人员：兰定云，李进福，郑业焕，高利飞，付光宇，吴学炜，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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