一种细胞外基质创面修复支架及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开一种细胞外基质创面修复支架及其制备方法与应用，包括以下步骤：S1.将动物跟腱进行切块、清洗、烘干、液氮冷冻，得待处理动物跟腱；S2.将待处理动物跟腱加入至SDS脱细胞液中，进行脱细胞处理，得到一次脱细胞动物跟腱组织；S3.再加入至酸的醇溶液中，进行脱细胞处理，得到二次脱细胞动物跟腱组织；S4.对二次脱细胞动物跟腱组织进行酶解，得到细胞外基质凝胶；S5.在细胞外基质凝胶中加入谷氨酰胺转氨酶，恒温反应，得细胞外基质

【技术实现步骤摘要】
一种细胞外基质创面修复支架及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物医用材料
，尤其涉及一种细胞外基质创面修复支架及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]现如今，由于战争、火灾、交通事故、化学灼伤、电击烧伤、人口老龄化等因素导致的皮肤缺损患者众多，其中，大部分还需要进行植皮手术，因此皮肤修复产品需求巨大。
[0003]目前市场上多用的人工皮肤支架为日本Pelnac的双层人工人皮和深圳Lando的人工真皮，其主要成分均为动物来源的胶原蛋白。日本Pelnac的双层人工人皮虽然修复效果较好，但原料成本昂贵，而深圳Lando的人工真皮中的活性成分少、手术的可操作性低、维持时间短，修复效果并不理想。
[0004]因此需要提供一种修复效果好的细胞外基质创面修复支架及其制备方法。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本申请提供一种细胞外基质创面修复支架及其制备方法与应用，修复效果好。
[0006]为达到上述技术目的，本申请采用以下技术方案：
[0007]第一方面，本申请提供一种细胞外基质创面修复支架的制备方法，包括以下步骤：
[0008]S1.将动物跟腱进行切块、清洗、烘干、液氮冷冻，得待处理动物跟腱；
[0009]S2.将待处理动物跟腱加入至SDS脱细胞液中，进行脱细胞处理，得到一次脱细胞动物跟腱组织；
[0010]S3.将一次脱细胞动物跟腱组织加入至酸的醇溶液中，再次进行脱细胞处理，得到二次脱细胞动物跟腱组织；
[0011]S4.利用混合酶的水溶液对二次脱细胞动物跟腱组织进行酶解，得到细胞外基质凝胶；
[0012]S5.在细胞外基质凝胶中加入谷氨酰胺转氨酶，恒温反应，得细胞外基质
‑
谷氨酰胺转氨酶粗产品；
[0013]S6.在细胞外基质
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谷氨酰胺转氨酶粗产品中加入丝素蛋白水溶液，恒温反应，得细胞外基质
‑
谷氨酰胺转氨酶
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丝素蛋白水凝胶，经液氮冷冻、干燥后，即得细胞外基质创面修复支架。
[0014]优选的，步骤S2中，SDS脱细胞液中包括质量比为1:2
‑
3的聚乙二醇对异辛基苯基醚和十二烷基硫酸钠；脱细胞处理的温度为37
‑
40℃，脱细胞处理的时间为24
‑
48h。
[0015]优选的，步骤S3中，酸的醇溶液为柠檬酸的正丁醇溶液，脱细胞处理的温度为30
‑
37℃，脱细胞处理的时间为36
‑
72h。
[0016]优选的，步骤S4中，混合酶为胃蛋白酶与谷氨酰胺转氨酶的混合物，酶解的pH值为4.5
‑
5，酶解的时间为36
‑
48h。
[0017]优选的，步骤S4与步骤S5之间，还包括，将细胞外基质凝胶用水透析至pH值为6
‑
6.5。
[0018]优选的，步骤S5及步骤S6中，恒温反应的温度均为37℃，恒温反应的时间均为24
‑
30h。
[0019]优选的，步骤S5与步骤S6之间，还包括，将细胞外基质
‑
谷氨酰胺转氨酶粗产品用水透析至pH值为7
‑
7.4。
[0020]优选的，谷氨酰胺转氨酶与丝素蛋白水凝胶的质量比为0.16
‑
0.375：1.05
‑
1.2。
[0021]第二方面，本申请提供一种细胞外基质创面修复支架。
[0022]第三方面，本申请提供一种细胞外基质创面修复支架在制备组织工程或再生医学产品中的应用。
[0023]本申请的有益效果如下：
[0024]本申请制备的细胞外基质创面修复支架来源于动物跟腱，具有良好的孔隙结构、良好的力学性能、并且不具有细胞毒性，具有可调和、可切割的能力，可以更好地适应皮肤缺损形状，且具有明显的促愈合效果，廉价易得，易于手术操作；
[0025]本申请通过液氮
‑
酸
‑
酶共处理法处理动物跟腱，脱细胞效率高、活性成分流失少；且细胞外基质创面修复支架为细胞外基质
‑
谷氨酰胺转氨酶
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丝素蛋白水凝胶的交联复合物，三种材料复合使得细胞外基质创面修复支架不易变质、机械强度高、稳定性好、生物活性高，有较好的手术可操作性和较长的自然降解时间，方便临床应用，皮肤修复效果好。
附图说明
[0026]图1为实施例1细胞外基质创面修复支架的扫描电镜图片。
[0027]图2为不同细胞外基质创面修复支架降解率测试结果统计。
[0028]图3为不同细胞外基质创面修复支架CCK
‑
8细胞毒性测试结果统计。
[0029]图4为实施例1细胞外基质支架的活死细胞染色结果。
[0030]图5为不同细胞外基质创面修复支架促进创面愈合的效果。
具体实施方式
[0031]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0032]本申请提供一种细胞外基质创面修复支架的制备方法，包括以下步骤：
[0033]S1.将动物跟腱进行切块、清洗、烘干、液氮冷冻，得待处理动物跟腱；
[0034]S2.将待处理动物跟腱加入至SDS脱细胞液中，进行脱细胞处理，得到一次脱细胞动物跟腱组织；
[0035]S3.将一次脱细胞动物跟腱组织加入至酸的醇溶液中，进行脱细胞处理，得到二次脱细胞动物跟腱组织；
[0036]S4.利用混合酶的水溶液对二次脱细胞动物跟腱组织进行酶解，得到细胞外基质凝胶；
[0037]S5.在细胞外基质凝胶中加入谷氨酰胺转氨酶，恒温反应，得细胞外基质
‑
谷氨酰
胺转氨酶粗产品；
[0038]S6.在细胞外基质
‑
谷氨酰胺转氨酶粗产品中加入丝素蛋白水溶液，恒温反应，得细胞外基质
‑
谷氨酰胺转氨酶
‑
丝素蛋白水凝胶，经液氮冷冻、干燥后，即得细胞外基质创面修复支架。
[0039]细胞外基质是多细胞生物中一种复杂大分子网络的统称，其包括多种生物大分子、糖胺聚糖、蛋白聚糖、胶原蛋白、细胞粘附因子和生长因子等成分，具有良好的促进细胞黏附和诱导细胞增殖的能力，可以为细胞生长、分化和增殖提供适宜生理微环境。本申请以动物跟腱为原料，通过液氮
‑
酸
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酶共处理法处理，提高了脱细胞的效率，并且可减少活性成分的流失，增强修复效果。
[0040]然而，细胞外基质虽然有一定的皮肤修复能力，但其易变质，且稳定性差，容易在短时间内降解，且机械强度不足，不具备较好的手术操作性，在临床上的应用难度大，基于此，本申请将谷氨酰胺转氨酶及丝素蛋白与细胞外基质进行本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞外基质创面修复支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.将动物跟腱进行切块、清洗、烘干、液氮冷冻，得待处理动物跟腱；S2.将所述待处理动物跟腱加入至SDS脱细胞液中，进行脱细胞处理，得到一次脱细胞动物跟腱组织；S3.将所述一次脱细胞动物跟腱组织加入至酸的醇溶液中，再次进行脱细胞处理，得到二次脱细胞动物跟腱组织；S4.利用混合酶的水溶液对所述二次脱细胞动物跟腱组织进行酶解，得到细胞外基质凝胶；S5.在所述细胞外基质凝胶中加入谷氨酰胺转氨酶，恒温反应，得细胞外基质
‑
谷氨酰胺转氨酶粗产品；S6.在所述细胞外基质
‑
谷氨酰胺转氨酶粗产品中加入丝素蛋白水溶液，恒温反应，得细胞外基质
‑
谷氨酰胺转氨酶
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丝素蛋白水凝胶，经液氮冷冻、干燥后，即得所述细胞外基质创面修复支架。2.根据权利要求1所述的细胞外基质创面修复支架的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述SDS脱细胞液中包括质量比为1:2
‑
3的聚乙二醇对异辛基苯基醚和十二烷基硫酸钠；所述脱细胞处理的温度为37
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40℃，脱细胞处理的时间为24
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48h。3.根据权利要求1所述的细胞外基质创面修复支架的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述酸的醇溶液为柠檬酸的正丁醇溶液，所述脱细胞处理的温度为30
‑
37℃，脱细胞处理的时间为...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊李红，尤晨凯，胡康迪，周雅倩，代志寅，王梦婷，
申请(专利权)人：武汉理工大学，
类型：发明
国别省市：