一种抗人制造技术

本发明专利技术属于抗体领域，具体涉及一种抗人

【技术实现步骤摘要】
一种抗人CD19鼠单抗及兔单抗的制备方法和应用


[0001]本专利技术属于抗体领域，具体涉及一种抗人
CD19
鼠单抗及兔单抗的制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]CD19
是
B
细胞表面的Ⅰ型跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，位于
16
号染色体短臂上
(16p11.2)
，编码
556
个氨基酸的Ⅰ型跨膜糖蛋白，分子量
95KD。CD19
具有单一的跨膜区
、
胞内
C
末端和胞外
N
末端，是淋巴瘤
B
细胞以及滤泡树突状细胞的生物标记物，在其他谱系或其他组织中不表达或低表达，因此在一定程度上降低了脱靶毒性，这使得
CD19
成为包括急性淋巴细胞白血病和淋巴瘤在内的
B
细胞恶性肿瘤的最佳靶点
[1]。CD19
在
B
细胞反应调节因子中发挥正向调节作用，参与
B
细胞抗原受体
(B cell receptor,BCR)
识别抗原的过程，同时还在维持体液及抗原诱导的免疫反应和耐受诱导之间的平衡方面起着关键作用
[2]。CD19
是成熟
B
细胞表面多分子复合物的重要成员，与补体受体
CD21、CD81
和
CD225
共同发挥作用
[3]。
该复合物通过调节内源性和受体诱导的信号可降低
BCR
介导的
B
细胞激活阈值
。CD19
与
BCR
相结合可促进细胞内钙释放和细胞增殖，触发下游
Akt
－
PI3K
和
MAPKs
信号通路
[4]。CD19
的表达量在
B
细胞的发育过程中起着至关重要的作用，其表达异常往往会影响各种细胞以及疾病的发生
[5]。
[0003]CD19
检测可用于自身免疫病
、
免疫缺陷病
、
恶性肿瘤
、
血液病
、
变态反应性疾病等疾病的辅助诊断，检测结果对于分析发病机制
、
观察疗效及监测预后有重要意义
。CD19
检测以免疫组织化学方法为主，利用抗原抗体发生特异性结合的特点，通过特异性标记抗体与
CD19
抗原结合，进行孵育并通过染色镜检
、
仪器计数等方式对标记进行识别，从而达到定性或定量检测的目的
。
但是免疫组化在所有应用的抗体当中没有一个抗体是足够敏感和足够特异
。
这样就要求在制作免疫组化的过程当中用一组抗体来综合判断肿瘤的性质，单靠一个或者是两个抗体就会出现偏差
。
免疫组化在实验的过程当中会有很多不可控的因素，比如说一抗的选择，二抗的时间长短以及显色时间的长短
。
这就会造成免疫组化结果的不稳定
。
对不同的实验室之间也会造成免疫组化的结果不同或者甚至相反
。
免疫组化虽然能帮助病理医生诊断疾病，但还应该更客观和更全面以及综合的来判断免疫组化的结果
。IHC
实验的核心为特异性结合
CD19
蛋白的单克隆抗体，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性
。
因此，研制出一种可以大量制备，亲和力和特异性更高的针对
CD19
蛋白的单克隆抗体具有重要的意义
。
[0004][1]乔晓红
.CD19
在儿童
B
系急性淋巴细胞白血病诊治中的意义与相关研究进展
[J].
中华实用儿科临床杂志
,2019,34(3):170
‑
174.
[0005][2]WANG K,WEI G,LIU D.CD19
：
A biomarkeror B cell development,lymphoma diagnosis and herapy[J].Experimental Hematology&Oncology,2012,1(1):1
‑
7.
[0006][3]LI X,DING Y,ZI M,et al.CD19,from bench to bedside[J].Immunology Letters,2017,183:86
‑
95.
[0007][4]LIU Z,ZENG W,HUANG X,et al.Peripheral CD19(hi)B ells exhibit activated phenotype and functionality in promoting IgG and IgM production in human autoimmune diseases[J].Scientific Reports,2017,7(1):1
‑
12.
[0008][5]YANG W,AGRAWAL N,PATEL J,et al.Diminished expression of CD19 in B
‑
cell lymphomas[J].Cytometry Part B,Clinical Cytometry,2005,63(1):28
‑
35.

技术实现思路

[0009]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种抗人
CD19
抗体的具体氨基酸序列，通过该序列可以利用现有技术获得表达抗人
CD19
抗体的基因工程细胞，提高了
CD19
抗体的产率和生产稳定性，并且该抗体亲和力高，特异性强，可用于对疾病进行明确的病因诊断，并为鉴别诊断提供依据
。
[0010]术语：
[0011]本专利技术中，
CDR(complementarity
‑
determining regions
，
CDR)
叫做互补决定区或互补决定簇
。
它位于免疫球蛋白的超变区，超变区是抗体的抗原结合位，与抗原决定簇的结构互补
。
一般包括
CDR1、CDR2、CDR3。
[0012]本专利技术中，可变区指免疫球蛋白轻链和重链靠近
N
端氨基酸序列变化较大的区域称为可变区
。
[0013]本专利技术中，重链指抗体中2条较长
、
相对分子量较大的相同的重链
(H
链
)
；轻链指抗体中2条较短
、
相对分子量较小的相同的轻链
(L
链...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗人
CD19
抗体，其特征在于，包括重链和轻链，所述的重链包括重链可变区，所述的轻链包括轻链可变区；所述的重链可变区包括
HCDR1、HCDR2
和
HCDR3
，所述的轻链可变区包括
LCDR1、LCDR2
和
LCDR3
，其中：
(1)HCDR1
为
SEQ ID NO.1
所示的氨基酸序列；
(2)HCDR2
为
SEQ ID NO.2
所示的氨基酸序列；
(3)HCDR3
为
SEQ ID NO.3
所示的氨基酸序列；
(4)LCDR1
为
SEQ ID NO.4
所示的氨基酸序列；
(5)LCDR2
为
SEQ ID NO.5
所示的氨基酸序列；
(6)LCDR3
为
SEQ ID NO.6
所示的氨基酸序列
。2.
根据权利要求1所述的抗人
CD19
抗体，其特征在于，所述的抗人
CD19
抗体重链可变区的氨基酸序列为
SEQ ID NO.7
或与
SEQ ID NO.7
具有
80
％以上序列相似性的序列；所述的抗人
CD19
抗体轻链可变区的氨基酸为
SEQ ID NO.8
或与
SEQ ID NO.8
具有
80
％以上序列相似性的序列；或所述的抗人
CD19
抗体轻链可变区的氨基酸为
SEQ ID NO.9
或与
SEQ ID NO.9
具有
80
％以上序列相似性的序列
。3.
根据权利要求1所述的抗人
CD19
抗体，其特征在于，所述的抗人
CD19
抗体重链氨基酸序列为
SEQ ID NO.10
，或与
SEQ ID NO.10
具有
65
％以上序列相似性的序列；或所述的抗人

【专利技术属性】
技术研发人员：张洋，施嘉敏，褚冰儿，赵鑫萍，徐飞，张娅，褚建达，
申请(专利权)人：浙江正熙生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：