中和呼吸道合胞病毒的制造技术

本发明专利技术公开了一种中和呼吸道合胞病毒

【技术实现步骤摘要】
中和呼吸道合胞病毒的C
‑
型单域抗体及应用


[0001]本专利技术涉及生物医药工程
，具体涉及一种中和呼吸道合胞病毒的
C
‑
型单域抗体及应用
。

技术介绍

[0002]呼吸道合胞病毒呈季节性流行，可经呼吸道和密切接触传播，主要感染婴幼儿
、
老人以及免疫力低下人群，导致急性呼吸道感染
、
肺炎，甚至死亡
。
然而至今无有效的疫苗和特异性治疗药物，临床则是使用利巴韦林
(
非特异性
、
副作用大
)
，或预防性注射
Palivizumab
单抗
(
价格昂贵
、
中和活性较弱
)
以达到抗病毒的目的，亟待研发新一代药物
。

技术实现思路

[0003]针对现有技术中的问题，本申请提供了一种中和呼吸道合胞病毒的
C
‑
型单域抗体及应用
。
[0004]本专利技术从人源
IgG1
的
CH2
结构域改造后的
CH2
‑
m01sm2
为骨架的噬菌体表面展示文库中，以呼吸道合胞病毒囊膜蛋白
F(F
蛋白
)
为抗原，经过筛选和后续改造，得到候选克隆
。
我们用大肠杆菌原核表达并纯化所得到的克隆蛋白，并对其生物学特异性及中和活性进行了鉴定，最终获得一种能够中和呼吸道合胞病毒的
C
‑
型单域抗体
BBT
‑
VC001
‑
1(
也可称为
C
‑
型纳米抗体
BBT
‑
VC001
‑
1)
，可以用于呼吸道合胞病毒的预防和治疗
。
[0005]BBT
‑
VC001
‑1具有三个
Loop
区，三个
Loop
区
Loop 1、Loop 2
和
Loop 3
的氨基酸序列分别如
SEQ ID No.1、SEQ ID No.3
和
SEQ ID No.6
所示
。
[0006]BBT
‑
VC001
‑1中编码所述三个
Loop
区
Loop 1、Loop 2
和
Loop 3
的核苷酸序列分别如
SEQ ID No.39、SEQ ID No.40
和
SEQ ID No.41
所示
。
[0007]BBT
‑
VC001
‑1的氨基酸序列如
SEQ ID No.10
所示，核苷酸序列如
SEQ IDNo.42
所示
。
[0008]本专利技术提供的上述针对
RSV F
蛋白的
C
‑
型单域抗体
BBT
‑
VC001
‑1，是通过以下方法得到：首先构建以
CH2(
图
1)
为骨架的噬菌体展示文库，然后以
RSV F
蛋白为抗原，经过筛选和优化得到克隆
BBT
‑
VC001
‑
1。
表达纯化该克隆
(
图
2)
，并对其进行鉴定分析
。
通过
ELISA
对
BBT
‑
VC001
‑1的结合活性进行了鉴定，实验结果表明
BBT
‑
VC001
‑1能够与
RSV F
蛋白特异性相结合
(
图
3)。
间接免疫荧光实验表明，
BBT
‑
VC001
‑1同样可以与细胞膜表面呈天然构象的
F
蛋白相结合
(
图
4)。
另外，细胞水平抗病毒实验表明，
BBT
‑
VC001
‑1具有高效的抗呼吸道合胞病毒作用
(
图
5)。
动物水平实验表明，通过肺部雾化给与
BBT
‑
VC001
‑1抗体可对
RSV
感染
Balb/c
小鼠起到预防和治疗作用
(
图
6)。
[0009]本专利技术中
BBT
‑
VC001
‑1抗体的氨基酸序列点突变体命名为
2C、M17、Zh1、B5、M2、M3、M4、M5、M6、M7、M8、M9、M10、M11、KS、2H、2H
‑
KS、F11、F11
‑
KS、2H
‑
F11、2H
‑
F11
‑
KS
具有与
BBT
‑
VC001
‑1抗体类似的结合活性及抗病毒活性
(
图7‑
10)。
同时，将
BBT
‑
VC001
‑1的三个
Loop
区替换到其他抗体片段的相应部位
(
所得抗体为
hIgG1 CH2
‑
com、hIgG2 CH2
‑
com、hIgG3 CH2
‑
com、hIgG4 CH2
‑
com)
，依然可以获得具有结合活性和抗病毒活性的组合体
(
图
11)。
将
BBT
‑
VC001
‑1与多肽
(ABD
和
16L)
或者蛋白
(VH)
连接做成融合多肽或者融合蛋白，其结合抗原的活性保持不变
(
图
12)
，以上所有突变体和抗体的序列编号列在文末表1中
。
[0010]本专利技术还揭示了上述中和呼吸道合胞病毒的
C
‑
型单域抗体在制备针对呼吸道合胞病毒的预防和治疗药物
、
检测探针
、
融合多肽
、
融合蛋白
、
偶联抗体中的应用
。
本专利技术的中和呼吸道合胞病毒的
C
‑
型单域抗体可在制备呼吸道合胞病毒防治相关的滴鼻剂
、
喷鼻剂
、
雾化药
、
肌肉注射制剂
、
静脉注射制剂中应用，优本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种中和呼吸道合胞病毒的
C
‑
型单域抗体，其特征在于：所述
C
‑
型单域抗体以
CH2
结构域为骨架，它具有三个
Loop
区：
Loop 1、Loop 2
和
Loop 3
，
Loop 1
的氨基酸序列选自
SEQ ID No.1
或
SEQ ID No.2
；
Loop 2
的氨基酸序列选自
SEQ ID No.3
‑5中任一项；
Loop 3
的氨基酸序列选自
SEQ ID No.6
‑9中任一项
。2.
根据权利要求1所述中和呼吸道合胞病毒的
C
‑
型单域抗体，其特征在于：
Loop 1、Loop 2
和
Loop 3
的氨基酸序列分别如
SEQ ID No.1、SEQ ID No.3
和
SEQ ID No.6
所示
。3.
根据权利要求1所述中和呼吸道合胞病毒的
C
‑
型单域抗体，其特征在于：所述
C
‑
型单域抗体的氨基酸序列选自
SEQ ID No.10
‑
35
中任一项
。4.
权利要求1～3所述的中和呼吸道合胞病毒的
C
‑
型单域抗体在制备针对呼吸道合胞病毒的预防和治疗药物<...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚睿，寻广谨，张海伟，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：