一种工程化外泌体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种工程化外泌体及其制备方法，包括如下步骤：S1：率先将外泌体膜蛋LAMP2B与Angiopep

【技术实现步骤摘要】
一种工程化外泌体及其制备方法


[0001]本专利技术涉及工程化外泌体
，具体为一种工程化外泌体及其制备方法。

技术介绍

[0002]外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡，现今，其特指直径在40
‑
100nm的盘状囊泡，于外泌体具有天然来源、高生物相容性和纳米尺寸等优点，它在药物传递和肿瘤治疗方面表现出极大的潜力，因此工程化外泌体可提高药物利用率，但在工程化外泌体提高药物利用率的同时，其副作用的影响也同样不容忽视。
[0003]但现有的工程化外泌体在实际用于医疗领域时，容易被神经胶质瘤干细胞所摄取的外泌体将治疗性药物释放到细胞质内，导致染色体受到光线辐射受损，在使用时，不可对周围的角质形成细胞的细胞核上起保护作用，在用于医疗使用时的治疗效果较差，使用时的实用性较低。

技术实现思路

[0004](一)解决的技术问题
[0005]本专利技术的目的在于提供一种工程化外泌体及其制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的不可对周围的角质形成细胞的细胞核上起保护作用，容易导致染色体受到光线辐射受损的问题。
[0006](二)技术方案
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种工程化外泌体及其制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
[0008]S1：率先将外泌体膜蛋LAMP2B与Angiopep
‑
2按比例合适配比，将外泌体膜蛋白LAMP2B与Angiopep
‑
2初步注入至陶瓷容器内，经过静置沉淀后，得到内嵌外泌体膜蛋白LAMP2B的Angiopep
‑
2；
[0009]S2：将毒性蛋白mRNA通过表达慢病毒感染间充质干细胞，筛选获得稳转细胞系，得到外泌体的运载物，即效应器；
[0010]S3：将MedGroTM免疫细胞培养基重悬PBMC置于80％氧气内的容器内，再加入与edGroTM免疫细胞培养基重悬PBMC1：1配比的缓冲液，在人工手动搅拌棒的搅动下，缓慢的将MedGroTM免疫细胞培养基重悬PBMC与缓冲液充分混合，将MedGroTM免疫细胞培养基固体(沉淀、细胞、活性物质等等)重新悬浮；
[0011]S4：将上述悬浮工艺完毕后的MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶取出，以冷冻方式将稳转细胞系效应器和MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶置于温度为
‑
5摄氏度至
‑
10摄氏度之间的容器内急速冷冻，冷冻时长为10min；
[0012]S5：稳转细胞系效应器和MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶急速冷冻后取出，随后将上述的外泌体膜蛋白LAMP2B与Angiopep
‑
2和稳转细胞系效应器和MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶置于常温状态下的卧式离心机内，驱动电机驱动卧式离心机旋转的转速定为
300/n，离心搅拌15min后，使用滴管滴加10％的H2O2，滴加的H2O2与Angiopep
‑
2保持相同的1：1比例；
[0013]S6：在卧式离心机对其中的外泌体进行离心工艺时，持续不间断的分批加入黑色素细胞，得到油相液体；
[0014]S7：在得到油相液体后将其取出，在常温的室内，将胆固醇
‑
PEG
‑
马来酰胺溶于油相液体内，并提取至震荡机内，在常温环境下震荡3H，震荡完毕后，得到透明微凝胶质外泌体。
[0015]优选的，所述S1中，外泌体膜蛋LAMP2B与Angiopep
‑
2结合，激活靶细胞细胞内的信号通路。
[0016]优选的，所述S2中，毒性蛋白mRNA的筛选采用600目精细滤网进行滤除。
[0017]优选的，所述MedGroTM免疫细胞培养基的主要成份是水、氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和低血清细胞培养基。
[0018]优选的，所述S6中，加入的黑色素细胞具体比例应与MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶的总体重量保持一致。
[0019]优选的，所述效应器中包括毒性蛋白mRNA过滤完毕后的稳转细胞系。
[0020]优选的，所述低血清细胞培养基中的添加的含量大于水、氨基酸、维生素、碳水化合物和无机盐相加的总含量。
[0021]优选的，所述S4中，MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶中原料包括明胶、纤维蛋白原、凝血酶和牙髓间充质干细胞的外泌体。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：添加的黑色素细胞，黑色素细胞的比例与工程化外泌体的总量成正比，具体比例为1：1，且黑色素细胞的添加使得外泌体可产生黑色素，传递给周围的角质形成细胞，黑色素停留在这些角质形成细胞的细胞核上起保护作用，防止染色体受到光线辐射受损，此外还可将黑色素细胞替换为塞来昔布，塞来昔布的含量比例与工程化外泌体的总量成正比，具体比例为1：4，其中塞来昔布可直接采用塞来昔布胶囊中粉末状药物使用，使该工程化外泌体具有骨关节治理效果。
附图说明
[0023]图1为本专利技术制备方法流程结构示意图。
具体实施方式
[0024]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]实施例一：
[0026]请参阅图1，本实施例提供一种技术方案：一种工程化外泌体及其制备方法，包括如下步骤：
[0027]S1：率先将外泌体膜蛋LAMP2B与Angiopep
‑
2按比例合适配比，将外泌体膜蛋白LAMP2B与Angiopep
‑
2初步注入至陶瓷容器内，经过静置沉淀后，得到内嵌外泌体膜蛋白
LAMP2B的Angiopep
‑
2；
[0028]S2：将毒性蛋白mRNA通过表达慢病毒感染间充质干细胞，筛选获得稳转细胞系，得到外泌体的运载物，即效应器；
[0029]S3：将MedGroTM免疫细胞培养基重悬PBMC置于80％氧气内的容器内，再加入与edGroTM免疫细胞培养基重悬PBMC1：1配比的缓冲液，在人工手动搅拌棒的搅动下，缓慢的将MedGroTM免疫细胞培养基重悬PBMC与缓冲液充分混合，将MedGroTM免疫细胞培养基固体(沉淀、细胞、活性物质等等)重新悬浮；
[0030]S4：将上述悬浮工艺完毕后的MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶取出，以冷冻方式将稳转细胞系效应器和MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶置于温度为
‑
5摄氏度至
‑
10摄氏度之间的容器内急速冷冻，冷冻时长为10min；
[0031]S5：稳转细胞系效应器和MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶急速冷冻后取出，随后将上述的外泌体膜蛋白LAMP2B与Angiopep...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种工程化外泌体及其制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1：率先将外泌体膜蛋LAMP2B与Angiopep
‑
2按比例合适配比，将外泌体膜蛋白LAMP2B与Angiopep
‑
2初步注入至陶瓷容器内，经过静置沉淀后，得到内嵌外泌体膜蛋白LAMP2B的Angiopep
‑
2；S2：将毒性蛋白mRNA通过表达慢病毒感染间充质干细胞，筛选获得稳转细胞系，得到外泌体的运载物，即效应器；S3：将MedGroTM免疫细胞培养基重悬PBMC置于80％氧气内的容器内，再加入与edGroTM免疫细胞培养基重悬PBMC1：1配比的缓冲液，在人工手动搅拌棒的搅动下，缓慢的将MedGroTM免疫细胞培养基重悬PBMC与缓冲液充分混合，将MedGroTM免疫细胞培养基固体(沉淀、细胞、活性物质等等)重新悬浮；S4：将上述悬浮工艺完毕后的MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶取出，以冷冻方式将稳转细胞系效应器和MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶置于温度为
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5摄氏度至
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10摄氏度之间的容器内急速冷冻，冷冻时长为10min；S5：稳转细胞系效应器和MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶急速冷冻后取出，随后将上述的外泌体膜蛋白LAMP2B与Angiopep
‑
2和稳转细胞系效应器和MedGroTM免疫细胞培养基微凝胶置于常温状态下的卧式离心机内，驱动电机驱动卧式离心机旋转的转速定为300/n，离心搅拌15min后，使用滴管滴加10％的H2O2，滴加的H2O2与Angiopep

【专利技术属性】
技术研发人员：史惠，朱艳华，刘文蕙，
申请(专利权)人：苏州赛誉医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：