一种人纤维蛋白原降解产物DR-70测定试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种人纤维蛋白原降解产物DR

【技术实现步骤摘要】
一种人纤维蛋白原降解产物DR
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70测定试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于生化试剂检测
，具体涉及一种人纤维蛋白原降解产物DR
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70测定试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤已严重威胁人类的健康，既往流行病学资料证实我国恶性肿瘤的死亡率为108.39/10万，占总死亡人数的17.97％，成为第二大致死性疾病。近年来恶性肿瘤的发病率越来越高，严重威胁人类健康，给社会带来巨大的经济负担。癌症若能早期发现，并合理治疗，能显著提高治愈率，改善肿瘤患者的转归及预后。因此血清肿瘤标记物检测成为国内外研究的热点。目前已发现的肿瘤标记物有几十种，如AFP、PSA、CEA等，但这些常见肿瘤标记物仅能发现于50％～70％的恶性肿瘤患者中，假阳性率及假阴性率均较高，真正特异性恶性肿瘤标记物尚未明确。
[0003]其中人纤维蛋白原降解产物DR
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70最早是在正常细胞培养物恶变过程中发现的，后由美国医疗诊断实验室证实其为恶性肿瘤细胞分泌的一类蛋白水解酶，与恶性肿瘤密切相关，是有一定诊断价值的光谱肿瘤标记物，可用于各类肿瘤的筛查和检测。此外，漆等比较DR
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70在诊断各类肿瘤的灵敏度发现，在肝癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、结肠癌中分别为：100％，90％，68.75％，66.67％，62.5％，提示DR
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70在各类肿瘤中具有较高的诊断价值。
[0004]目前，临床检测血清中的DR
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70蛋白的检测方法主要是酶联免疫法，且商品化的产品少。酶联免疫法检测精密度高、灵敏度好，但操作繁琐、检测耗时长、批间差异较大、检测线性范围较窄，且不能满足医院对检测指标的时效性、可重复性及操作简单等特性方面的要求。

技术实现思路

[0005]鉴于此，本专利技术提供一种人纤维蛋白原降解产物DR
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70测定试剂盒及其制备方法。
[0006]为达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]一种人纤维蛋白原降解产物DR
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70测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂M、试剂R1、试剂R2、校准品和质控品；
[0008]其中，所述试剂M含包被链霉亲和素的磁微粒，且磁微粒与链霉亲和素的质量比为3：(0.1～1.0)，磁微粒粒径为0.2～3.0μm；
[0009]所述试剂R1含生物素化的DR
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70单克隆抗体，且生物素与DR
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70单克隆抗体的质量比为(1～5)：1；
[0010]所述试剂R2含标记吖啶酯的DR
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70单克隆抗体，且DR
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70单克隆抗体与吖啶酯质量比例为(2～8)：1；
[0011]所述校准品和质控品为含有不同浓度人纤维蛋白原降解产物DR
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70的抗原稀释液。
[0012]在一些具体实施例中，优选地，所述试剂M中磁微粒与链霉亲和素的质量比为3：
(0.3～1.0)，磁微粒粒径为1.0～3.0μm；
[0013]所述试剂R1中生物素与DR
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70单克隆抗体的质量比为3：1；
[0014]所述试剂R2中DR
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70单克隆抗体与吖啶酯质量比例为(4～8)：1。
[0015]进一步地，所述试剂M、所述试剂R1的组分还包括：pH为5.0～8.0的缓冲液5.0～50.0g/L、无机盐10.0～50.0g/L、表面活性剂1.0～50.0g/L、保护剂100.0～600.0g/L、防腐剂1.0～10.0g/L；
[0016]所述试剂R2的组分还包括：pH为6.0～9.0的缓冲液5.0～50.0g/L、无机盐1.0～30.0g/L、表面活性剂1.0～10.0g/L、保护剂50.0～200.0g/L、防腐剂1.0～2.0g/L。
[0017]进一步地，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、Gly缓冲液、Tris
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HCl缓冲液；
[0018]所述无机盐为NaCl、KCl、KH2PO4、CaCl2、MgCl2中的至少一种；
[0019]所述表面活性剂为吐温
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20、EDTA二钠、甘油、吐温
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80中的至少一种；
[0020]所述保护剂为蔗糖、BSA、酪蛋白中的至少一种；
[0021]所述防腐剂为Proclin系列防腐剂、叠氮化钠、山梨酸钾中的至少一种。
[0022]进一步地，所述试剂盒还包括预激发液、激发液。
[0023]一种上述试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0024]S1、试剂M的制备：
[0025]取磁微粒置于包被缓冲液中，加入EDC，混匀，外加磁场集磁去除上清液，再加入缓冲液，混匀，得活化磁微粒溶液；
[0026]取链霉亲和素置于包被缓冲液中，混匀，加入上述活化磁微粒溶液，混匀，外加磁场集磁去除上清液，加入终止缓冲液Ⅰ，混匀，得包被链霉亲和素的磁微粒溶液；
[0027]将包被链霉亲和素的磁微粒溶液外加磁场集磁去除上清液，加入清洗液，混匀，外加磁场集磁去除上清液，加入保存缓冲液，混匀，即得试剂M；
[0028]其中，包被缓冲液为MES缓冲液；
[0029]终止缓冲液Ⅰ由磷酸盐缓冲液、Gly缓冲液、保护剂、表面活性剂、防腐剂混合制备而成；
[0030]清洗液由磷酸盐缓冲液、无机盐、表面活性剂混合制备而成；
[0031]保存缓冲液由磷酸盐缓冲液、无机盐、表面活性剂、保护剂、防腐剂混合制备而成；
[0032]S2、试剂R1的制备：
[0033]将生物素置于磷酸盐缓冲液中，加入DR
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70单克隆抗体，混匀，于18～30℃避光反应30min；反应结束后进行透析，透析完成后加入甘油，过滤，加入R1稀释液，即得试剂R1；
[0034]其中，R1稀释液由磷酸盐缓冲液、无机盐、表面活性剂、保护剂、防腐剂混合制备而成；
[0035]S3、试剂R2的制备：
[0036]取吖啶酯置于标记缓冲液中，加入DR
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70单克隆抗体，混匀，在18～30℃条件下避光反应30min；反应结束后加入终止缓冲液Ⅱ，混匀，在18～30℃条件下避光反应30min；将反应产物进行透析，透析完成后加入甘油，过滤，加入R2稀释液，即得试剂R2；
[0037]其中，标记缓冲液由磷酸盐缓冲液、无机盐混合制备而成；
[0038]终止缓冲液Ⅱ由磷酸盐缓冲液、Gly缓冲液、无机盐混合制备而成；
[0039]R2稀释液由磷酸盐缓冲液、无机盐、表面活性剂、保护剂、防腐剂混合制备而成。
[0040]进一步地，步骤S1中所述EDC溶液浓度为1mg/mL。
[0041]进一步地，步骤S2中所述甘油加入量与透析后溶液体积比为0.5：1；
[0042]步骤S3中所述甘油加入本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人纤维蛋白原降解产物DR
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70测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：试剂M、试剂R1、试剂R2、校准品和质控品；其中，所述试剂M含包被链霉亲和素的磁微粒，且磁微粒与链霉亲和素的质量比为3：(0.1～1.0)，磁微粒粒径为0.2～3.0μm；所述试剂R1含生物素化的DR
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70单克隆抗体，且生物素与DR
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70单克隆抗体的质量比为(1～5)：1；所述试剂R2含标记吖啶酯的DR
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70单克隆抗体，且DR
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70单克隆抗体与吖啶酯质量比例为(2～8)：1；所述校准品和质控品为含有不同浓度人纤维蛋白原降解产物DR
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70的抗原稀释液。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂M中磁微粒与链霉亲和素的质量比为3：(0.3～1.0)，磁微粒粒径为1.0～3.0μm；所述试剂R1中生物素与DR
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70单克隆抗体的质量比为3：1；所述试剂R2中DR
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70单克隆抗体与吖啶酯质量比例为(4～8)：1。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂M、所述试剂R1的组分还包括：pH为5.0～8.0的缓冲液5.0～50.0g/L、无机盐10.0～50.0g/L、表面活性剂1.0～50.0g/L、保护剂100.0～600.0g/L、防腐剂1.0～10.0g/L；所述试剂R2的组分还包括：pH为6.0～9.0的缓冲液5.0～50.0g/L、无机盐1.0～30.0g/L、表面活性剂1.0～10.0g/L、保护剂50.0～200.0g/L、防腐剂1.0～2.0g/L。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、Gly缓冲液、Tris
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HCl缓冲液；所述无机盐为NaCl、KCl、KH2PO4、CaCl2、MgCl2中的至少一种；所述表面活性剂为吐温
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20、EDTA二钠、甘油、吐温
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80中的至少一种；所述保护剂为蔗糖、BSA、酪蛋白中的至少一种；所述防腐剂为Proclin系列防腐剂、叠氮化钠、山梨酸钾中的至少一种。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括预激发液、激发液。6.一种如权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：李海军，吴盼，
申请(专利权)人：湖南菲科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：