一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗及其制备方法，包含负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针针体和底座，其中，狂犬病纳米疫苗是由灭活狂犬病病毒与经由氟化改性高分子聚合物进行自组装制得的

【技术实现步骤摘要】
一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗及其制备方法
。

技术介绍

[0002]狂犬病是由狂犬病病毒（
RABV
）引起的人畜共患传染病，其典型临床症状为兴奋狂躁
、
神志紊乱
、
呼吸系统麻痹及多循环系统衰竭等，一旦病毒到达中枢神经系统并引起临床症状，病死率几乎
100%。
狂犬病给人民生活和社会安定造成严重的威胁，全球每年有近6万人死于狂犬病，其中大部分发生在非洲
、
亚洲和拉丁美洲的发展中国家
。
目前，针对狂犬病的防控措施还是以疫苗为主，尚无有效的治疗手段
。
[0003]世界卫生组织推荐的狂犬病暴露后预防措施包括：（1）弱碱性肥皂水清洗伤口，并局部消毒；（2）第一时间进行4‑5针的狂犬病疫苗周期免疫，严重者需要配合注射免疫球蛋白
。
对于暴露前预防，则需要接种3针剂疫苗
。
[0004]对于上述多剂量狂犬病疫苗接种策略，不仅增加了接种费用，大大限制了狂犬病疫苗在大多数不发达国家的接种覆盖率；并且肌肉注射所使用的一次性注射器对于部分人群来说是不容易被接受的，因此产生的生物废物也存在二次感染的风险
。
因此，开发更方便
、
成本更低
、
更高效的新型狂犬病疫苗是研究热点
。
[0005]迄今为止，包括狂犬病疫苗在内的绝大多数市售人用疫苗是通过肌肉注射免疫，注射之后的疫苗被肌肉中的血管吸收扩散，引起后续的免疫反应
。
近年来，对于免疫途径影响免疫效果的研究表明，皮内免疫具有得天独厚的优势
。
皮肤是人体面积最大的器官，通过角质层的物理隔绝方式保护机体免受微生物和紫外线等有害物质的侵害
。
同时，皮肤中含有丰富的抗原呈递细胞和相关免疫细胞，组成了严密的免疫调节网络，能够对经皮注射的疫苗产生的更强烈的免疫反应
。
[0006]微针是近些年被广泛研究的新型皮内给药系统，由多个微米大小的针尖和底座组成
。
根据应用需求，微针的尺寸
、
形状以及材质等都能被设计
。
微针可以直接穿透角质层，避免接触毛细血管和神经末梢，并将药物直接释放到真皮中，这对于激活获得性免疫应答至关重要
。
[0007]可溶性微针是一类由透明质酸
、
聚乳酸
‑
羟基乙酸等可溶性聚合物制备而成微针，能够在组织积液中缓慢溶解释放内容物
。
这类微针普遍具有良好的生物相容性，且不产生生物废物
。
[0008]但对于狂犬病抗原而言，需要低温存放才能保证其免疫原性，因此微针的制备过程可能会对抗原的糖蛋白造成损伤
。
为了解决抗原损伤和免疫原性降低的问题，纳米技术被应用于功能化疫苗领域
。
与单纯抗原相比，纳米疫苗不仅能够包裹抗原，避免其降解；还能促进免疫细胞摄取
。
[0009]因此，解决狂犬病抗原在微针制备过程中可能造成免疫原性降低以及新型免疫策略的联合应用如何发挥最优化的免疫效果是亟待解决的问题，因此提出一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗及其制备方法
。

技术实现思路

[0010]为解决上述存在的问题，本专利技术提供一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗及其制备方法
。
具体技术方案如下：
1.
一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗，包含负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针针体和底座，其中，狂犬病纳米疫苗是由灭活狂犬病病毒与经由氟化改性高分子聚合物进行自组装制得的
。
[0011]进一步优选的，狂犬病纳米疫苗中灭活狂犬病病毒与经由氟化改性高分子聚合物的质量比为
1:2
，所述狂犬病纳米疫苗中灭活狂犬病病毒的负载率为
42%~46%。
[0012]进一步优选的，负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针针体由
10
×
10
的单针阵列组成，单针针体高为
800
μ
m
，底部半径为
150
μ
m
，尖端半径为
10
μ
m
，负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针针体中灭活狂犬病病毒的净负载量为
25~30 μ
g/
贴
。
[0013]进一步优选的，负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针针体以及底座的基质均为分子量为
40~100 Kda、
质量分数为
7%
的透明质酸水溶液
。
[0014]一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗的制备方法，包括以下步骤：步骤
S1、
狂犬病纳米疫苗的自组装；步骤
S11、
改性高分子聚合物的制备，包括以下步骤：进一步优选的，步骤
S11a. 聚乙烯亚胺的溶解：将
462 mg
聚乙烯亚胺溶解在
50 mL
甲醇中，形成聚乙烯亚胺溶液；步骤
S11b. 加入氟烷烃：向聚乙烯亚胺溶液中加入
250 mg
氟烷烃，并在室温下进行搅拌反应，反应时间为
48
小时，制得混合产物；步骤
S11c. 混合产物的透析纯化：将步骤
S11b
中的混合产物经甲醇和超纯水以
1:1
的体积比进行透析纯化；步骤
S11d. 冻干处理：将经过步骤
S11c
中经透析纯化的改性聚合物置于真空冷冻干燥机中进行冻干处理，冻干处理的温度为
‑
40~
‑
60 ℃
，真空度为
5~15 Pa
，干燥时间为
24~48
小时
。
[0015]进一步优选的，步骤
S12
：灭活狂犬病病毒的制备，包括以下步骤，步骤
S12a. 收集并处理感染病毒的
BSR
细胞上清液：将感染狂犬病病毒的
BSR
细胞上清液进行离心，转速设定为
10000 rpm
，以去除细胞碎片，得到处理后的上清液；步骤
S12b. 灭活处理：在温度为
4℃
的条件下，将步骤
S12a
中的上清液与
β
‑
丙内酯进行灭活处理，灭活时间为
24
小时；随后，在温度为
37℃
下的条件下继续处理2小时，以水解多余的
β
‑
丙内酯；步骤
S12c. 上清液超离心：经过灭活处理的上清液在温度为
4℃
下进行超高速离心，转速设定为
30000 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗，其特征在于：包含负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针针体和底座，其中，狂犬病纳米疫苗是由灭活狂犬病病毒与经由氟化改性高分子聚合物进行自组装制得的
。2.
根据权利要求1所述的一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗，其特征在于：狂犬病纳米疫苗中灭活狂犬病病毒与经由氟化改性高分子聚合物的质量比为
1:2
，所述狂犬病纳米疫苗中灭活狂犬病病毒的负载率为
42%~46%。3.
根据权利要求1所述的一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗，其特征在于：负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针针体由
10
×
10
的单针阵列组成，单针针体高为
800
μ
m
，底部半径为
150
μ
m
，尖端半径为
10
μ
m
，负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针针体中灭活狂犬病病毒的净负载量为
25~30 μ
g/
贴
。4.
根据权利要求3所述的一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗，其特征在于：负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针针体以及底座的基质均为分子量为
40~100 Kda、
质量分数为
7%
的透明质酸水溶液
。5.
根据权利要求1所述的一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤
S1、
狂犬病纳米疫苗的自组装；步骤
S11、
改性高分子聚合物的制备；步骤
S12
：灭活狂犬病病毒的制备；步骤
S13、
狂犬病纳米疫苗的制备；步骤
S2
：可溶性微针针体的制备；步骤
S3
：微针疫苗的制备
。6.
根据权利要求5所述的一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗的制备方法，其特征在于：步骤
S11、
改性高分子聚合物的制备，包括以下步骤：步骤
S11a. 聚乙烯亚胺的溶解：将
462 mg
聚乙烯亚胺溶解在
50 mL
甲醇中，形成聚乙烯亚胺溶液；步骤
S11b. 加入氟烷烃：向聚乙烯亚胺溶液中加入
250 mg
氟烷烃，并在室温下进行搅拌反应，反应时间为
48
小时，制得混合产物；步骤
S11c. 混合产物的透析纯化：将步骤
S11b
中的混合产物经甲醇和超纯水以
1:1
的体积比进行透析纯化；步骤
S11d. 冻干处理：将经过步骤
S11c
中经透析纯化的改性聚合物置于真空冷冻干燥机中进行冻干处理，冻干处理的温度为
‑
40~
‑
60 ℃
，真空度为
5~15 Pa
，干燥时间为
24~48
小时
。7.
根据权利要求5所述的一种负载狂犬病纳米疫苗的可溶性微针疫苗的制备方法，其特征在于：步骤
S12
：灭活狂犬病病毒的制备，包括以下步骤，步骤
S12a. 收集并处理感染病毒的
BSR
细胞上清液：将感染狂犬病病毒的
BSR
细胞上清液进行离心，转速设定为
10000 rpm
，以去除细胞碎片，得到处理后的上清液；步骤
S12b. 灭活处理：在温度为
4℃
的条件下，将步骤
S12a
中的上清液与
β
...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩鹤友，赵凌，邓嘉敏，汪宗梅，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：