一种用于烟碱成瘾性基因多态性检测的引物探针组制造技术

本发明专利技术公开了一种用于烟碱成瘾性相关基因多态性检测的引物探针组

【技术实现步骤摘要】
一种用于烟碱成瘾性基因多态性检测的引物探针组、试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及基因多态性检测
，尤其涉及一种用于烟碱成瘾性基因多态性检测的引物探针组
、
试剂盒及检测方法
。

技术介绍

[0002]吸烟有害健康，个体之所以持续吸烟，主要是为了维持血液中的烟碱浓度，保证大脑对于烟碱的需求，而血液中烟碱浓度则取决于个体的烟碱代谢速率
。
烟碱是烟草制品中主要的成瘾性物质，是一种具有精神活性的物质，在烟草成瘾中起着关键作用，主要表现在对情绪和认知功能方面的影响
。
人体中烟碱药代动力学表现出极大的个体和种族差异，主要归因于烟碱代谢相关基因的多态性
。
揭示这种多态性对阐明个体对烟碱的耐受性
、
烟碱或吸烟相关疾病的易感性及烟碱或吸烟相关症状临床表现的多样性具有重要意义
。
[0003]人体中烟碱经多种代谢途径进行广泛地代谢，包括碳氧化代谢途径
、
氮氧化
、
醛氧化和葡萄糖苷酸化作用等代谢途径
。CYP2A6
是烟碱的主要代谢酶，人体摄入烟碱的
70
％
‑
80
％经由
CYP2A6
通过
C
‑
氧化途径代谢为可替宁，并进一步将可替宁代谢为反
‑3‑
羟基可替宁
。CYP2A6
基因编码区域
rs28399433
的基因多态性被认为可能与吸烟行为有着密切的联系
。
有研究发现吸烟与大脑中
CYP2B6
的高表达有关，
CYP2B6
可能具有调节局部脑区烟碱药理学的潜能
。CYP2B6
通过
C
‑
氧化途径代谢烟碱，
CYP2B6
基因型在不同性别和种族间也存在较大差异，
CYP2B6
基因编码区域
rs12721655、rs2279343
和
rs3745274
的基因多态性烟碱代谢能力有关
。
人
15
号染色体上的
CHRNA5
‑
CHRNA3
‑
CHRNB4
基因簇中的变异与尼古丁依赖性存在显著关联
。CHRNA5
基因编码区域
rs55853698
基因多态性位点，这个位点的变异能够影响人体对烟碱的依耐性
。CHRNA3
基因编码区域
rs1051730
基因多态性的生物学作用机制仍不明确，但近年来的研究发现，该位点与吸烟行为和烟碱依赖有关
。CHRNB4 5
’
端下基因编码区
rs11638372
至少一种吸烟相关表型的显著关联
。
单胺氧化酶
A(MAOA)
酶代谢单胺神经递质，如多巴胺
、
血清素和去甲肾上腺素，其遗传多态性
(rs1137070)
影响其活性水平并与吸烟行为相关
。
[0004]目前检测
SNP
的方法包括测序法
、ARMS
法
、
探针法
、
高分辨溶解曲线
、
微矩阵基因分型法和二代测序等
。
测序法对
SNP
检测灵敏度要低于
AMRS
法；
MGB
探针法对
SNP
检测，在研发过程中需要对
MGB
探针不断地优化且一个
SNP
需要2个
MGB
探针，研发成本高；高分辨溶解曲线技术要求仪器两孔温差需小于
0.1℃
，荧光染料要求高，不然很难进行
SNP
分析；二代测序需要的检测仪器要求高
、
检测成本高
、
检测过程复杂且检测成本高
。
[0005]公布号为
CN114277118A
的中国专利申请文献，公开了一种基于烟碱成瘾相关
SNPs
的烟碱成瘾程度或易感性的判定方法，包括以下步骤：步骤一，受试者唾液样本采集；步骤二，唾液样本基因组
DNA
的提取；步骤三，基因分型检测方法；步骤四，烟碱成瘾程度或易感性判定
。
该方法可用于快速
、
便捷且相对准确地判定吸烟者的成瘾程度或成瘾易感性
。
但该专利并不涉及对于烟碱成瘾性基因多态性的检测
。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题在于如何解决现有检测技术中所存在的特异性差
、
灵敏度低
、
检测效率低的问题
。
[0007]本专利技术通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：
[0008]本专利技术的具体技术方案说明如下：
[0009]本专利技术的第一方面提出一种用于烟碱成瘾性基因多态性检测的引物探针组，包括以下任意一种或多种：
[0010]用于检测烟碱成瘾性
rs12721655
位点的第一引物探针组，包括如
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:9
所示的第一上游引物
、
如
SEQ ID NO:5
所示的第一下游引物，和如
SEQ ID NO:25
所示的第一探针；
[0011]用于检测烟碱成瘾性
rs55853698
位点的第二引物探针组，包括如
SEQ ID NO:2
或
SEQ ID NO:10
所示的第二上游引物
、
如
SEQ ID NO:6
所示的第二下游引物，和如
SEQ ID NO:26
所示的第二探针；
[0012]用于检测烟碱成瘾性
rs1051730
位点的第三引物探针组，包括如
SEQ ID NO:3
或
SEQ ID NO:11
所示的第三上游引物
、
如
SEQ ID NO:7
所示的第三下游引物，和如
SEQ ID NO:27
所示的第三探针；
[0013]用于检测烟碱成瘾性
rs1137070
位点的第四引物探针组，包括如
SEQ ID NO:4
或
SEQ ID NO:12
所示的第四上游引物
、
如
SEQ ID NO:8
所示的第四下游引物，和如
SEQ ID NO:28
所示的第四探针；
[0014]用于检测烟碱成瘾性...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于烟碱成瘾性基因多态性检测的引物探针组，其特征在于，包括以下任意一种或多种：用于检测烟碱成瘾性
rs12721655
位点的第一引物探针组，包括如
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:9
所示的第一上游引物
、
如
SEQ ID NO:5
所示的第一下游引物，和如
SEQ ID NO:25
所示的第一探针；用于检测烟碱成瘾性
rs55853698
位点的第二引物探针组，包括如
SEQ ID NO:2
或
SEQ ID NO:10
所示的第二上游引物
、
如
SEQ ID NO:6
所示的第二下游引物，和如
SEQ ID NO:26
所示的第二探针；用于检测烟碱成瘾性
rs1051730
位点的第三引物探针组，包括如
SEQ ID NO:3
或
SEQ ID NO:11
所示的第三上游引物
、
如
SEQ ID NO:7
所示的第三下游引物，和如
SEQ ID NO:27
所示的第三探针；用于检测烟碱成瘾性
rs1137070
位点的第四引物探针组，包括如
SEQ ID NO:4
或
SEQ ID NO:12
所示的第四上游引物
、
如
SEQ ID NO:8
所示的第四下游引物，和如
SEQ ID NO:28
所示的第四探针；用于检测烟碱成瘾性
rs2279343
位点的第五引物探针组，包括如
SEQ ID NO:13
或
SEQ ID NO:21
所示的第五上游引物
、
如
SEQ ID NO:17
所示的第五下游引物，和如
SEQ ID NO:29
所示的第五探针；用于检测烟碱成瘾性
rs28399433
位点的第六引物探针组，包括如
SEQ ID NO:14
或
SEQ ID NO:22
所示的第六上游引物
、
如
SEQ ID NO:18
所示的第六下游引物，和如
SEQ ID NO:30
所示的第六探针；用于检测烟碱成瘾性
rs3745274
位点的第七引物探针组，包括如
SEQ ID NO:15
或
SEQ ID NO:23
所示的第七上游引物
、
如
SEQ ID NO:19
所示的第七下游引物，和如
SEQ ID NO:31
所示的第七探针；用于检测烟碱成瘾性
rs11638372
位点的第八引物探针组，包括如
SEQ ID NO:16
或
SEQ ID NO:24
所示的第八上游引物
、
如

【专利技术属性】
技术研发人员：王红娟，陈欢，朱灵，朱灿灿，付亚宁，侯宏卫，张龙，崔俊生，田雨闪，刘勇，邓国庆，韩书磊，李晓，
申请(专利权)人：中国科学院合肥物质科学研究院，
类型：发明
国别省市：