纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物测定试剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及体外诊断技术领域，具体涉及纤溶酶

【技术实现步骤摘要】
纤溶酶
‑
α
2纤溶酶抑制剂复合物测定试剂及其应用


[0001]本专利技术涉及体外诊断
，具体涉及纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物测定试剂及其应用。

技术介绍

[0002]纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物(Plasmin
‑
α2
‑
plasmin inhibitor complex，PIC)是纤溶酶和α2纤溶酶抑制剂以1：1结合形成的复合物，是调节人体纤溶过程和凝血过程的关键因子。
[0003]纤溶酶(Plasmin)是纤溶酶原(Plasminogen,Plg)被组织型纤溶酶原激活剂(tissue
‑
type plasminogenactivator，tPA)或尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase
‑
type plasminogen activator，uPA)水解形成的，是纤维蛋白水解必须的丝氨酸蛋白酶。纤溶酶的主要抑制剂是α2纤溶酶抑制剂。
[0004]α2纤溶酶抑制剂(α2
‑
plasmin inhibitor，α2
‑
PI)，又称抗纤溶酶(α2
‑
antiplasmin，α2
‑
AP)，是在肝脏中合成的一种糖蛋白，人α2纤溶酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶，可灭活纤溶酶。
[0005]在血液循环中，灭活纤溶酶的反应可分为2个步骤：
①
α2
‑
PI羧基端的辅助赖氨酸结合部位中赖氨酸452与纤溶酶A链的K1区结合，形成一种可逆的、但无活性的PIC。
②
α2
‑
PI精氨酸354甲硫氨酸355之间的肽键在纤溶酶的作用下断裂，在羧基端释放出一个分子量为11KD的肽段，α2
‑
PI的精氨酸354与纤溶酶的丝氨酸740以共价键结合，形成一种新的稳定的复合物，分子量为150KD，不具纤溶酶活性。
[0006]正常情况下，血液循环中的纤溶酶很快被α2
‑
PI结合，失去活性。当血管内皮细胞受到损伤后，血管中出现的纤维蛋白与血小板作用产生血凝块，α2
‑
PI可直接与纤溶酶结合，也可通过F
Ⅷ
与纤维蛋白交叉连接，再与纤溶酶结合形成PIC，抑制纤溶酶活性，使凝块不被溶解，形成血栓。
[0007]PIC诊断结果在出血、血栓形成的诊断以血栓治疗等方面临床价值较高，与TAT、TM、tPAI
·
C联合检测能提升静脉血栓栓塞等的预警效能。
[0008]目前，市场上PIC检测使用的多为酶标板，适用于全自动检测分析仪(化学发光法)的检测纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物的试剂种类较少，操作步骤较多，耗时长。随着该诊断项目越来越受到重视，市场需求也在急剧增加。

技术实现思路

[0009]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物测定试剂及其应用，本专利技术提供的纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物测定试剂准确度高、重复性好，适用于全自动检测分析仪(化学发光法)，操作简单。
[0010]本专利技术提供了试剂组合，包括磁微粒混悬液和标记抗体混合液；
[0011]所述磁微粒混悬液包括纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物抗体包被的磁微粒和磁微
粒缓冲液，所述磁微粒缓冲液包括缓冲体系A、稳定剂A和防腐剂A；
[0012]所述标记抗体混合液包括示踪标记物标记的纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物抗体和标记抗体缓冲液，所述标记抗体缓冲液，所述标记抗体缓冲液包括缓冲体系B、稳定剂B和防腐剂B；
[0013]其中，所述缓冲体系A、B独立地选自MOPS、Tris
‑
HCl、MES、PBS、HEPES、甘氨酸和硼酸中的至少一种；
[0014]所述稳定剂A、B独立地选自氯化钠、牛血清白蛋白、多羟基化合物、非离子型高分子表面活性剂中的至少一种，所述多羟基化合物包括三羟甲基乙烷、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、海藻酸钠、甘油、甘露醇和山梨糖醇中的至少一种，所述非离子型高分子表面活性剂包括壬基环己醇聚氧乙烯醚、异构十三醇聚氧乙烯醚、十二醇聚氧乙烯醚、仲醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮K30和聚环氧乙烷
‑
聚环氧丙烷中的至少一种；
[0015]所述防腐剂A、B独立地选自NaN3、Proclin300和Proclin600中的至少一种。
[0016]与其他试剂组合相比，本专利技术提供的试剂组合，磁微粒缓冲液与标记抗体缓冲液中多羟基化合物与非离子型高分子表面活性剂中各组分具有良好的悬浮、增溶、分散等性能，防止抗体聚集沉淀，同时由于所述试剂组合各组分之间配合紧密，因而对于纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物的捕捉准确度高、重复性好，从而实现更好的技术效果。
[0017]在一些实施例中，所述磁微粒混悬液包括5～10g/L纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物抗体包被的磁微粒、12.114g/L缓冲体系A、25.884～126.844g/L稳定剂A和0.01～0.1g/L防腐剂A；
[0018]所述标记抗体混合液包括0.5～1mg/L示踪标记物标记的纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物抗体、13～13.58g/L缓冲体系B、14.766～26.38g/L稳定剂B和0.01～0.1g/L防腐剂B。
[0019]在上述浓度范围内，所述磁微粒混悬液与所述标记抗体混合液中各组分之间配合紧密，对于抗体的兼容性强，所述试剂组合对纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物的捕捉准确度高、重复性好，从而实现更好的技术效果。
[0020]优选的，所述磁微粒包括氨基磁微粒或羧基磁微粒，所述示踪标记物包括辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。
[0021]优选的，所述缓冲体系A优选为Tris
‑
HCl，所述缓冲体系B优选为PBS。
[0022]优选的，所述稳定剂A包括氯化钠、牛血清白蛋白、羟丙基甲基纤维素、壬基环己醇聚氧乙烯醚和聚乙烯吡咯烷酮K30，所述稳定剂B包括氯化钠、牛血清白蛋白、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮K30。
[0023]实验表明，采用上述组分的所述试剂组合对于纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物的捕捉灵敏度更高、特异性更强、重复性更好，从而实现更好的技术效果。
[0024]优选的，所述防腐剂A和所述防腐剂B优选为NaN3。
[0025]实验表明，采用上述组分的所述试剂组合对于纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物的捕捉灵敏度更高、特异性更强、重复性更好，从而实现更好的技术效果。
[0026]在一些具体实施例中，所述磁微粒混悬液包括10g/L纤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.试剂组合，其特征在于，包括磁微粒混悬液和标记抗体混合液；所述磁微粒混悬液包括纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物抗体包被的磁微粒和磁微粒缓冲液，所述磁微粒缓冲液包括缓冲体系A、稳定剂A和防腐剂A；所述标记抗体混合液包括示踪标记物标记的纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物抗体和标记抗体缓冲液，所述标记抗体缓冲液，所述标记抗体缓冲液包括缓冲体系B、稳定剂B和防腐剂B；其中，所述缓冲体系A、B独立地选自MOPS、Tris
‑
HCl、MES、PBS、HEPES、甘氨酸和硼酸中的至少一种；所述稳定剂A、B独立地选自氯化钠、牛血清白蛋白、多羟基化合物、非离子型高分子表面活性剂中的至少一种，所述多羟基化合物包括三羟甲基乙烷、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、海藻酸钠、甘油、甘露醇和山梨糖醇中的至少一种，所述非离子型高分子表面活性剂包括壬基环己醇聚氧乙烯醚、异构十三醇聚氧乙烯醚、十二醇聚氧乙烯醚、仲醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮K30和聚环氧乙烷
‑
聚环氧丙烷中的至少一种；所述防腐剂A、B独立地选自NaN3、Proclin300和Proclin600中的至少一种。2.根据权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述磁微粒混悬液包括5～10g/L纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物抗体包被的磁微粒、12.114g/L缓冲体系A、25.884～126.844g/L稳定剂A和0.01～0.1g/L防腐剂A；所述标记抗体混合液包括0.5～1mg/L示踪标记物标记的纤溶酶
‑
α2纤溶酶抑制剂复合物抗体、13～13.58g/L缓冲体系B、14.766～26.38g/L稳定剂B和0.01～0.1g/L防腐剂B。3.根据权利要求1或2所述的试剂组合，其特征在于，所述磁微粒包括氨基磁微粒或羧基磁微粒，所述示踪标记物包括辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。4.根据权利要求1～3任一项所述的试剂组合，其特征在于，所述缓冲体系A为Tris
‑
HCl，所述缓冲体系B为PBS。5.根据权利要求1～4任一项所述的试剂组合，其特征在于，所述稳定剂A包括氯化钠、牛血清白蛋白、羟丙基...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢永华，徐灵，张宇亮，樊曼曼，
申请(专利权)人：上海中冶医院，
类型：发明
国别省市：