一种鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别指一种鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法以及在微生物功能研究中的应用

【技术实现步骤摘要】
一种鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种大批量培养无菌鳞翅目昆虫的培养方法，特别是指一种鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法和应用
。

技术介绍

[0002]大多数鳞翅目昆虫为重要的农林害虫，其幼虫可取食植物叶片，形成孔洞或缺刻甚至吃光全部叶片，从而影响植物光合作用进行；或钻蛀入植物茎秆
、
根部或果实，形成隧道
、
孔洞，阻碍植株中养分和水分输送，从而造成植株枯萎
、
倒伏
、
死亡等
。
加之鳞翅目幼虫为害造成的伤口极易遭受植物病原真菌侵染，从而导致植物真菌病害生加重，二者复合侵染严重影响农林作物安全生产
。
如玉米上重要鳞翅目害虫桃蛀螟
Conogethes punctiferalis、
草地贪夜蛾
Spodoptera frugiperda、
棉铃虫
Helicoverpa armigera
和黏虫
Mythimna separata
为害常引起玉米穗腐病菌侵染加剧，二者复合为害致使单穗产量损失率最高可达
33.09%
，严重影响玉米产量和品质
。
[0003]目前农林生产上针对鳞翅目害虫的防治主要以化学防治为主，但由于多数鳞翅目幼虫具有钻蛀习性，加之其适应性强
、
抗药性进化速度快，对常用化学杀虫剂具有一定程度抗性，因此防治效果往往不是很理想，迫切需要寻求新的害虫防治方法，如基于昆虫共生微生物来调控靶标害虫生长发育
、
行为或抗药性进化等
。
无菌昆虫体系是研究微生物在昆虫生长发育
、
行为或抗药性中作用必不可少的重要环节
。
但纵观以往资料，关于鳞翅昆虫无菌体系建立以及在微生物功能研究中应用的相关案例较少
。
郑州伊美诺生物技术有限公司专利申请（
CN211153408U
）公开了一种小型肉体昆虫无菌养殖盒，其所述养殖盒承载部网孔直径为
1.5
‑
2 cm
，对于农林上为害的重要鳞翅目害虫3龄前幼虫来说孔径过大，并不适用于鳞翅目无菌幼虫饲养，且饲养所得昆虫是否为无菌并未验证；专利
CN111248154A
公开了一种利用组培无菌植株饲养昆虫以获得无菌昆虫的方法，需要培育无菌茶树苗用于饲养昆虫，工作量大且步骤繁琐；专利
CN114766433A
公开了通过将饲养昆虫与寄主植物或饲料一起利用钴
‑
60(
60
Co)
进行
25KGy
照射以获得无菌昆虫的方法，其中没考虑射线对昆虫生长发育的影响，且过程中需要定期添加水源以及更换容器，不能用于大批量培养无菌昆虫
。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术问题，本专利技术提出一种鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法和应用
。
[0005]本专利技术的技术方案是这样实现的：一种鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法，步骤为：（1）收集鳞翅目雌成虫交配后产下的卵粒，置于过滤装置经无菌水重复清洗，然后再用消毒液处理，最后再用无菌水重复清洗，得消毒后的卵；（2）将步骤（1）的消毒后的卵置于无菌环境中进行气候模拟培养，待孵化后所得无菌鳞翅目幼虫与无菌饲料共同进行气候模拟培养，即得鳞翅目昆虫无菌体系
。
[0006]上述步骤（1）卵粒为雌成虫交配后6‑
24
小时内产下的卵粒
。
[0007]上述过滤装置的细度为
50
‑
100
目
。
[0008]上述消毒液为次氯酸钠和甲醛的无菌水溶液，其中次氯酸钠和甲醛按照体积比
3%
‑
10%
：
5%
‑
15%
溶解在无菌水中
。
[0009]进一步的，无菌水重复清洗时单次冲洗时间为1‑
10min
；消毒液处理的时间为3‑
25min。
[0010]上述步骤（2）中气候模拟培养的条件为：温度
25
‑
28
°
C
，相对湿度
60%
‑
80%
，光周期
L:D=14:10
‑
16:8。
[0011]上述无菌饲料的制备方法为：将粉碎后的鲜玉米籽粒与酵母粉
、
麦胚
、
琼脂粉和无菌水混匀后，经高压灭菌制得的
。
[0012]上述粉碎后的鲜玉米籽粒
、
酵母粉
、
麦胚
、
琼脂粉和无菌水的质量比为
150
‑
200:20
‑
44:40
‑
65:13
‑
25:550
‑
750。
[0013]上述高压灭菌的温度为
121℃、
时间为
20
‑
35min。
[0014]下面举例说明，本申请的方法的实施步骤：
a. 收集鳞翅目雌成虫交配后产下的6‑
24
小时以内的卵粒，该时间段内卵粒表面及胚胎内部微生物较少；将收集的卵粒置于过滤装置，用无菌水清洗三次，每次1‑
10 min
；接着用特定消毒液处理3‑
25 min
；最后用无菌水清洗卵三次，每次1‑
10min
；消毒液组分包括次氯酸钠和甲醛，二者按照体积比（
3%
‑
10%
）：（
5%
‑
15%
）溶解在无菌水中；过滤装置的结构为在培养皿的开口面附上纱布，其中纱布的细度为
50
‑
100
目
。
[0015]b. 消毒后的卵密封在无菌培养皿中，放在无菌气候箱进行培养，培养箱环境条件为：温度
25
‑
28℃
，相对湿度
60%
‑
80%
，光周期
L:D=14:10
‑
16:8
；
c. 配置无菌饲料，制备方法为：将鲜食玉米籽粒用搅拌机搅拌碎后，取
150
‑
200
份与
20
‑
44
份酵母粉
、40
‑
65
份麦胚
、13
‑
25
份琼脂粉和
550
‑
750
份无菌水混匀后，在高压灭菌锅
121℃
灭菌
20
‑
35 min。
灭菌后的饲料分装到无菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法，其特征在于，步骤为：（1）收集鳞翅目雌成虫交配后产下的卵粒，置于过滤装置经无菌水重复清洗，然后再用消毒液处理，最后再用无菌水重复清洗，得消毒后的卵；（2）将步骤（1）的消毒后的卵置于无菌环境中进行气候模拟培养，待孵化后所得无菌鳞翅目幼虫与无菌饲料共同进行气候模拟培养，即得鳞翅目昆虫无菌体系
。2.
根据权利要求1所述的鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法，其特征在于：所述步骤（1）卵粒为雌成虫交配后6‑
24
小时内产下的卵粒
。3.
根据权利要求2所述的鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法，其特征在于：所述过滤装置的细度为
50
‑
100
目
。4.
根据权利要求3所述的鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法，其特征在于：所述消毒液为次氯酸钠和甲醛的无菌水溶液，其中次氯酸钠和甲醛按照体积比
3%
‑
10%
：
5%
‑
15%
溶解在无菌水中
。5.
根据权利要求1‑4任一项所述的鳞翅目昆虫无菌体系的建立方法，其特征在于，所述步骤（2）中气候模拟培养的条件为：温度
25
‑
28
°
C
，相对湿度
60%
‑
80%
，光周期
L:D=14:10
‑
16:8。6.
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵曼，任凯杰，张利娟，郭线茹，李为争，刘艳敏，王高平，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：