一种人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞株及其构建方法技术

本发明专利技术提供了一种人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞株，其名称为人结肠腺癌瑞戈非尼耐药株

【技术实现步骤摘要】
一种人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞株及其构建方法


[0001]本专利技术涉及一种耐药细胞模型，特别涉及一种人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞株及其构建方法
。

技术介绍

[0002]瑞戈非尼
(Regorafenib)
属于多靶点激酶抑制剂，主要作用于
VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、TIE
‑
2、BRAF、KIT、RET、PDGFR
和
FGFR。CONCURⅢ期临床试验表明，瑞戈非尼可显著延长亚洲转移性结直肠癌
(metastatic colorectal cancer
，
mCRC)
患者的总体生存率
(OS)。2017
年，瑞戈非尼获得国内
CFDA
批准，成为首个治疗
mCRC
的口服靶向药物
。
目前，瑞戈非尼已被纳入多项国内与国际治疗指南，被定位为
mCRC
的三线标准治疗药物
。
截止
2023
年，瑞戈非尼进入国内市场已接近6年，在延长
mCRC
患者
OS
的同时，也逐步将这批患者引入到了耐药的困境
。
每一次新药的横空出世，都将掀起短暂的狂热，之后便是无尽
、
无奈的获得性耐药，这是每个药物
、
也是每个患者都无法摆脱的宿命
。
[0003]关于耐药机制的研究，主要依托体外耐药细胞模型与体内/>PDX
模型
。
后者需要临床耐药样本
、
周期较长，且由于个体差异大，所得模型的耐药机制也相对有限
。
而体外耐药株几乎不存在这些问题，是目前耐药机制研究的主流模型
。SW480
属于人结肠腺癌细胞，广泛用于结直肠癌发生发展的机制研究
。
目前已有研究应用该细胞构建瑞戈非尼耐药株，该研究利用含有瑞戈非尼的培养液诱导细胞产生耐药性，其耐药指数
(resistance index
，
RI)
为
1.82
，构建周期为6个月
。
耐药指数需要进一步提升，构建周期需要进一步缩短
。

技术实现思路

[0004]有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术提供了一种人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞株及其构建方法，要解决的技术问题是进一步提升耐药指数，进一步缩短构建周期
。
[0005]为解决上述问题，本专利技术采取的技术方案是：一种人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞株，其名称为人结肠腺癌瑞戈非尼耐药株
SW480
‑
R
，保藏编号为
CCTCC NO
：
C2023193
，保藏日期为
2023
年7月
18
日，保藏地点为中国典型培养物保藏中心
。
[0006]本专利技术还提供了一种人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞的构建方法，所述方法包括如下步骤：
[0007]1)
提供人结肠腺癌细胞株以及培养液；
[0008]2)
在培养液中添加人基因
OCT4
的激活剂以及瑞戈非尼，培养所述人结肠腺癌细胞株；
[0009]3)
在培养液中增加瑞戈非尼的浓度，培养所述人结肠腺癌细胞株；
[0010]4)
获得人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞
。
[0011]优选地，所述人结肠腺癌细胞株为人结肠腺癌
SW480
细胞株
。
[0012]优选地，所述培养液为含
10
％胎牛血清的
L
‑
15
培养液
。
[0013]优选地，所述的人基因
OCT4
的激活剂是
OAC1。
[0014]优选地，
OAC1
的浓度为
1.5
μ
M。
[0015]优选地，在步骤
2)
中，培养所述人结肠腺癌细胞株的条件为
37℃、0
％ CO2饱和湿度培养箱中培养
。
[0016]优选地，在步骤
2)
中，添加瑞戈非尼的初始浓度不小于
0.5
μ
M
；在步骤
3)
中，瑞戈非尼的最终浓度不大于
10.0
μ
M。
[0017]优选地，在步骤
3)
中，在培养液中增加瑞戈非尼的浓度时，每次增加的浓度为
0.2
μ
M
‑
1.0
μ
M。
[0018]优选地，所述方法还包括：待细胞在含有最终浓度瑞戈非尼的培养液恢复正常生长后，将细胞冻存于液氮中保存，然后取出，用含有最终浓度瑞戈非尼的培养液继续培养
。
[0019]本专利技术的有益效果为：本专利技术相对于现有方法进行了改良，所得
RI
增加了1倍，构建周期缩短了1个月，为瑞戈非尼耐药株的构建提供了快速有效的诱导方法，为耐药机制的研究提供了良好的体外耐药模型
。
[0020]以下将结合附图对本专利技术的构思
、
具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本专利技术的目的
、
特征和效果
。
附图说明
[0021]图1为实施例2中耐药指数的测定结果示意图
。
[0022]图2为实施例2中形态学特征的显微照片
。
[0023]图3为实施例2中增殖能力测定结果示意图
。
[0024]图4为实施例2中细胞球形成能力检测的显微照片
。
[0025]图5为实施例2中
Transwell
迁移实验的显微照片
。
[0026]图6为实施例2中
Transwell
迁移实验的统计结果示意图
。
[0027]生物材料保藏信息：
[0028]本专利技术的人结肠腺癌瑞戈非尼耐药株
SW480
‑
R
已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏单位简称
CCTCC
，地址：湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心
。
分类命名为人结肠腺癌瑞戈非尼耐药株
SW480
‑
R
，保藏编号为
CCTCC NO
：
C2023193
，保藏日期为
2023
年7月
18
日
。
具体实施方式
[0029]以下实施例中的人结肠腺癌
SW480
细胞株购自中国科学院细胞库
(
目录号为
SCSP<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞株，其特征在于，其名称为人结肠腺癌瑞戈非尼耐药株
SW480
‑
R
，保藏编号为
CCTCC NO
：
C2023193
，保藏日期为
2023
年7月
18
日，保藏地点为中国典型培养物保藏中心
。2.
一种人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞株的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1)
提供人结肠腺癌细胞株以及培养液；
2)
在培养液中添加人基因
OCT4
的激活剂以及瑞戈非尼，培养所述人结肠腺癌细胞株；
3)
在培养液中增加瑞戈非尼的浓度，培养所述人结肠腺癌细胞株；
4)
获得人结肠腺癌瑞戈非尼耐药细胞
。3.
如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述人结肠腺癌细胞株为人结肠腺癌
SW480
细胞株
。4.
如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养液为含
10
％胎牛血清的
L
‑
15
培养液
。5.
如权利要求2所述的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕玲玲，郑岚，李涛，陈敬贤，徐佳悦，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：