地衣芽孢杆菌、碱性蛋白酶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及微生物领域，尤其涉及地衣芽孢杆菌、碱性蛋白酶及其制备方法和应用。本发明专利技术提供了地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)YJY22

【技术实现步骤摘要】
地衣芽孢杆菌、碱性蛋白酶及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及微生物领域，尤其涉及地衣芽孢杆菌、碱性蛋白酶及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]蛋白酶是工业酶中使用分量最多的一种酶，约占酶总量的60％，而碱性蛋白酶就占约25％。碱性蛋白酶是指用于水解蛋白质或多肽，且在pH偏碱性范围内活力较高、稳定性较好的一类酶，其来源广泛。与酸性和中性蛋白酶相比，碱性蛋白酶具有应用范围广，水解能力强等优点，因而被大量应用于加酶洗涤剂、制革与丝绸行业等，其中，有调查显示，酶制剂市场量最大的是洗涤剂用酶。
[0003]由于市场对碱性蛋白酶的需求不断增加，所以寻找一种高效、稳定性高的碱性蛋白酶仍具有重大的意义。近年来，已有报道具有较高pH适应性、耐热、耐表面活性剂、耐氧化剂等特性的碱性蛋白酶的产酶菌株大多数为芽孢杆菌属内菌株。因此，需要开发选育不同性状的优良高产菌株，提高碱性蛋白酶的酶活力、增强酶的适用性，降低生产成本才能进一步满足酶制剂工业生产的需求。
[0004]现有技术提供的产碱性蛋白酶的菌株，由于发酵液酶活力较低，使得生产成本较高，不足以支撑产业化落地，因此，需进一步进行选育，从而获得在工业上具有较大应用前景的微生物新品种。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了地衣芽孢杆菌、碱性蛋白酶及其制备方法和应用。本专利技术通过ARTP诱变的方法获得了一株高产碱性蛋白酶的地衣芽孢杆菌突变株YJY22
‑
08，该菌株能显著提高碱性蛋白酶产量，摇瓶补料发酵液酶活达7万U/mL，且诱变后菌株仍能保持良好的遗传稳定性，在洗涤剂行业具有广泛的应用前景。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)YJY22
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08，其保藏编号为CGMCCNO.24317。
[0008]本专利技术还提供了微生物菌剂，包括以下任一项以及可接受的助剂；
[0009](Ⅰ)、所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)；和/或
[0010](Ⅱ)、所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的发酵液、培养物、外泌体、裂解物或提取物。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，上述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或上述微生物菌剂在制备碱性蛋白酶中的应用。
[0012]本专利技术还提供了碱性蛋白酶，经上述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或上述微生物菌剂发酵获得。
[0013]本专利技术还提供了培养基，包括发酵培养基或补料培养基；
[0014]所述发酵培养基包括：1～5％碳源、2～5％氮源、0.5～2％牛肉膏、0.01～0.1％氯化钙、0.01～0.08％硫酸镁、0.1～0.7％氯化钾和0.4～1.6％磷酸氢二钾；
[0015]所述碳源包括：葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糊精、可溶性淀粉或玉米粉中的一种或多种；
[0016]所述氮源包括：蛋白胨、酵母粉、豆粕或玉米浆干粉中的一种或多种；
[0017]所述补料培养基包括：10～20％麦芽糊精、5～10％葡萄糖、3～6％蛋白胨和4～8％牛肉膏。
[0018]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S2中所述发酵培养基包括：5％葡萄糖、5％蛋白胨、1.5％牛肉膏、0.07％氯化钙、0.04％硫酸镁、0.3％氯化钾和0.4％磷酸氢二钾；或
[0019]2％葡萄糖、3％麦芽糊精、3％蛋白胨、2％豆粕、1.5％牛肉膏、0.07％氯化钙、0.04％硫酸镁、0.3％氯化钾和1.0％磷酸氢二钾；或
[0020]1％葡萄糖、2％麦芽糊精、2％蛋白胨、1.5％豆粕、0.5％牛肉膏、0.01％氯化钙、0.01％硫酸镁、0.1％氯化钾和0.4％磷酸氢二钾；或
[0021]3％葡萄糖、4％麦芽糊精、3.5％蛋白胨、4％豆粕、2％牛肉膏、0.1％氯化钙、0.08％硫酸镁、0.7％氯化钾和1.6％磷酸氢二钾。
[0022]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S2中所述补料培养基包括：15％麦芽糊精、8％葡萄糖、4.5％蛋白胨和6％牛肉膏；或
[0023]10％麦芽糊精、5％葡萄糖、3％蛋白胨和4％牛肉膏；或
[0024]20％麦芽糊精、10％葡萄糖、6％蛋白胨和8％牛肉膏。
[0025]本专利技术还提供了上述培养基在制备碱性蛋白酶中的应用。
[0026]本专利技术还提供了碱性蛋白酶的制备方法，包括以下步骤：
[0027]S1：取上述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或上述微生物菌剂接种培养后，获得种子液；
[0028]S2：取所述种子液发酵培养后，离心，收集上清，获得所述碱性蛋白酶；
[0029]S2中所述发酵培养的温度为25～40℃，时间为30～100h，pH值为8.0～12.0；
[0030]S2中所述发酵培养采用上述培养基中的所述发酵培养基。
[0031]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S1中所述培养的温度为35℃，时间为16h。
[0032]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S2中所述离心的转速为8000r/min，时间为20min。
[0033]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S2中所述发酵培养的温度为30～35℃。
[0034]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S2中所述发酵培养的温度为25℃、30℃、35℃或40℃。
[0035]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S2中所述发酵培养的pH值为9.0～11.0。
[0036]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S2中所述发酵培养的pH值为8.0、9.0、10.0、11.0或12.0。
[0037]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S2中所述发酵培养的时间为40h、48h、50h、54h、60h、66h、70h、72h、80h、90h或100h。
[0038]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S2中所述发酵培养的时间为40h、50h、60h、70h、80h、90h或100h。
[0039]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法S2中所述发酵培养还包括补料的步骤；所述补料采用补充碳源或氮源的方式；
[0040]所述补料采用上述培养基中的所述补料培养基；
[0041]所述补料的时间间隔为20h，所述补料的体积比为12％。
[0042]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中，当所述种子液发酵培养时，还原糖的含量为0.6％时，进行补料。
[0043]本专利技术还提供了碱性蛋白酶的制备方法，包括以下步骤：
[0044]S1：取上述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或上述微生物菌剂以10％(v/v)，活菌数为1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，其特征在于，其保藏编号为CGMCCNO.24317。2.微生物菌剂，其特征在于，包括以下任一项以及可接受的助剂；(Ⅰ)、如权利要求1所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)；和/或(Ⅱ)、如权利要求1所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的发酵液、培养物、外泌体、裂解物或提取物。3.如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或如权利要求2所述的微生物菌剂在制备碱性蛋白酶中的应用。4.碱性蛋白酶，其特征在于，经如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或如权利要求2所述的微生物菌剂发酵获得，发酵培养的温度为25～40℃，时间为30～100h，pH值为8.0～12.0。5.培养基，其特征在于，包括发酵培养基或补料培养基(m/v)；所述发酵培养基包括：1～5％碳源、2～5％氮源、0.5～2％牛肉膏、0.01～0.1％氯化钙、0.01～0.08％硫酸镁、0.1～0.7％氯化钾和0.4～1.6％磷酸氢二钾；所述碳源包括：葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糊精、可溶性淀粉或玉米粉中的一种或多种；所述氮源包括：蛋白胨、酵母粉、豆粕或玉米浆干粉中的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭南南，杨传伦，张心青，刘结磊，杨丹丹，周倩，和富明，冉新新，潘冬梅，马春峰，田杰伟，
申请(专利权)人：黄河三角洲京博化工研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：