搭载质粒的阳离子脂质微泡及其制备方法技术

本发明专利技术涉及脂质微泡技术领域，是一种搭载质粒的阳离子脂质微泡及其制备方法，该搭载质粒的阳离子脂质微泡由脂质外壳和气体内芯组成，按下述方法得到：将二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺

【技术实现步骤摘要】
搭载质粒的阳离子脂质微泡及其制备方法


[0001]本专利技术涉及脂质微泡
，是一种搭载质粒的阳离子脂质微泡及其制备方法
。

技术介绍

[0002]微泡在高声能超声作用下产生非线性振荡发射谐波，相较于正常组织，微泡被病变组织摄取更多，血流信号和信噪比显著增加
、
灰度增强，因此，超声可以实现微泡在体内循环的实时监测
。
除了用作造影剂外，微泡在药物输送领域被认为是一种治疗药物，超声诱导的空化作用使微泡气体核心膨胀
、
压缩，同时，改变了血管内血液流动方式
、
增加血管内膜内皮细胞的通透性，从而允许药物外渗，并通过增强附近细胞的膜通透性来改善细胞内药物的摄取
。
除了药物递送外，微泡也可递送基因或搭载目的基因的质粒实现基因水平的治疗
。
[0003]微泡一般由蛋白质
、
脂类或聚合物制成的壳膜和壳膜内包裹的气芯组成，作为载体搭载药物或基因，已广泛应用于抗肿瘤治疗
、
溶栓
、
药物和基因治疗等领域
。
微泡作为载体，其搭载基因的能力是提高基因转染效率最基础的先决条件，而脂质微泡电荷量是载物搭载饱和度及搭载量的主要影响因素之一
。
目前，脂质微泡电位及通过静电吸附的基因搭载量均较低，限制了其应用
。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种搭载质粒的阳离子脂质微泡及其制备方法，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有微泡存在的质粒搭载率较低的问题
。
[0005]本专利技术的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种搭载质粒的阳离子脂质微泡，阳离子脂质微泡的基本结构包括脂质外壳和气体内芯，脂质外壳的组成组分包括二硬脂酰基磷脂酰胆碱（
DSPC
）
、
二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
2000
（
DSPE
‑
PEG2000
）
、
二棕榈酰磷脂酰胆碱（
DPPC
）和
DC
胆固醇（
DC
‑
CHOL
），气体内芯为全氟丙烷（
C3F8）内芯，脂质外壳的外表面通过静电吸附法连接有质粒
。
[0006]下面是对上述专利技术技术方案之一的进一步优化或
/
和改进：上述二硬脂酰基磷脂酰胆碱（
DSPC
）
、
二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
2000
（
DSPE
‑
PEG2000
）
、
二棕榈酰磷脂酰胆碱（
DPPC
）和
DC
胆固醇（
DC
‑
CHOL
）的质量比为（
2.5
至
3.5
）：（
0.5
至
1.5
）：（
2.5
至
3.5
）：（
5.5
至
6.5
）
。
[0007]上述搭载质粒的阳离子脂质微泡，按下述方法得到：
S1
，将二硬脂酰基磷脂酰胆碱（
DSPC
）
、
二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
2000
（
DSPE
‑
PEG2000
）
、
二棕榈酰磷脂酰胆碱（
DPPC
）和
DC
胆固醇（
DC
‑
CHOL
）按所需比例混合，加入三氯甲烷溶解后形成母液；
S2
，将母液置于试管内进行预热，再将预热的母液进行振荡同时充入氮气，在试管壁形成白色脂质膜；
S3
，将脂质膜抽真空后，加入配制的混合液，经过超声振荡，使脂质膜完全溶解后，得到水化液；
S4
，将水化液抽真空后，灌入全氟丙烷气体，再进行机械振荡后，得到微泡混悬液，再将微泡混悬液进行离心后，弃去上层，得到阳离子脂质微泡；
S5
，将阳离子脂质微泡与质粒按所需比例混匀，在室温下孵育后，得到搭载质粒的阳离子脂质微泡
。
[0008]上述步骤
S2
中，母液预热温度为
60℃
至
70℃
，预热时间为
2s
至
3s。
[0009]上述步骤
S3
中，脂质膜抽真空时间为
3.0h
至
3.5h
，混合液由体积比为（7至9）
:1:1
的
Tris
缓冲液
、
甘油和
1,2
‑
丙二醇混配而成
。
[0010]上述步骤
S4
中，水化液抽真空时间为
1.0h
至
1.5h,
灌入全氟丙烷气体
3s
至
4s,
该步骤重复3次至4次
。
[0011]上述步骤
S5
中，阳离子脂质微泡与质粒的体积比为
5:2
，孵育时间为
30min
至
35min。
[0012]上述质粒为
pEGFP
‑
N1
质粒
。
[0013]本专利技术的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种搭载质粒的阳离子脂质微泡的制备方法，按下述方法进行：
S1
，将二硬脂酰基磷脂酰胆碱（
DSPC
）
、
二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
2000
（
DSPE
‑
PEG2000
）
、
二棕榈酰磷脂酰胆碱（
DPPC
）和
DC
胆固醇（
DC
‑
CHOL
）按所需比例混合，加入三氯甲烷溶解后形成母液；
S2
，将母液置于试管内进行预热，再将预热的母液进行振荡同时充入氮气，在试管壁形成白色脂质膜；
S3
，将脂质膜抽真空后，加入配制的混合液，经过超声振荡，使脂质膜完全溶解后，得到水化液；
S4
，将水化液抽真空后，灌入全氟丙烷气体，再进行机械振荡后，得到微泡混悬液，再将微泡混悬液进行离心后，弃去上层，得到阳离子脂质微泡；
S5
，将阳离子脂质微泡与质粒按所需比例混匀，在室温下孵育后，得到搭载质粒的阳离子脂质微泡
。
[0014]本专利技术所制备的阳离子脂质微泡电位高且粒径小，具有较高的质粒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种搭载质粒的阳离子脂质微泡，其特征在于阳离子脂质微泡的基本结构包括脂质外壳和气体内芯，脂质外壳的组成组分包括二硬脂酰基磷脂酰胆碱
、
二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
2000、
二棕榈酰磷脂酰胆碱和
DC
胆固醇，气体内芯为全氟丙烷内芯，脂质外壳的外表面通过静电吸附法连接有质粒
。2.
根据权利要求1所述的搭载质粒的阳离子脂质微泡，其特征在于二硬脂酰基磷脂酰胆碱
、
二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
2000、
二棕榈酰磷脂酰胆碱和
DC
胆固醇的质量比为
2.5
至
3.5
：
0.5
至
1.5
：
2.5
至
3.5
：
5.5
至
6.5。3.
根据权利要求1或2所述的搭载质粒的阳离子脂质微泡，其特征在于按下述方法得到：
S1
，将二硬脂酰基磷脂酰胆碱
、
二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
2000、
二棕榈酰磷脂酰胆碱和
DC
胆固醇按所需比例混合，加入三氯甲烷溶解后形成母液；
S2
，将母液置于试管内进行预热，再将预热的母液进行振荡同时充入氮气，在试管壁形成白色脂质膜；
S3
，将脂质膜抽真空后，加入配制的混合液，经过超声振荡，使脂质膜完全溶解后，得到水化液；
S4
，将水化液抽真空后，灌入全氟丙烷气体，再进行机械振荡后，得到微泡混悬液，再将微泡混悬液进行离心后，弃去上层，得到阳离子脂质微泡；
S5
，将阳离子脂质微泡与质粒按所需比例混匀，在室温下孵育后，得到搭载质粒的阳离子脂质微泡
。4.
根据权利要求3所述的搭载质粒的阳离子脂质微泡，其特征在于步骤
S2
中，母液预热温度为
60℃
至
70℃
，预热时间为
2s
至
3s。5.
根据权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：穆玉明，李微微，关丽娜，
申请(专利权)人：新疆医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：