异养硝化好氧反硝化高效脱氮假单胞菌的培养方法和应用技术

本发明专利技术公开了异养硝化好氧反硝化高效脱氮假单胞菌的培养方法，包括如下培养步骤：

【技术实现步骤摘要】
异养硝化好氧反硝化高效脱氮假单胞菌的培养方法和应用


[0001]本专利技术涉及假单胞菌培养
，具体为异养硝化好氧反硝化高效脱氮假单胞菌的培养方法和应用
。

技术介绍

[0002]假单胞菌为直或稍弯的革兰氏阴性杆菌，是无核细菌，以极生鞭毛运动，不形成芽孢，化能有机营养，严格好氧，呼吸代谢，从不发酵，其中，异养硝化好氧反硝化假单胞菌是污水处理中效果较好的菌群，能够在好氧的环境下完成硝化反硝化作用，将污水的氨氮转化为硝酸盐，最后转化为氮气，氮气直接从污水中释放，不需要厌氧环境使污水处理更加便捷，因此，异养硝化好氧反硝化假单胞菌的培养具有极大的使用价值；
[0003]但是目前培养的异养硝化好氧反硝化假单胞菌，在脱氮的途径上比较单一，污水中存在多种形式的氮元素，无法实现更高效的脱氮
。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供异养硝化好氧反硝化高效脱氮假单胞菌的培养方法和应用，可以有效解决上述
技术介绍
中提出目前培养的异养硝化好氧反硝化假单胞菌，在脱氮的途径上比较单一，污水中存在多种形式的氮元素，无法实现更高效的脱氮的问题
。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：异养硝化好氧反硝化高效脱氮假单胞菌的培养方法，包括如下培养步骤：
[0006]S1、
从好氧曝气池分离得到假单胞菌，将假单胞菌接种到
LB
培养基中培养，使菌群扩增，放在
4℃
环境下保存备用；
[0007]S2、
准备好氧筛选培养基，将假单胞菌菌株挑选并接种到培养基中，设置培养条件
PH
为
7.3
‑
7.4
，恒温静置培养；
[0008]S3、
准备硝化培养基，将假单胞菌菌株挑选并接种到培养基中，设置培养条件
PH
为
7.3
‑
7.4
，4‑
30℃
，恒温
60rpm
转速条件下培养；
[0009]S4、
准备反硝化培养基，将假单胞菌菌株挑选并接种到培养基中，设置培养条件
PH
为
7.3
‑
7.4
，4‑
30℃
，通入溶解氧，恒温
60rpm
转速条件下培养
。
[0010]根据上述技术方案，所述
S2
中，好氧筛选培养基的组成成分包括：硝酸钠
5g/L、
醋酸钠
4.9g/L
，
KH2PO41.5g/L
，
MgSO4·
7H2O1.0g/L
，
NaCl3g/L
，培养基使用前经灭菌处理；
[0011]好氧筛选培养基的培养温度为4‑
30℃
，培养时先从
4℃
开始，以
6℃/h
的速度升高温度，每小时观察菌群记录菌群生长情况
。
[0012]根据上述技术方案，所述
S3
中，硝化培养基包括如下两种：
[0013]脱除硝酸盐和亚硝酸盐培养基组分：硝酸盐氮
150mg/L
，亚硝酸盐氮
150mg/L
，柠檬酸钠
5g/L
，醋酸钠
6g/L
，
KH2PO41.5g/L
，
MgSO4·
7H2O1.5g/L
，
FeCl3·
6H2O0.1g/L
，
NaCl15g/L
，氨单加养酶
0.05g/L
，羟胺氧化酶
0.05g/L
，培养基使用前经灭菌处理；
[0014]脱除有机氮培养基组分：有机氮源天冬酰胺
1.0g/L
，柠檬酸钠
5g/L
，醋酸钠
6g/L
，
KH2PO41.5g/L
，
MgSO4·
7H2O1.5g/L
，
FeCl3·
6H2O0.1g/L
，
NaCl15g/L
，培养基使用前经灭菌处理
。
[0015]根据上述技术方案，所述
S4
中，反硝化培养基包括如下三种：
[0016]脱除氨氮培养基组分：铵态氮
300mg/L、
柠檬酸钠
8.5g/L
，醋酸钠
6g/L
，
KH2PO41.5g/L、MgSO4·
7H2O1.5g/L
，
FeCl3·
6H2O0.1g/L
，
NaCl15g/L
，使用前经灭菌处理；
[0017]脱除氨氮和硝酸盐培养基组分：铵态氮
150mg/L
，硝酸盐氮
150mg/L、
柠檬酸钠
5g/L
，醋酸钠
6g/L
，
KH2PO41.5g/L、MgSO4·
7H2O1.5g/L
，
FeCl3·
6H2O0.1g/L
，
NaCl15g/L
，氨单加养酶
0.05g/L
，羟胺氧化酶
0.05g/L
，使用前经灭菌处理；
[0018]脱除有机氮培养基组分：有机氮源天冬酰胺
1.0g/L、
柠檬酸钠
5g/L
，醋酸钠
6g/L
，
KH2PO41.5g/L、MgSO4·
7H2O1.5g/L
，
FeCl3·
6H2O0.1g/L
，
NaCl15g/L
，使用前经灭菌处理
。
[0019]根据上述技术方案，所述
S3
中，脱除硝酸盐和亚硝酸盐培养基培养的假单胞菌用于对废水中氨氧化成羟胺，再将羟胺氧化成亚硝酸，以有机碳源柠檬酸钠和醋酸钠作为电子供体将废水中的亚硝酸盐转化为氮气；
[0020]经脱除有机氮培养基培养的假单胞菌菌株用于将有机氮氨化成氨氮，脱除有机氮
。
[0021]根据上述技术方案，所述
S4
中脱除氨氮培养基培养的假单胞菌菌株用于通过硝化作用将废水中氨氮转化为硝酸盐，再通过好氧反硝化将硝酸盐还原为亚硝酸盐，最后转化成氮气；
[0022]脱除氨氮和硝酸盐培养基培养的单胞菌菌株用于脱除氨氮和硝酸盐，通过氨单加养酶和羟胺氧化酶催化将氨氮氧化成亚硝酸盐，再将废水中的亚硝酸盐
、
硝酸盐反硝化最终转化成氮气；
[0023]脱除有机氮培养基培养的假单胞菌菌株用于氨化脱氮除有机氮，先将有机氮转化为氨氮，再将将氨氮氧化为亚硝酸盐或硝酸盐，最终转化成氮气；
[0024]通过溶解氧用于对好氧反本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
异养硝化好氧反硝化高效脱氮假单胞菌的培养方法，其特征在于：包括如下培养步骤：
S1、
从好氧曝气池分离得到假单胞菌，将假单胞菌接种到
LB
培养基中培养，使菌群扩增，放在
4℃
环境下保存备用；
S2、
准备好氧筛选培养基，将假单胞菌菌株挑选并接种到培养基中，设置培养条件
PH
为
7.3
‑
7.4
，恒温静置培养；
S3、
准备硝化培养基，将假单胞菌菌株挑选并接种到培养基中，设置培养条件
PH
为
7.3
‑
7.4
，4‑
30℃
，恒温
60rpm
转速条件下培养；
S4、
准备反硝化培养基，将假单胞菌菌株挑选并接种到培养基中，设置培养条件
PH
为
7.3
‑
7.4
，4‑
30℃
，通入溶解氧，恒温
60rpm
转速条件下培养
。2.
根据权利要求1所述的异养硝化好氧反硝化高效脱氮假单胞菌的培养方法，所述
S2
中，好氧筛选培养基的组成成分包括：硝酸钠
5g/L、
醋酸钠
4.9g/L
，
KH2PO41.5g/L
，
MgSO4·
7H2O1.0g/L
，
NaCl3g/L
，培养基使用前经灭菌处理；好氧筛选培养基的培养温度为4‑
30℃
，培养时先从
4℃
开始，以
6℃/h
的速度升高温度，每小时观察菌群记录菌群生长情况
。3.
根据权利要求1所述的异养硝化好氧反硝化高效脱氮假单胞菌的培养方法，其特征在于，所述
S3
中，硝化培养基包括如下两种：脱除硝酸盐和亚硝酸盐培养基组分：硝酸盐氮
150mg/L
，亚硝酸盐氮
150mg/L
，柠檬酸钠
5g/L
，醋酸钠
6g/L
，
KH2PO41.5g/L
，
MgSO4·
7H2O1.5g/L
，
FeCl3·
6H2O0.1g/L
，
NaCl15g/L
，氨单加养酶
0.05g/L
，羟胺氧化酶
0.05g/L
，培养基使用前经灭菌处理；脱除有机氮培养基组分：有机氮源天冬酰胺
1.0g/L
，柠檬酸钠
5g/L
，醋酸钠
6g/L
，
KH2PO41.5g/L
，
MgSO4·
7H2...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨婷婷，郑维海，毛先勇，彭涛，庞晓宇，谈进，雒建伟，刘文静，赵登亮，刘海涛，周刚，
申请(专利权)人：亳州国祯污水处理有限公司，
类型：发明
国别省市：