一种胶质瘤治疗靶标的使用方法技术

本发明专利技术公开了一种胶质瘤治疗靶标的使用方法，所述胶质瘤治疗靶标的使用方法包括以下步骤：步骤一、采用生物信息学分析和qRT

【技术实现步骤摘要】
一种胶质瘤治疗靶标的使用方法


[0001]本专利技术涉及肿瘤治疗
，具体是指一种胶质瘤治疗靶标的使用方法。

技术介绍

[0002]多形性胶质母细胞瘤(GBM)是最常见的原发性恶性脑癌，位于中枢神经系统的神经上皮起点。该病预后差、致死率高，很大程度上是由于胶质瘤细胞具有高侵袭性和迁移性，能够广泛迁移并弥漫性浸润到周围脑组织。此外，在GBM的形成和发展过程中会发生各种基因突变，这也是GBM治疗非常具有挑战性的原因。胶质瘤的治疗方法多种多样，包括放疗、化疗和手术。胶质瘤分为4级，胶质瘤分级越高，恶性程度越高。恶性胶质瘤为4级，恶性程度最高，占所有胶质瘤病例的15％。胶质母细胞瘤患者通常预后很差，中位生存时间为15个月，5年生存率<10％。因此，胶质瘤对人类健康构成了严重的挑战，探索新的治疗方案是提高胶质瘤治疗水平的当务之急。在临床中，迫切需要进一步了解胶质瘤细胞浸润周围脑组织的分子机制，以确定治疗GBM的新靶点。
[0003]随着高通量测序和分子生物学的发展，lncrna已被证实参与多种疾病的发生和发展。lncrna是长度>200bp的rna，不具有蛋白质编码能力，大部分来源于基因间区(lincRNA)或正义和反义基因转录产物。最初，lncrna被认为是生物学上无功能的，是“垃圾”转录本。然而，研究发现lncrna参与多种生物学过程，包括表观遗传调控、蛋白质活性调控、转录调控和miRNA海绵作用。此外，据报道，lncrna存在于大多数肿瘤类型中，如卵巢癌、肺癌和胶质瘤，它们在肿瘤进展中发挥重要的疾病调节作用。先前的一项研究发现PDCD4
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AS1与乳腺癌的更好预后相关。AkbariF.等人使用TCGA
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COAD数据筛选PDCD4
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AS1。WangD.等通过调控miR
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10b
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5p/TNBC，发现PDCD4
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AS1是乳腺癌肿瘤生长的抑制因子。然而，PDCD4
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AS1是否参与胶质瘤的进展尚不清楚。
[0004]miRNAs是一类进化保守的非编码rna，长度约为22个核苷酸。miRNAs参与转录后调控，通过与mRNA3
’
非翻译区(UTR)的靶序列结合，抑制翻译。lncrna发挥作用的重要机制之一是作为竞争内源性rna(ceRNAs)与miRNAs相互作用，从而间接调节基因表达。近年来，许多lncrna被报道作为ceRNA促进或抑制肿瘤进展。例如，Gu等人报道通过microRNA
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98
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5p/CPEB4轴下调lncRNAFOXD2
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AS1抑制胶质瘤的进展和耐药。据报道，lncRNAMALAT1通过海绵miR
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613促进胶质瘤的进展。
[0005]在此，为了研究PDCD4
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AS1在胶质瘤中的表达和功能，并探索了PDCD4
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AS1的下游靶点，miRNA/mRNA轴，以阐明PDCD4
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AS1在胶质瘤中的作用机制，我们提出了一种胶质瘤治疗靶标的使用方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是克服以上技术困难，提供一种胶质瘤治疗靶标的使用方法，研究旨在探讨长链非编码RNA(lncRNA)PDCD4
‑
AS1在胶质瘤中的作用及其机制。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为：
[0008]一种胶质瘤治疗靶标的使用方法，所述胶质瘤治疗靶标的使用方法包括以下步骤：
[0009]步骤一、采用生物信息学分析和qRT
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PCR方法检测PDCD4
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AS1的表达；
[0010]步骤二、通过siRNA转染，在胶质瘤细胞中敲除PDCD4
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AS1；
[0011]步骤三、细胞功能分析采用CCK
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8增殖、细胞迁移和侵袭试验以及细胞周期分析；
[0012]步骤四、采用体内肿瘤发生试验研究PDCD4
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AS1敲除在胶质瘤肿瘤生长中的作用；
[0013]步骤五、进行生物信息学分析、RNA下拉和荧光素酶报告基因分析，以研究PDCD4
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AS1的下游靶点；
[0014]步骤六、进行救援实验，以确定调节机制。
[0015]本专利技术与现有技术相比的优点在于：本专利技术采用体内实验与体外实验方法进行验证，对了解胶质瘤的发病机制，制定新的治疗策略具有十分重要的意义，为胶质瘤提供一个潜在的治疗靶点，研究了PDCD4
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AS1在胶质瘤中的表达和功能，并探索了PDCD4
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AS1的下游靶点，miRNA/mRNA轴，从而阐明了PDCD4
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AS1在胶质瘤中的作用机制。
附图说明
[0016]图1A是生信分析胶质瘤中PDCD4
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AS1表达增高；
[0017]图1B是Q
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PCR检测临床样本，结果发现与正常脑组织样本相比，胶质瘤组织中PDCD4
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AS1的表达更高；
[0018]图1C是与正常胶质瘤细胞(HEB细胞)相比，PDCD4
‑
AS1在胶质瘤细胞系(U251、U87、SHG44、U373)中的表达明显增高。
[0019]图2A、2B是两种胶质瘤细胞的CCK
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8实验；
[0020]图2C是两种胶质瘤细胞的Transwell迁移实验；
[0021]图2D是两种胶质瘤细胞的Transwell侵袭实验；
[0022]图2E是流式细胞术检测两种胶质瘤细胞的周期分布。
[0023]图3A、3B是双荧光素酶报告基因检测实验证实miR
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30b
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3p与PDCD4
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AS1结合；
[0024]图3C是双荧光素酶报告基因检测实验证实miR
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30b
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3p与METTL7B结合。
[0025]图4miR
‑
30b
‑
3p抑制和OV
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METTL7B都可以逆转由PDCD4
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AS1敲低引起的胶质瘤细胞活力(图4A)、迁移(图4B)、侵袭(图4C)和细胞周期阻滞(图4D)的影响。
[0026]图5PDCD4
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AS1的敲除在肿瘤重量(图5B)和体积(图5C)上显著减缓了胶质瘤的肿瘤生长(图5A)；
[0027]图5基因表达实验显示，与阴性组相比，PDCD4
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AS1
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sirna导致胶质瘤肿瘤中PDCD4
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AS1和METTL7B下调，miR
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30b
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶质瘤治疗靶标的使用方法，其特征在于，所述胶质瘤治疗靶标的使用方法包括以下步骤：步骤一、采用生物信息学分析和qRT
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PCR方法检测PDCD4
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AS1的表达；步骤二、通过siRNA转染，在胶质瘤细胞中敲除PDCD4
‑
AS1；步骤三、细胞功能分析采用CCK

【专利技术属性】
技术研发人员：李作伟，
申请(专利权)人：李作伟，
类型：发明
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