一种pH/磁场双重响应性载药胶束及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种pH/磁场双重响应性载药胶束的制备方法，包括：(1)将DOX

【技术实现步骤摘要】
一种pH/磁场双重响应性载药胶束及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于肿瘤综合治疗
，具体涉及一种pH/磁场双重响应性载药胶束及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]肿瘤微环境支持癌细胞的生存和发展，有特殊的物理和化学特征，在肿瘤进展与转移中发挥关键作用。如大多数肿瘤微环境中的细胞外pH为6.5～6.8，核糖体/溶酶体为4.5～6.5，均低于正常组织和血液的pH(7.2～7.4)。在这种酸性微环境中，弱碱性药物分子很容易被质子化，从而产生肿瘤耐药，显著影响肿瘤疗效。
[0003]利用肿瘤的这一特性，研究人员开发了各种酸性pH响应纳米载体，如水凝胶、胶束、脂质体等。其中，胶束是热力学、动力学的稳定体系，具有稳定、长效、安全等优势。pH响应型聚合物胶束经PEG(聚乙二醇)链修饰后，表面形成一层水化膜，大大减少与血浆中的蛋白、酶等成分的结合，从而实现体内的长循环而不被降解，pH敏感性胶束进入体内后，通过高通透性和滞留效应(enhanced permeability and retention，EPR)到达肿瘤位点，然后主要通过内吞途径被细胞摄取，经内涵体进入溶酶体。在此过程中，pH值从正常生理条件下降到约pH 5.0，而这种pH的变化可以诱发胶束快速转化为六方晶体相，显著加速药物的释放。然而，为了提高pH响应型聚合物胶束癌症治疗效果，仍需要进行许多改进，如肿瘤靶向性、细胞杀伤能力等。依赖于被动靶向EPR效应的纳米胶束容易在肝脏中高度富集，引起更大的毒性，导致载药胶束临床应用失败。单一pH敏感药物载体化疗手段治疗癌症往往效率较低，副作用较大，容易使肿瘤产生耐药。因此，提高pH响应载药聚合物胶束靶向肿瘤特异性以及实现有效的肿瘤协同治疗策略，对于载药胶束应用于临床癌症治疗具有重要意义。
[0004]为了提高纳米聚合物胶束的肿瘤靶向能力，国内外研究者们将多种靶向分子引入纳米胶束，如适配体、抗体、多肽、和配体等。其中，作为水溶性族维生素一员的叶酸(FA)已被许多研究证明是肿瘤靶向的理想配体。叶酸受体在大部分人源性恶性肿瘤(如卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、直肠癌、鼻咽癌等)细胞膜上具有高度活性，叶酸作为叶酸受体的天然配体具有无免疫原性、易与其它物质化学键合、稳定性高等特点。Liu课题组为了增强(2
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乙基
‑2‑
L
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恶唑啉)
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聚(2
‑
乙基
‑2‑
恶唑啉)
‑
聚(D，L
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乳酸)胶束对抗癌药物的靶向传递，设计并制备了一种叶酸改良的pH敏感两亲聚合物胶束，细胞与动物实验结果均证明了所制备的聚合物胶束增强了肿瘤靶向性。Bhagwat DA课题组研制了pH响应DPPE(1,2
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二十六烷酰基
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sn
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甘油基
‑3‑
磷酸乙醇胺)
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FA(叶酸)
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DOX(阿霉素)胶束，之后比较DPPE
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FA
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DOX胶束和游离DOX在荷瘤小鼠中的体外和体内乳腺肿瘤靶向能力。实验证实叶酸靶向胶束相比游离DOX降低了全身毒性，促进DOX靶向肿瘤。然而，这些研究大多仅通过靶向化疗药物治疗癌症，虽然提高了载药胶束的靶向能力，但是未实现肿瘤的协同综合治疗，因而治疗效果有限。
[0005]近年来，磁性纳米氧化铁材料在肿瘤综合治疗领域引起广泛关注，小尺寸磁性氧化铁纳米颗粒(如
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Fe2O3，Fe3O4)具有超顺磁性、制备技术成熟、表面易修饰的特点。基于磁
性Fe3O4的磁热疗是一种新型肿瘤治疗手段，磁热疗是将磁性微粒输送至治疗区域，在交变磁场作用下产生的热量杀伤肿瘤。相比于光热疗法及光动力疗法等，磁热疗对肿瘤加热均匀，不受肿瘤体积和部位的影响，治疗区域可以直达机体实体肿瘤组织内部。通过调试磁场的参数以及磁性粒子形貌，可以控制磁热治疗强度。此外，磁热疗法和化疗具有良好的协同效果，磁场响应所产生的热量，可提高肿瘤细胞摄取药物载体速率、缩短化疗药物释放时间，从而避免细胞耐药，增强治疗效果。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种pH/磁场双重响应性载药胶束，具有pH/磁场双重响应性，能够用于制备诊断癌症的产品或治疗癌症的药品，实现化疗协同磁热靶向治疗癌症。
[0007]为了解决以上技术问题，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]一种pH/磁场双重响应性载药胶束的制备方法，包括以下步骤：
[0009](1)将15～25mg DOX
·
HCl溶解于5～10ml水中，加入10～20ml氯仿，轻微震荡；向溶液中逐滴滴加20mM NaHCO3溶液，并轻微震荡；待氯仿层中DOX颜色越来越亮，水相中的颜色变紫即停止滴加NaHCO3，得DOX氯仿溶液；
[0010](2)制备油酸修饰的小粒径磁性Fe3O4纳米颗粒Fe3O4@OA；在干净的实验室条件下，取1mmol FeCl3·
6H2O和0.5mmol FeCl2·
4H2O，溶解在10～20mL去离子水中得到透明的铁离子溶液；在氮气气氛下，向铁离子溶液中加入5～15mL氨水，并使用磁力搅拌器搅拌，逐渐加入氨水直到反应物完全沉淀形成黑色的Fe3O4纳米颗粒；通过离心将Fe3O4纳米颗粒分离，并用去离子水洗涤去除残留氨水和杂质；将得到的Fe3O4纳米颗粒分散在5mL正辛醇中，制备油酸(OA)溶液：在15～25mL乙醇中溶解0.1g油酸；将油酸溶液缓慢滴加到Fe3O4纳米颗粒悬浮液中，同时使用磁力搅拌器搅拌，使油酸修饰均匀地附着在纳米颗粒表面。继续搅拌一段时间，确保油酸修饰与纳米颗粒充分反应；通过离心将修饰后的Fe3O4纳米颗粒分离，并用乙醇洗涤去除未结合的油酸和杂质。最后，通过离心沉积并收集Fe3O4@OA纳米颗粒。
[0011](3)将150mg～180mg DSPE
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mPEG与50mg～60mg DSPE
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PEOz
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FA溶解于上述5ml～10ml DOX氯仿溶液中；加入10mg～12mg Fe3O4@OA，再加入纯化水，超声震荡形成乳浊液；水浴条件下，旋转蒸发，直至不再产生气泡，溶液澄清透亮，有微弱乳光，对产物进行分离纯化，定容，即得DP@Fe3O4@DOX
‑
FA双重响应性载药胶束。
[0012]优选地，步骤(3)中，采用高温热解法技术制备油酸修饰的小粒径磁性Fe3O4纳米颗粒Fe3O4@OA。
[0013]优选地，步骤(3)中，水浴温度为65～72℃。
[0014]优选地，步骤(3)中，蒸发时间为20～40min。
[0015]优选地，步骤(3)中，DSPE
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mPEG与DSPE
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PEOz
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FA质量比为2.7～3.2:1。
[0016]本专利技术还提供一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种根据权利要求1所述的pH/磁场双重响应性载药胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将DOX
·
HCl溶解于水中，加入氯仿，轻微震荡；向溶液中逐滴滴加NaHCO3溶液，并轻微震荡；待氯仿层中DOX颜色越来越亮，水相中的颜色变紫即停止滴加NaHCO3，得DOX氯仿溶液；(2)制备油酸修饰的小粒径磁性Fe3O4纳米颗粒Fe3O4@OA；(3)将DSPE
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mPEG与DSPE
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PEOz
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FA溶解于上述DOX氯仿溶液中；加入Fe3O4@OA，再加入纯化水，超声震荡形成乳浊液；水浴条件下，旋转蒸发，直至不再产生气泡，溶液澄清透亮，有微弱乳光，对产物进行分离纯化，定容，即得DP@Fe3O4@DOX
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FA双重响应性载药胶束。2.根据权利要求1所述的pH/磁场双重响应性载药胶束，其特征在于：步骤(2)中，采用高温热解技术制备油酸修饰的小粒径磁性F...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建蒙，杨磊，张可星，洪文忠，李奕萍，
申请(专利权)人：广西中医药大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：