一种mRNA疫苗及其在瘤内递送增强肿瘤治疗效果中的应用制造技术

一种mRNA疫苗及其在瘤内递送增强肿瘤治疗效果中的应用，本发明专利技术经研究发现，递送某些细胞因子的mRNA可以改善小鼠肿瘤免疫微环境，增加肿瘤组织CD8+T的浸润，杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤的生长。并且可以增强免疫检查点抑制剂anti

【技术实现步骤摘要】
一种mRNA疫苗及其在瘤内递送增强肿瘤治疗效果中的应用


[0001]本专利技术涉及mRNA疗法的应用，尤其涉及一种mRNA疫苗及其在瘤内递送增强肿瘤治疗效果中的应用。

技术介绍

[0002]目前肿瘤的治疗方式主要包括手术治疗、化疗、放疗、靶向治疗及免疫疗法。免疫疗法相比是一种新型治疗肿瘤的方式，主要通过增强或激活免疫细胞的功能杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤生长。但是临床统计仅有20％～40％的患者能从PD
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1免疫疗法中获益，因此还需要进一步的优化肿瘤的治疗方式。
[0003]mRNA疗法是基于分子生物学和免疫学的一种疗法，是通过设计合成目的基因的mRNA，利用递送系统递送到人体或动物体的一种方法技术。mRNA疗法具有多重优势，首先，mRNA疗法安全性高，mRNA不进入细胞核，在胞质中进行翻译表达；另外，mRNA易于通过生理代谢途径完全分解，因此不会成为宿主体内平衡的负担；其次，mRNA具有自我辅助特性，通过肿瘤坏死因子
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α(TNF
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α)，干扰素
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α(IFN
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α)和免疫细胞分泌的其他细胞因子激活强烈而持久的适应性免疫反应；此外，mRNA理论上可以满足编码和表达各种蛋白质所需的所有遗传信息，且mRNA通过体外转录(IVT)过程合成，制造工艺简单，易于批量生产，同时mRNA研发周期短，能够快速开发新型治疗mRNA；最后，mRNA理论上可以翻译产生大量蛋白质，一定程度上降低了药物用量，这也促使多种mRNA可以一起施用。
>[0004]mRNA疗法现主要被设计用于预防和治疗病毒感染及肿瘤，现已有多项mRNA疫苗进入到临床研究阶段，并有产品已经正式投入临床使用，例如针对SARS
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CoV
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2病毒的疫苗。用于癌症治疗的基因疗法可以涉及到输送能够杀伤或抑制癌细胞的基因、能够增强针对癌细胞免疫应答的基因、能够修复或代替基因突变或改变的基因、或能够使癌细胞对化疗或放疗更为敏感的基因，但是现有技术中的药物递送效率较低而且相对并不稳定，利用mRNA进行肿瘤内递送治疗肿瘤目前尚未见报道。

技术实现思路

[0005]针对现有研究内容的不足，本专利技术要解决的问题是提供一种mRNA疫苗及其在瘤内递送增强肿瘤治疗效果中的应用。
[0006]本专利技术提供的mRNA疫苗至少含有第一开放阅读框和第二开放阅读框，所述第一开放阅读框编码目的蛋白；所述第二开放阅读框表达选自CCL5、CXCL9、CXCL10、IL15、CXCL16、Myb基因序列中的一种或多种组合。
[0007]进一步的，所述目的蛋白可选自针对肿瘤的蛋白，包括但不限于：EpCAM、抗
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CTLA
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4、抗
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PD1、抗
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PDL1、A2A、抗
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FGF2、抗
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FGFR/FGFR2b、抗
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SEMA4D、CCL5、CD137、CD200、CD38、CD44、CSF
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1R、CXCL10、CXCL13、内皮素B受体、IL
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15、IL
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21、IL
‑
35、ISRE7、LFA
‑
1、NG2(也称为SPEG4)、SMAD、STING、ΤGFβ和VCAM1的蛋白质；IFNγ、IFNα、ΙFΝβ、TNFα、IL
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12、IL
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2、IL
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6、IL
‑
8和GM
‑
CSF的促炎细胞因子等。
[0008]进一步的，所述第二开放阅读框表达CCL5、CXCL9、CXCL10、IL15、CXCL16、Myb基因序列中的组合；
[0009]进一步的，所述第二开放阅读框表达CCL5、CXCL9的融合蛋白，其中，上述两种序列之间经生物信息学分析后，对其进行截短和替代，将各自的优化序列通过RRKK连接形成带正电的双亲性结构，便于与带负电的磷脂双分子层固定和插入，具体序列如SEQ ID NO.1(SPYSDTTPACFAYIARPLPRHIKEYFYTSGKCSNAVVFVTARKNRQVCANPEKKWVAREY INSLEMSRRKKTPVAVRKGRCCISTNQGTIHALQSLKDLKQFAPSPSCAEKIEIIATLAKNGV QTCLNAPDSADAV)所示。
[0010]进一步的，所述第二开放阅读框表达CCL5、CXCL9、CXCL10、IL15、CXCL16、Myb基因序列中的优化序列组合，其中，上述6种序列之间经生物信息学分析后，对其进行截短和替代，将各自的优化序列通过RRKK、GS重复单元、AA或者直接连接形成带正电的双亲性结构，便于与带负电的磷脂双分子层固定和插入，具体序列如SEQ ID NO.2(SPYSDTATPCFAYIARPLPRHIKEYFYTSGKCSNAVVFVTARKNRQVCANPEKKWVAREYI NSLEMSRRKKTPVAVRKGRCCISTNQGTIHLQSLKDLKQFPSPSACAEKIEIIATLAKNGVQTCLNAPDSADAVAARCTCISISNQPVNPRSLEKEIIPASQFCPRVEIIATMKKAGEKRCLNPESKAINLLKAPHLRSISIQCYLCLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANSLSNGNVTESGCKTQPGNGNEGSVTGSCYCGKRISSDSPPSVQFMNRLRKHLRAYHRCLYYTRFQLLSWSVCGNKDPWVQEL MSCLDLKECGHAYSGIVAHQKHLPTSPPISQASEGASSDIHTPAQMLLSTLQSTQRPTLPVGSLSSDKELTRPNETTIHTAGHSLAAGPEAGENQKQPEGS)所示。
[0011]进一步的，所述mRNA疫苗还包括5
’‑
帽结构、3
’
端聚腺苷酸序列、5
’
UTR和3
’
UTR中的至少一种；
[0012]优选地，5
’‑
帽结构优选包括ARCA、m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pG、m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)pG、m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeG)pG、m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeA)pG、mCAP、dmCAP、tmCAP或dmCAP；
[0013]优选地，3
’
端聚腺苷酸序列的长度为50
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200个A，更优选为80
‑
200个A；
[0014]优选地，5
’
UTR的长度为10
‑
2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种组合物，其包含配制在药学上可接受的载体中的有效量的信使核糖核酸(mRNA)，其特征在于，该信使核糖核酸包含第一开放阅读框和第二开放阅读框，所述第一开放阅读框编码目的蛋白；所述第二开放阅读框表达选自CCL5、CXCL9、CXCL10、IL15、CXCL16、Myb基因序列中的一种或多种组合。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述目的蛋白选自针对肿瘤的治疗蛋白，选自：EpCAM、抗
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CTLA
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4、抗
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PD1、抗
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PDL1、A2A、抗
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FGF2、抗
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FGFR/FGFR2b、抗
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SEMA4D、CCL5、CD137、CD200、CD38、CD44、CSF
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1R、CXCL10、CXCL13、内皮素B受体、IL
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15、IL
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21、IL
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35、ISRE7、LFA
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1、NG2(也称为SPEG4)、SMAD、STING、ΤGFβ和VCAM1的蛋白质；IFNγ、IFNα、ΙFΝβ、TNFα、IL
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12、IL
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2、IL
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6、IL
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8和GM
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CSF的促炎细胞因子。3.如权利要求1所述的组合物，其中所述第二开放阅读框表达CCL5、CXCL9的重组融合蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示。4.如权利要求1所述的组合物，其中所述第二开放阅读框表达CCL5、CXCL9、CXCL10、IL15、CXCL16、Myb基因的重组融合蛋白，其氨基酸序列如...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄俊，刘相国，杨晓燕，宋金帅，
申请(专利权)人：山东元辰生物医药科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：